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重组结核分枝杆菌CFP10的克隆与表达
目的:克隆和表达结核分枝杆菌CFP10,并分析其免疫学活性.方法:自结核分枝杆菌标准株H37Rv提取基因组DNA,PCR扩增cfp10基因,克隆至T载体pMD18T,转化入大肠杆菌JM109,菌落PCR鉴定阳性克隆并测序分析.将测序正确的pMD18-cfp10的cfp10基因亚克隆至表达载体PQE30,构建重组质粒PQE30-cfp10,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,PCR和双酶切鉴定阳性重组体,IPTG诱导CFP10表达,亲和层析纯化,western-blot分析其免疫活性.结果:成功构建PQE30-cfp10重组表达质粒,表达、纯化获得分子量约10kDa的CFP10,并能被结核病人血清识别.结论:克隆表达获得具有免疫活性的重组结核分枝杆菌CFP10.杨双,袁仕善,谭云洪,邓志高,孙文霞,李民 - 湖南师范大学学报(医学版)文章来源： 万方数据 -
玻璃体腔注射抗血管内皮生长因子药物治疗早产儿视网膜病变的研究现状
与冷冻及激光光凝治疗比较,玻璃体腔注射抗血管内皮生长因子(VEGF)药物治疗早产儿视网膜病变(ROP)可减少对视网膜解剖结构的破坏,促使周边视网膜继续血管化,降低视网膜脱离、视野缺损及高度近视的发生.在ROP1区病变及屈光间质混浊等激光光凝难以施行的患眼中有其独特优势.选择合理的药物和剂量,掌握最佳治疗时间,注意避免局部并发症及全身安全性等方面的问题,对进一步提高玻璃体腔注射抗VEGF药物治疗ROP的应用水平具有重要意义.易佐慧子,陈长征 - 中华眼底病杂志文章来源： 万方数据 -
猪圆环病毒2型河南株全基因组的克隆与序列分析
利用PCR方法,对河南郑州、南阳、焦作等地采集的疑似猪圆环病毒2型(PCV2)感染的病料进行检测.PCR检测为阳性的病料经处理后,接种无PCV污染的PK-15细胞中盲传6代,克隆11株PCV2全基因组并进行序列分析.结果表明,11株PCV2中有10株基因组全长为1 767bp,基因组分型为PCV2b,1株为1 768bp,说明PCV2b是河南省断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)发生的主要因素;11个毒株的同源性位于94.9%~100%,与其他毒株的同源性为94.7%~100%;10株基因组为1 767bp的毒株处于一大分支上,遗传进化比较稳定;本试验为PCV2在河南地区的分子流行病学、遗传变异及防治奠定了基础.王亚丹,卢权威,陈红英,崔保安,王淑娟,朱前磊,王子馨,钞安军 - 中国兽医学报文章来源： 万方数据 -
贝伐单抗和雷珠单抗治疗渗出型老年性黄斑变性有效性meta分析
目的 系统评价贝伐单抗和雷珠单抗治疗渗出型老年性黄斑变性(AMD)的有效性.方法 计算机检索荷兰医学文摘数据库Embase、美国临床医学期刊全文数据库Ovid、美国国立医学图书馆医学数据库Pubmed、中国知网、万方数据库、维普中文期刊数据库.收集国内外公开发表的关于贝伐单抗和雷珠单抗治疗渗出型AMD的随机对照试验.检索时限截止至2013年11月.按照纳入与排除标准筛选文献、提取资料和进行质量评价.用RevMan 5.2.6软件进行统计分析.比较贝伐单抗和雷珠单抗治疗前与治疗后3、6、12个月渗出型AMD患者的视力和黄斑中心凹厚度.结果 最终纳入5个研究,共1954例渗出型AMD患者.其中,贝伐单抗治疗组967例,雷珠单抗治疗组987例.Meta分析结果显示,贝伐单抗治疗组与雷珠单抗治疗组视力提高值比较,差异无统计学意义[3个月:加权均数差(WMD) =0.32,95%可信区间(CI)为-0.84~1.49,P=0.59;6个月:WMD=0.47,95% CI为-0.67~1.62,P=0.42;12个月:WMD=0.84,95% CI为-0.23~1.90,P=0.12];贝伐单抗治疗组与雷珠单抗治疗组黄斑中心凹厚度降低值比较,差异无统计学意义(3个月:WMD=6.21,95% CI为-6.23~18.65,P=0.33;6个月:WMD=4.06,95% CI为-6.16~14.27,P=0.44;12个月:WMD=-5.39,95% CI为-14.41~3.63,P=0.24).结论 贝伐单抗与雷珠单抗治疗渗出型AMD具有相似的治疗效果.杜宇翔,郭大东,司俊康,唐凯,毕宏生 - 中华眼底病杂志文章来源： 万方数据 -
黑龙江大豆轮作和连作土壤细菌群落多样性比较
为研究大豆轮作和连作对土壤细菌群落多样性的影响,提取黑龙江大豆轮作和连作土壤微生物总DNA,采用细菌通用引物27F和1492R扩增了土壤细菌16S rDNA片段,构建了细菌16S rDNA克隆文库,并对文库中的细菌群落多样性进行了分析.通过16S rDNA序列同源性分析,发现76.5%克隆序列与环境中未培养细菌的16S rDNA序列有较高的相似性,仅有23.5%的克隆序列与GenBank数据库中可培养细菌有较高的相似性,表明黑龙江大豆田土壤中的多数细菌尚未培养.系统发育分析表明黑龙江土壤细菌分属于6大类群,其中变形菌Proteobacteria和酸杆菌Acidobacteria所占比例较大,另有少量厚壁菌Firmicutes、放线菌Actinobacteria、芽单胞菌Gemmatimonadetes和未分类的细菌.大豆轮作土壤细菌多样性更为丰富,并以变形菌为优势细菌类群;而大豆连作土壤细菌多样性有所减少,以酸杆菌为优势细菌类群.表明黑龙江大豆田土壤中细菌多样性十分丰富,其种植方式对土壤细菌群落结构影响较大.朱英波,史凤玉,张瑞敬,武云鹏 - 植物保护学报文章来源： 万方数据 -
禾谷缢管蚜水通道蛋白基因RpAQP1的克隆、分子特性和表达分析
为探究禾谷缢管蚜Rhopalosiphum padi(Linnaeus)水通道蛋白基因Rp AQP1的序列特征及其在不同龄期的表达,利用RT-PCR和RACE技术克隆了Rp AQP1基因的c DNA全序列,采用生物信息学软件分析了Rp AQP1编码蛋白的特性,利用qRT-PCR分析了Rp AQP1在不同龄期的表达量.结果显示:禾谷缢管蚜水通道蛋白基因Rp AQP1的c DNA全长为1 216 bp,其750 bp的开放阅读框编码250个氨基酸,蛋白分子量为27.36 k D.Rp AQP1属于水通道蛋白亚家族DRIP(果蝇内嵌蛋白Drosophila integral protein)的一员,具有6个跨膜区,2个保守的NPA结构单元和1个压缩区域Ar/R;qRT-PCR结果显示,Rp AQP1在整个发育历期均有表达,其在2龄若蚜中表达水平最高,是成蚜表达量的1.432倍;在4龄若蚜中表达量最低,为成蚜表达量的0.444倍,显著低于其它龄期,而其余各龄期Rp AQP1表达量无显著差异.左亚运,李晓叶,李玉婷,王康,乔宪凤,陈茂华 - 植物保护学报文章来源： 万方数据 -
应用奇异变形杆菌多克隆抗体提高沙门菌分离鉴定准确性的研究
在沙门菌检测过程中,奇异变形杆菌经常作为一种假阳性菌而出现.为提高沙门菌分离鉴定的准确性,我们制备了奇异变形杆菌的多克隆抗血清.抗血清经protein G抗体纯化柱纯化,与奇异变形杆菌混合后,在扫描电镜下观察二者的相互作用,分析该抗体是否能够在体外特异性的裂解奇异变形杆菌.经扫描电镜分析,制备的多克隆抗体在2h后将奇异变形杆菌裂解.同时,将纯化的抗体分别添加到氯化镁孔雀绿肉汤(MM)和亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)中分析对奇异变形杆菌的抑菌效果.在实际应用中,针对临床的100多份样本,进行改进方法与常规方法的比较,结果显示,改进的方法能够有效排除因奇异变形杆菌带来的假阳性干扰,明显提高了沙门菌分离鉴定的准确性.肖西志,吴达,孙敏,邓明俊,岳志芹,高宏伟,朱来华,孙涛,吴信海,徐彪,梁成珠,张彦明 - 中国兽医学报文章来源： 万方数据 -
丹参果糖磷酸酶基因的克隆和功能研究
丹参是著名的药用植物,在中国、日本、美国和欧洲国家被广泛地用于心脑血管系统疾病的治疗.笔者首次从丹参中克隆出了一个新的果糖磷酸酶基因,并将其命名为SmFBA,GenBank编号为FJ540907.SmFBA的cDNA全长含有1 390个核苷酸,包含一个完整的1 065 bp的开放阅读框,编码355个氨基酸残基.SmFBA基因全长含有3个外显子和2个内含子.生物信息学分析显示SmFBA蛋白预测的等电点为5.60,预测的分子量为37.78 ku,和其他植物物种中果糖磷酸酶具有很高的序列同源性.用Southern杂交技术显示SmFBA在丹参基因组中呈低拷贝.该基因在丹参根、茎、叶等器官都表达,根中表达量最高.体外重组表达的SmFBA在大肠杆菌中具有酶活性,并且能够提高大肠杆菌的耐盐性.这项研究进一步拓展了人们对高等植物糖酵解途径的认识.谭何新,刘颖,张磊 - 药学实践杂志文章来源： 万方数据 -
曲妥珠单克隆抗体耐药分子机制及其疗效预测标志物的研究进展
HER-2在20%~30%的乳腺癌中过度表达[1],并且与肿瘤多种恶性生物学行为直接相关.HER-2阳性乳腺癌具有独特基因表达谱,同其他类型乳腺癌相比,具有分化差、淋巴结转移率高、易复发及远处转移的特点,总体预后很差.单药曲妥珠单克隆抗体一线治疗HER-2阳性晚期乳腺癌的客观有效率为19%~26%,与化疗联合后有效率可提高至50%,OS达到25.1个月[2],显著杜丰,徐兵河 - 中华乳腺病杂志(电子版)文章来源： 万方数据 -
玻璃体腔注射抗血管内皮生长因子单克隆抗体ranibizumab联合激光光凝治疗急进性后部型早产儿视网膜病变的疗效观察
目的 观察玻璃体腔注射抗血管内皮生长因子单克隆抗体ranibizumab(商品名Lucentis)联合激光光凝治疗急进性后部型早产儿视网膜病变(AP-ROP)的安全性和有效性.方法 经早产儿视网膜病变(ROP)筛查和临床检查确诊为AP-ROP的35例患儿70只眼纳入研究.所有患眼病变均位于后极部.其中,病变位于1区42只眼,病变位于2区28只眼.合并有虹膜新生血管或扩张的虹膜血管46只眼,合并玻璃体积血19只眼.所有患儿在确诊后12 h内接受玻璃体腔注射ranibizumab治疗.观察全身及眼部的不良反应情况.注药后1周,观察患眼眼底情况,比较玻璃体腔注射ranibizumab前后视网膜血管纡曲和扩张程度的变化.所有患眼均在玻璃体腔注射ranibizumab治疗后联合激光光凝治疗,激光治疗距离注药的时间间隔为1~10周,平均间隔时间(5.1±2.6)周.治疗后随访时间6~18个月,平均随访时间(10.3±3.9)个月.主要观察视网膜病变转归情况.对于随访过程中出现病情进展至4期或5期的患儿,行保留晶状体的玻璃体切割手术或玻璃体切割联合晶状体切除手术.结果 玻璃体腔注射ranibizumab后,无患儿发生眼部并发症及全身不良反应.出现新增的视网膜前出血12只眼,占所有患眼的17.1%;但出血均自行吸收.随访期间,所有的晶状体均保持透明,未发生医源性裂孔.玻璃体腔注射ranibizumab后1周,所有虹膜新生血管或扩张的虹膜血管均消退.玻璃体积血明显吸收16只眼,占合并有玻璃体积血患眼的84.2%.后极部血管纡曲、扩张明显消退61只眼,占所有患眼的87.1%;视网膜血管不同程度向周边生长59只眼,占所有患眼的84.3%.1区病变42只患眼中,血管发育至2区32只眼,占76.2%.2区病变28只患眼中,血管发育至2~3区交界处24只眼,占85.7%.玻璃体腔注射ranibizumab联合激光光凝治疗后,视网膜血管网或嵴消退、附加病变消退且视网膜平复62只眼,占所有患眼的88.6%.视网膜表面纤维增生膜持续加重,发生牵引性视网膜脱离8只眼,占所有患眼的11.4%.其中,进展至4期5只眼,占所有患眼的7.1%;进展至5期3只眼,占所有患眼的4.3%.接受保留晶状体的玻璃体切害手术4只眼,接受玻璃体切割联合晶状体切除手术4只眼.手术治疗后,视网膜完全复位5只眼,视网膜部分复位3只眼.结论 玻璃体腔注射ranibizumab联合激光光凝治疗AP-ROP安全、有效.许宇,张琦,季迅达,蔡璇,虞思伊,费萍,金海鹰,亢晓丽,赵培泉 - 中华眼底病杂志文章来源： 万方数据
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