科创中国

目的:研究不同低氧暴露时间对小鼠骨骼肌雌激素受体相关受体(estrogen receptor related receptors α,ERRα)与丙酮酸脱氢酶激酶4(PαK4)DNA结合活性及PDK4基因表达的影响,以探讨低氧条件下影响糖代谢及其信号分子之间的相互调节可能的机制.方法:野生小鼠随机分为常氧组、低氧组(氧浓度11.25%左右,模拟海拔高度4500m),而后又进一步分为0天、7天、14天、28天组,每组10只.低氧暴露时间为每天8h.同天数的小鼠常氧组与低氧组脱颈处死.染色质免疫共沉淀法(Chip)测定ERRα/PDK4结合活性,Real-TimePCR测定骨骼肌PDK4mRNA含量.结果:1)随着天数增加,低氧组ERRα/PDK4的结合活性有增加的趋势,但没有显著性差异;2)随着天数增加,低氧28天组PDK4mRNA相对表达量与0天组相比显著性升高(P〈0.05),且与28天常氧组相比也有显著性增加(P〈0.05).结论:低氧28天小鼠骨骼肌PDK4mRNA相对表达量显著增加,但其ERRα/PDK4的结合活性并没有显著性变化,推测低氧下蛾并不是促进PDK4mRNA表达的主要转录因子.

目的:研究siRNA特异干扰沉默异柠檬酸脱氢酶2(IDH-2)基因后对人小细胞肺癌细胞NCI-H446生长作用的影响。方法:用siRNA沉默NCI-H446细胞的IDH-2基因表达,用real-time PCR及Western blotting技术检测mRNA-IDH-2和蛋白的表达;CCK-8法测定细胞生长抑制,Western blotting 检测MAPK p42的表达和流式细胞术检测细胞周期;用Transwell细胞迁移系统检测siRNA-IDH-2对NCI-H446细胞迁移能力的影响;将转染siRNA-IDH-2、阴性对照siRNA的细胞或未转染细胞皮下接种于 BALB/c 裸鼠背部,观察移植瘤的生长状况。结果:siRNA-IDH-2有效沉默NCI-H446细胞中IDH-2的表达;与对照组相比,下调IDH-2基因表达抑制NCI-H446细胞的增殖;MAPK p42蛋白表达下降且S期细胞明显增加;下调IDH-2基因显著抑制了NCI-H446细胞的迁移能力;体内实验显示siRNA-IDH-2组的肿瘤体积明显小于对照组。结论: siRNA-IDH-2能显著抑制IDH-2基因在人小细胞肺癌细胞NCI-H446中的表达,并降低细胞迁移效率,在体外和体内明显抑制NCI-H446细胞的生长。

目的 比较丙酮酸钠林格液和乳酸钠林格液对烧伤休克犬血流动力学及器官功能的影响.方法 28只Beagle犬制备成50%总体表面积(TBSA)Ⅲ度烧伤模型,按随机数字表法分为3组:单纯烧伤组(NR组,n=8)伤后不补液;乳酸钠林格液组(RL组,n=10)和丙酮酸钠林格液组(RP组,n=10)于伤后30 min根据Parkland公式经颈外静脉分别输注乳酸钠林格液或丙酮酸钠林格液.在动物清醒状态下,观察伤前和伤后2、6、8、12、24 h血流动力学、器官功能指标及生存情况.结果 伤后24 h,NR组动物全部死亡,RL组、RP组全部存活.与伤前比较,NR组、RL组、RP组伤后2h平均动脉压(MAP)、心排血指数(CI)、左心室内压最大变化速率即显著降低[MAP (mmHg,1 mmHg=0.133 kPa):45.33±7.78比141.67±5.98,91.33±10.25比142.33±6.16,98.67±9.54比142.83±5.47;CI(mL· s-1·m-2):8.17±0.83比48.34±3.33,16.84±2.17比47.34±1.67,19.00±1.50比47.34±1.33;左心室内压最大变化速率(mmHg/s):426.83±51.91比1 372.50±39.61,594.00±88.23比1 363.83±44.92,645.00±66.82比1 395.83±19.49,均P< 0.05],外周血管阻力(SVR)及丙氨酸转氨酶(ALT)、血肌酐(Cr)、血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、二胺氧化酶(DAO)等器官功能指标均显著升高[SVR(kPa·s· L-1):1 322.50±36.37比281.45±8.84,777.50±41.84比289.72±6.70,571.40±40.01比286.27±8.66;ALT (U/L):89.50± 4.11比40.57±3.63,89.25±4.88比37.92±2.62,86.30±5.61比38.47±3.50;Cr(μmol/L):75.62±4.61比41.58±2.78,77.00±5.92比46.55 ±3.17,74.13 ±2.56比45.65±1.83;CK-MB (kU/L):13.122±0.282比1.557±0.009,8.885±0.272比1.497±0.009,8.692±0.180比1.490±0.005; DAO(kU/L):2.26±0.14比0.25±0.02,1.50±0.07比0.25±0.01,1.37±0.07比0.25±0.02,均P<0.05].烧伤后NR组各指标持续恶化,直至死亡.两静脉补液组血流动力学及器官功能指标逐渐恢复,其中RP组CI、SVR、DAO于伤后2h起即显著优于RL组(均P<0.05),左心室内压最大变化速率、CK-MB于伤后6h起显著优于RL组[左心室内压最大变化速率(mmHg/s):1 082.33±63.59比1 018.60±47.36,CK-MB(U/L):7 898.70±255.74比8 438.70±442.00,均P< 0.05],MAP(mmHg)仅于伤后6h显著优于RL组(124.67±9.39比114.33±9.16,P<0.05),Cr(μmol/L)仅于伤后24 h显著优于RL组(53.42±4.99比60.77±3.11,P<0.05).结论 丙酮酸钠林格液用于50%TBSA烧伤犬静脉补液时,其改善血流动力学指标、减轻器官功能损伤的复苏效果显著优于乳酸钠林格液.

目的研究S型氯代甘油醇(SACH)对大鼠精子运动和超活化的影响和可能机制.方法 20只成熟雄性SD大鼠随机分为4组,分别给予0、2.5、5.0和10mg/kg BW SACH,连续灌胃染毒52天.取附睾尾精子,获能条件下培养5h,以计算机辅助精子分析系统检测精子运动和超活化运动,同时检测精子特异的3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDS)活性、三磷酸腺苷(ATP)和环磷酸腺苷(cAMP)水平,观察己酮可可碱(PTF)对SACH的拮抗作用.结果 SACH染毒组大鼠精子曲线运动速率(VCL)、平均路径速率(VAP)、直线运动速率(VSL)和精子头侧摆幅度(ALH)与对照组相比受到显著抑制(P

以1,2:5,6-双亚环己基-D-甘露醇为手性骨架,合成含有联苯基团的新型手性tropos配体;分别以1,2:5,6-双异丙叉-D-甘露醇和1,2:5,6-双亚环己基-D-甘露醇为原料,合成系列双齿亚磷酸酯配体,将这些配体应用于铑催化α-乙酰氨基肉桂酸甲酯5a和α-苯酰氨基肉桂酸甲酯5b氢化反应中,考察配体结构,溶剂,底物/催化剂的摩尔比对反应对映选择性的影响,优化了反应条件;在底物是α-乙酰胺基肉桂酸甲酯时,配体的双异丙叉骨架与(R)-联萘部分是匹配组合,反应对映选择性高达93.5%.在优化的反应条件下,尝试七个苯环含不同取代基团的底物,无论供电子基团在芳环的邻位还是对位,其氢化产物的对映选择性均高于相应位置为吸电子基团的.

目的:探讨高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中整合素连接激酶小干扰RNA(ILK siRNA)对糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)磷酸化和β-连环蛋白(β-catenin)核内表达的影响及意义.方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞系HKC,分为正常对照组(NG)、高糖组(HG)、高糖+阴性转染对照组 (HG+HK)和高糖+ILK siRNA组(HG+ILK siRNA).倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达.RT-PCR及Western blotting检测ILK mRNA及蛋白表达水平;免疫细胞化学检测磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)和β-catenin表达.Western blotting检测总GSK-3β、p-GSK-3β、核β-catenin、总β-catenin、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平.结果:(1)倒置荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达,证实构建的siRNA重组质粒成功转染HKC细胞;(2)与HG和 HG+HK组相比,HG+ILK siRNA组ILK mRNA及蛋白水平下降,但较NG组表达仍高;(3)HG+ILK siRNA组ILK基因沉默后,p-GSK-3β与核β-catenin蛋白表达较HG及HG+HK组均下降,但较NG组表达仍高.而总GSK-3β与总β-catenin 在各组表达无明显差异.结论:ILK、GSK-3β和β-catenin可能参与了高糖介导的肾小管上皮细胞转分化过程.ILK可能通过调节Wnt/β-catenin途径下游效应蛋白GSK-3β和β-catenin的表达而促使肾小管上皮细胞转分化.

目的:探讨高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中整合素连接激酶小干扰RNA(ILK siRNA)对糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)磷酸化和β-连环蛋白(β-catenin)核内表达的影响及意义.方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞系HKC,分为正常对照组(NG)、高糖组(HG)、高糖+阴性转染对照组 (HG+HK)和高糖+ILK siRNA组(HG+ILK siRNA).倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达.RT-PCR及Western blotting检测ILK mRNA及蛋白表达水平;免疫细胞化学检测磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)和β-catenin表达.Western blotting检测总GSK-3β、p-GSK-3β、核β-catenin、总β-catenin、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平.结果:(1)倒置荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达,证实构建的siRNA重组质粒成功转染HKC细胞;(2)与HG和 HG+HK组相比,HG+ILK siRNA组ILK mRNA及蛋白水平下降,但较NG组表达仍高;(3)HG+ILK siRNA组ILK基因沉默后,p-GSK-3β与核β-catenin蛋白表达较HG及HG+HK组均下降,但较NG组表达仍高.而总GSK-3β与总β-catenin 在各组表达无明显差异.结论:ILK、GSK-3β和β-catenin可能参与了高糖介导的肾小管上皮细胞转分化过程.ILK可能通过调节Wnt/β-catenin途径下游效应蛋白GSK-3β和β-catenin的表达而促使肾小管上皮细胞转分化.

目的:观察磷酸肌酸钠对小儿EB病毒感染后心肌的保护作用.方法:EB病毒感染后心肌磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)及肌钙蛋白T(c Tn T)异常患儿80例,随机分为对照组(40例)和治疗组(40例).对照组给予常规抗病毒及对症支持治疗,治疗组在对照组治疗基础上加用磷酸肌酸钠,比较两组患儿治疗前后心肌CK-MB、c Tn T及心电图的变化.结果:治疗前治疗组CK-MB为(50.48±16.43)μg/L、c Tn T为(0.070±0.026)ng/m L,对照组CK-MB为(49.96±17.09)μg/L、c Tn T为(0.068±0.031)ng/m L,治疗后治疗组CK-MB为(20.79±7.14)μg/L、c Tn T为(0.008±0.001)ng/m L,对照组CK-MB为(38.48±11.61)μg/L、c Tn T为(0.012±0.002)ng/m L,治疗组治疗后与治疗前比较及治疗后两组间比较差异均有统计学意义(P<0.01).治疗前治疗组心电图异常21例,对照组心电图异常19例,治疗后治疗组心电图异常5例,对照组异常12例,治疗组治疗后与治疗前比较(P<0.01)及治疗后两组间比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:磷酸肌酸钠可使小儿EB病毒感染后血清CK-MB、c Tn T及心电图更好的得到恢复,使心肌细胞得到更好的保护.

目的:探讨中国式摔跤女运动员赛前训练的心肌损伤特点及茶多糖干预效果和机制.方法:选取20名优秀中国式摔跤女运动员随机分为安慰剂训练组和茶多糖训练组,先进行4周大训练量运动,经1周调整训练后再进行一次高强度专项体能训练,整个训练期每晚睡前1h进行安慰剂和茶多糖补充,剂量均为10 mg/kg体重,分别测试大训练量运动开始前一天清晨8点、2周大训练量运动结束后次日清晨8点、4周大训练量运动结束后次日清晨8点,一次高强度专项体能训练前、训练后即刻、训练后4h和24 h血液cTnT、CK-MB、MDA、SOD、CAT、GSH-Px、BV、PV、HRD、RCA、VR和TK.结果:4周大训练量运动和一次高强度专项体能训练后,两组血液cTnT、CK-MB变化趋势一致:2周大训练量运动后明显升高,4周大训练量运动后处于恢复状态;运动后即刻升高,4h达高峰,24 h基本恢复;组间同时相比,茶多糖训练组cTnT、CK-MB值均较低,且血液MDA、SOD、CAT和GSH-Px及BV、PV、HRD、RCA、VR和TK有显著改善.结论:中国式摔跤女运动员4周大训练量运动过程中心肌细胞在损伤与修复的循环中逐渐产生适应,随运动周期延长对损伤抵抗力增强;一次高强度专项体能训练后的心肌损伤多为可逆性微小损伤.茶多糖可通过增强抗氧化能力,减轻心肌氧化应激损伤;改善血液流变性,提高心肌血液有效灌流,增强心肌细胞耐缺血、缺氧能力等机制降低中国式摔跤女运动员心肌损伤.

目的:本研究探讨了二十二碳六烯酸乙酯(Et-DHA)对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响.方法:HepG2细胞用于检测Et-DHA的抑癌活性,MTT法检测Et-DHA对HepG2细胞的直接抑制作用,Hoechst 33258荧光染色观察细胞的形态特征,ELISA法检测Et-DHA处理后HepG2细胞的活性氧簇(ROS)释放量、总超氧化物歧化酶(SOD)和caspase-9活性,Western blotting法检测胞质和线粒体中Bax、Bak、Bid、Bcl-2、Smac和细胞色素C(Cyt C),以及胞质中cleaved caspase-8、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的水平;T细胞与HepG2细胞共培养,进一步观察Et-DHA处理后T细胞的增殖对HepG2细胞活性的影响,并检测了颗粒酶(granzyme)B的水平.结果:Et-DHA显著抑制HepG2细胞的生长(P<0.05),这种抑制作用具浓度效应和时程效应;Et-DHA处理后HepG2细胞的ROS释放量增加,但总SOD活性无明显变化,caspase-9活性显著上升(P<0.05);线粒体上的促凋亡蛋白Bax、Bak和Bid水平增加,而抑凋亡蛋白Bcl-2以及线粒体中Cyt C和Smac的水平降低,胞质中的Cyt C、Smac、cleaved caspase-8、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3以及cleaved Bid水平呈剂量性升高.另外 T细胞和HepG2细胞共培养组在Et-DHA的诱导下,HepG2细胞的凋亡程度与Et-DHA单独作用时相比进一步增加.在Et-DHA刺激下,T细胞内granzyme B上调,释放到HepG2 细胞内的granzyme B明显增多.结论:Et-DHA可能主要通过线粒体内源性途径以及caspase-8途径,激活caspase-3,诱导HepG2细胞凋亡,以及通过间接活化T细胞,促使 granzyme B增多,从而增强对HepG2细胞的毒性作用.