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连续传代培养对 hUC-MSCs 上NLR 家族 mRNA 表达的影响
目的:探讨连续传代培养对人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)表达NOD样受体(NLR)家族所有23个成员mRNA的影响,为改进hUC-MSCs传代培养质量与增加hUC-MSCs在实验和临床应用中的数量及安全性寻找切入途径。方法:取剖宫产无菌新生儿脐带,经胶原酶II消化结合贴壁选择分离纯化hUC-MSCs,并连续传代培养;采用流式细胞术、诱导分化和RT-qPCR对连续培养传代前后的hUC-MSCs(第3和28代)进行鉴定并对23个NLR家族成员mRNA的表达进行定量分析。结果:连续传代培养前后hUC-MSCs的细胞表型均为CD29+/CD44+/CD105+/CD31-/CD34-/CD40-/CD45-/CD106-/HLA-DR-,能被诱导为成骨和脂肪细胞,符合国际细胞治疗协会建议的MSCs基本特征。全部NLR家族成员的mRNA在培养第3代hUC-MSCs上均有表达,且NOD1、NLRC4、NL-RC5、NLRP1、NLRP3、NLRP10、NAIP、NLRX1和APAF1高表达,其余成员低表达。培养传代至第28代除NLRP10的mRNA表达上升、NLRC5和NLRX1 mRNA表达基本不变外,其余成员的mRNA表达均有所下降,其中NLRP1 mR-NA表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论:体外连续传代培养对hUC-MSCs表达NLR家族成员的影响是多向性的。这些影响与MSCs的增殖、分化及其免疫调节功能的联系有待进一步实验探讨。- 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
人脐带间充质干细胞传代后发生染色体核型变异
据文献报道人脐带间充质干细胞传代10次以上染色体核型分析都正常,我们在研究中发现,一例人脐带间充质干细胞传代到第8代,发生了染色体核型变异.现报道如下.阮光萍,潘兴华,邓永丽,姚翔,庞荣清,王金祥,王强,马丽花 - 中国优生与遗传杂志文章来源： 万方数据 -
MicroRNA-378*通过抑制CTGF促进人骨髓间充质干细胞凋亡
目的:研究年龄相关microRNA-378*(miR-378*)对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)存活和凋亡的调控作用。方法:通过microRNA芯片和qRT-PCR检测供体年龄对hMSCs中miR-378*表达的影响;通过H2 O2诱导hMSCs凋亡;通过转染miR-378*模拟物或抑制物,过表达或抑制miR-378*的表达;用MTT、LDH、caspase-3/7、TUNEL检测等方法研究其对hMSCs存活和凋亡的影响;通过siRNA研究结缔组织生长因子( CTGF)对hMSCs存活和凋亡的影响。结果:随供体年龄增加,hMSCs中miR-378*的表达增加。 H2 O2刺激可促进miR-378*表达,抑制CTGF表达。过表达miR-378*可减少hMSCs的存活,促进细胞凋亡。相反,抑制miR-378*的表达促进hMSCs的存活,减少细胞凋亡。同时抑制miR-378*和CTGF的表达,使miR-378*失去对hMSCs存活和凋亡的调控作用。直接抑制CTGF的表达可减少hMSCs的存活,促进细胞凋亡。结论:miR-378*通过抑制CTGF的表达减少hMSCs存活,促进hMSCs凋亡。董珺,曾波航,刘宁宁,莫沛,熊龙根,刘世明,黎佼 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
人骨髓间充质干细胞体外不同分离与培养方法的比较
目的 探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)理想的分离、培养方法.方法 采用密度梯度离心法和全骨髓贴壁法分离培养人骨髓干细胞,并将其分别置于普通培养瓶、60Co培养瓶中培养,应用倒置显微镜和免疫组化法观察和鉴定骨髓间充质干细胞;流式细胞术检测细胞表面标志.结果 人骨髓干细胞呈均一梭形、成纤维细胞样,形成集落样生长.60Co培养瓶细胞贴壁情况明显好于普通培养瓶,且费用低;免疫组化及流式细胞术显示CD34、CD45表达为阴性,CD29、CD44表达为阳性.60Co照射处理的培养瓶结合采用全骨髓贴壁法分离培养法获得的骨髓干细胞活性高,增殖力强,克隆形成早,传代时间短.结论 全骨髓贴壁法和密度梯度离心法均可获得高纯度贴壁生长的骨髓干细胞,其中60Co照射处理的培养瓶结合采用全骨髓贴壁法分离培养简单易行,骨髓干细胞增殖快,活性好,传代力持久.可以收获大量、高纯度的MSCs;本实验为MSCs进一步的研究与临床应用提供了实验方法及依据.刘贤华,仝青英,白晓东 - 武警医学文章来源： 万方数据 -
晚期糖基化终产物对人脂肪间充质干细胞功能影响的体外研究
目的:探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对人脂肪来源的间充质干细胞(hADSCs)促进创伤修复功能的影响.方法:体外培养hADSCs,实验分为牛血清白蛋白(BSA)对照组、低浓度糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)效应组和高浓度AGE-BSA效应组.采用WST法和Transwell迁移实验检测各组细胞增殖和迁移情况.应用实时定量PCR和ELISA检测各组细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)和胰岛素样生长因子1(IGF-1)的表达.结果:与对照组相比,AGE-BSA组增殖能力和迁移能力明显下降(P<0.05),VEGF、HGF和IGF-1 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05).结论:AGEs能损伤hADSCs的促进创伤修复功能,因而能够影响hADSCs治疗糖尿病皮肤溃疡病的治疗效果.王哲,刘晓玉,张殿宝,王秋实 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
间充质干细胞与乳腺癌转移的相关性
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁妇女的健康与生命.转移是恶性肿瘤的基本生物学特征,也是乳腺癌患者死亡的主要原因.最新研究表明,肿瘤细胞与微环境之间的相互作用是肿瘤转移的重要机制.早期多数研究将重点放在肿瘤细胞上,随着研究的不断深入,人们发现肿瘤组织中存在的非肿瘤细胞对肿瘤的形成和发展有着十分重要的作用.间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)是杨海玉,刘勇 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
绿色荧光蛋白转基因小鼠不同源性间充质干细胞原代培养及生物学特性比较
目的:探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠脐带和骨髓源性间充质干细胞( MSCs )的体外分离培养方法、生物学特性、表面标志及多向分化潜能。方法:应用Ⅱ型胶原酶消化培养法分离脐带MSCs及密度梯度离心法分离骨髓MSCs进行体外培养。在倒置显微镜下观察2种细胞的生长特点,运用生长曲线和MTT法检测其原代细胞增殖能力,台盼蓝法测定细胞传代成活率,采用流式细胞术测定2种第3代( P3)细胞DNA周期及表面标志物的表达,并比较其向成脂细胞和成骨细胞的分化潜能。结果:酶消化法分离培养的脐带MSCs 1 d后,细胞贴壁呈成纤维形,2 d后呈漩涡状生长且增殖明显,3 d后达80%融合即可传代;应用密度梯度离心法分离骨髓MSCs,体外培养4 d后,细胞贴壁呈圆形、梭形和多角形生长,5 d后呈克隆样生长且增殖明显,7 d后达80%融合即可传代。原代培养的脐带MSCs生长曲线近似“S”形,骨髓MSCs 生长曲线较平缓;MTT法显示脐带MSCs在3~5 d增殖较明显,骨髓MSCs 7 d后细胞增殖较明显。2种P3细胞传代成活率均为96%以上,G0/G1期细胞均为85%以上,无明显差异(P>0.05);2种P3细胞CD44、CD90和CD105阳性率均为(60.7±2.3)%以上高表达,CD45、CD19、CD14和CD79a均为(25.6±4.8)%低表达,两者无明显差异( P>0.05);2种MSCs在体外均具有向成骨细胞和成脂细胞分化的潜能,脐带MSCs向成骨及成脂细胞分化率均为90%以上,与骨髓MSCs的分化潜能比较有显著差异( P<0.05)。结论:脐带MSCs较骨髓MSCs具有较强的增殖能力及分化潜能。绿色荧光蛋白转基因小鼠的脐带MSCs可作为较好干细胞示踪的细胞源。- 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
MicroRNA-196a通过HOXB7调控人骨髓间充质干细胞的增殖功能
目的:研究年龄相关microRNA-196a(miR-196a)对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)增殖功能的调控作用.方法:通过MTT研究年龄对hMSCs增殖能力的影响.通过microRNA芯片和qRT-PCR检测年龄对miR-196a表达的影响.通过转染miR-196a模拟物或抑制物,研究其对hMSCs增殖能力的影响.通过萤光素酶报告基因系统证实HOXB7为miR-196a的靶基因.通过siRNA研究HOXB7对碱性成纤维细胞生f长因子(bFGF)表达及hMSCs增殖功能的影响和研究bFGF对hMSCs增殖功能的影响.结果:随年龄增加,hMSCs的增殖能力下降,miR-196a的表达增加.miR-196a可抑制hMSCs的增殖.抑制miR-196a的表达可促进hMSCs的增殖.同时抑制miR-196a和HOXB7的表达,使miR-196a失去对hMSCs增殖能力的调控作用.抑制HOXB7的表达可使bFGF的表达下调.直接抑制HOXB7或bFGF的表达可抑制hMSCs的增殖.结论:miR-196a通过抑制HOXB7及bFGF的表达导致hMSCs增殖能力下降.黎佼,董珺,张振辉,田朝伟,成传访,吴功雄,刘世明 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
白细胞介素4调节人脐带间充质干细胞的增殖和造血支持能力
目的:间充质干细胞(MSC)被认为在多种自身免疫系统疾病和移植物抗宿主病中有良好的应用前景,但是其在各种炎症因子作用下生物学功能的变化仍然值得进一步研究.本文探讨了白细胞介素4(IL-4)对脐带间充质干细胞(UC-MSC)的多种生物学特性以及造血支持作用的影响.方法:IL-4刺激UC-MSC后,使用流式细胞术检测UC-MSC免疫表型;使用MTT检测细胞活力改变,并使用Brd U-ELISA的方法,检测其增殖能力;使用油红O和茜素红染色来检测UC-MSC成脂和成骨分化;使用实时荧光定量PCR的方法,检测UC-MSC中mRMA表达的差异;收集IL-4刺激的UC-MSC的上清,检测其在促进CD34+细胞集落形成能力的变化.结果:IL-4刺激后,UC-MSC表面的CD11b、CD19、CD34、CD45、CD73、CD90、CD105、人类白细胞抗原(HLA)-DR和HLA-ABC并未有明显改变.MTT和Brd U-ELISA都表明,IL-4处理组UC-MSC的增殖在72 h后相对于未处理组明显下降(P<0.05).IL-4处理后,UC-MSC成脂和成骨分化能力未检测到明显的变化.此外,IL-4可以明显增强UC-MSC中IL-6mRNA表达(P<0.01),增强UC-MSC培养上清的促CD34+细胞粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)的集落形成能力(P<0.01).结论:IL-4可以抑制UC-MSC增殖,促进UC-MSC造血支持能力.杨舟鑫,韩之波,贾兵兵,王国付 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
梓醇促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖过程中W nt信号通路的变化
目的:观察梓醇促进大鼠骨髓间充质干细胞( bone marrow mesenchymal stem cells , BMSCs )增殖过程中Wnt信号通路的变化。方法:(1)采用机械分离及差速贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,将细胞分为空白对照组与梓醇(1.0 mg/L)处理组,流式细胞术检测各组细胞细胞周期分布情况,计算其增殖指数。(2)实时荧光定量PCR法检测各组细胞中Wnt3a、Wnt5a、Wnt11及β-catenin mRNA的表达水平;Western blotting技术检测各组细胞β-catenin蛋白的表达变化。结果:(1)空白对照组与梓醇处理组BMSCs增殖指数分别为8.90%±0.46%和17.93%±1.68%(P<0.01)。(2)与空白对照组相比,梓醇处理组Wnt5a、Wnt11、β-catenin mRNA及β-catenin蛋白表达均明显提高,但Wnt3a mRNA表达无显著变化。结论:梓醇在促进BMSCs增殖过程中可同时激活经典与非经典Wnt信号通路。傅淑平,杨丽,洪浩,偶晨,张荣华 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据
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