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N~6-甲基腺苷依赖的信使RNA稳定性调节
N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰是现今最常见的高等真核生物信使RNA(mRNA)内部(非帽子结构)修饰,是在转录后由m6A甲基转移酶(如MT-A70)在序列的G(m6A)C(70%)或A(m6A)C(30%)部位上加工形成的.这种修饰对于细胞的存活和发育是必不可少的,但其确切作用仍有待进一步研究.最近,Wang等在哺乳类动物细胞发现2个m6A脱甲基酶FTO和ALKBH5,突出显示了m6A在基本生物学功能与疾病中的重要性-mRNA的甲基化是可逆的,从而能动态操控陈桂玲 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
新脑细胞的产生会删除记忆
一项对啮齿类动物的研究显示出,婴儿的记忆会被最新生成的脑细胞所擦除.这项发现或许会对困扰人类1个世纪之久的谜团,即为什么人类不能回忆起早期孩童时期的事情作出解释.- 中国科技教育文章来源： 万方数据 -
实验性视网膜脱离后光感受器细胞的坏死性凋亡
目的 观察实验性视网膜脱离后光感受器细胞坏死性凋亡的形态学特点,初步探讨其发生机制.方法 雄性健康的Sprague-Dawley大鼠60只,右眼视网膜下注入1%透明质酸纳50μl建立视网膜脱离模型作为实验组,左眼不作处理为对照组.建模后3d,采用电子显微镜观察光感受器细胞的死亡方式及形态学特点.建模后3d,提取大鼠视网膜组织,采用蛋白质免疫印迹法检测裂解的半胱氨酸蛋白酶(Caspase)8的相对蛋白表达;采用免疫沉淀法检测磷酸化受体相互作用蛋白1(p-RIP1)的相对蛋白表达.结果 电子显微镜观察发现,视网膜脱离后光感受器细胞的死亡方式主要为凋亡和坏死.同时还可观察到光感受器细胞的坏死性凋亡,其形态学与坏死细胞类似.表现为细胞肿胀,质膜不完整、破裂,染色质浓集和边聚,且伴有明显的自噬泡和空泡.蛋白质免疫印迹法检测结果显示,实验组、对照组裂解的Caspase 8蛋白相对表达分别为0.78±0.03、0.06±0.01,实验组裂解的Caspase 8蛋白相对表达较对照组明显增加.两组裂解的Caspase 8蛋白相对表达比较,差异有统计学意义(F=4 023.21,P<0.05).免疫沉淀法检测结果显示,实验组、对照组p-RIP1蛋白相对表达分别为0.23±0.03、0.14±0.02,实验组p-RIP1蛋白相对表达较对照组明显增加.两组p-RIP1蛋白相对表达比较,差异有统计学意义(F=56.44,P<0.05).结论 实验性视网膜脱离后光感受器细胞坏死性凋亡表现为细胞肿胀,质膜不完整、破裂,染色质浓集和边聚,且伴有明显的自噬泡和空泡;其发生机制与p-RIP1表达增加有关.董凯,周恩亮,朱子诚,文磊,冯敬仰,闫泉,柯根杰,孙晓东 - 中华眼底病杂志文章来源： 万方数据 -
白细胞介素-17、白细胞介素-4及γ干扰素在实验性自身免疫性葡萄膜炎中的表达
目的 观察白细胞介素(IL)-17、白细胞介素(IL)-4及γ干扰素(IFN-γ)在实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)中的表达.方法 采用健康雌性C57BL/6小鼠建立EAU模型.建模前及建模后7、14、21、28 d,取小鼠眼球作石蜡病理切片,光学显微镜观察小鼠视网膜结构变化;采用酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中IL-17、IL-4、IFN-γ含量;采用实时荧光定量聚合酶链反应检测小鼠视网膜组织中IL-17、IL-4、IFN-γ的mRNA表达;采用蛋白质免疫印迹法检测小鼠视网膜组织中IL-17、IL-4、IFN-γ的蛋白表达.结果 建模后14d,光学显微镜观察发现,葡萄膜组织结构破坏,大量炎症细胞浸润.小鼠血清中IFN-γ含量,脾及视网膜组织中IFN-γ mRNA和蛋白表达均于建模后7d达到高峰;小鼠血清中IL-4、IL-17含量,脾及视网膜组织中IL-4、IL-17 mRNA和蛋白表达均于建模后14 d达到高峰.小鼠血清中IL-17含量,脾及视网膜组织中IL-17 mRNA和蛋白表达升高程度均较IFN-γ、IL-4更为显著.建模前与建模后7、14、21 d小鼠血清中IL-17、IL-4、IFN-γ含量比较,差异均有统计学意义(F=1 817.346、268.600、164.621,P<0.05);建模前与建模后28d小鼠血清中IL-17、IL-4、IFN-γ含量比较,差异无统计学意义(P>0.05).建模前与建模后7、14、21d小鼠脾(F=312.67、114.250、216.220)及视网膜(F=271.504、85.370、80.722)组织中IL-17、IL-4、IFN-γ蛋白表达比较,差异有统计学意义(P<0.05);建模前与建模后28 d小鼠脾及视网膜组织中IL-17、IL-4、IFN-γ蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 IL-17、IL-4、IFN-γ在EAU中均明显表达,共同参与了EAU疾病的过程.侯彬,沈琳,王红,陈海婷,赵萌 - 中华眼底病杂志文章来源： 万方数据 -
高糖诱导的牛视网膜血管内皮细胞中共济失调毛细血管扩张突变基因激酶活性变化及其对细胞氧化应激状态的影响
目的 观察高糖诱导的牛视网膜血管内皮细胞(BRECs)中共济失调毛细血管扩张突变基因(ATM)激酶的活性变化及其对细胞氧化应激状态的影响.方法 体外培养BRECs,取4~8代细胞用于实验.采用含5 mmol/L葡萄糖(正常糖组)、30 mmol/L葡萄糖(高糖组)、30 mmol/L葡萄糖和10 μmol/LATM激酶特异性抑制剂KU55933(干预组)的细胞培养液培养BRECs.细胞培养48 h后,采用蛋白免疫印迹法检测细胞中磷酸化ATM(P-ATM)、磷酸化细胞分裂素活化蛋白激酶(P-P38)及磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK) 1/2的蛋白表达水平;酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中血管内皮生长因子(VEGF)的含量;细胞内活性氧(ROS)水平检测试剂盒检测细胞内ROS水平;碘化丙啶和赫斯特染料双染色法检测细胞凋亡情况;异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖检测内皮细胞屏障的通透性.结果 与正常糖组比较,高糖组P-ATM、P-P38、P-ERK1/2蛋白表达均增高;与高糖组比较,干预组P-ATM蛋白表达降低,p-p38、p-ERK1/2蛋白表达明显增加.3组间P-ATM、P-P38、P-ERK1/2蛋白表达比较,差异均有统计学意义(F=436.00、14 010.00、985.10,P<0.05).与正常糖组比较,高糖组、干预组细胞上清液中VEGF含量均升高,干预组升高幅度更明显;3组间细胞上清液中VEGF含量比较,差异有统计学意义(F=278.00,P<0.05).高糖组ROS含量(t=2.98、10.91)、BRECs细胞凋亡率(t=4.31、11.14)均较正常糖组升高,而又明显低于干预组,差异均有统计学意义(P<0.05).与正常糖组比较,高糖组、干预组细胞旁通透率均升高,干预组升高更明显;3组间细胞旁通透率比较,差异有统计学意义(F=2 223.00,P<0.05).结论 高糖诱导的BRECs中P-ATM表达、ROS水平、细胞凋亡率及细胞旁通透率均增高,其机制可能与P38、ERK、VEGF有关.鲁理,郑志,李静文,肖文玮,李春霞 - 中华眼底病杂志文章来源： 万方数据 -
色素上皮衍生因子对氧诱导视网膜新生血管的抑制作用
目的 观察色素上皮衍生因子(PEDF)对氧诱导视网膜新生血管(OIR)的抑制作用,初步探讨PEDF抑制新生血管形成的可能机制.方法 7日龄C57BL/6J新生小鼠140只,随机数字表法分为正常对照组、OIR模型组、PEDF治疗组、磷酸盐缓冲液(PBS)干预对照组.除正常对照组外,其余各组小鼠与哺乳母鼠共同置于氧浓度为(75±2)%的氧箱内饲养5d后转移至正常环境中饲养5d,建立OIR模型;正常对照组小鼠始终置于正常氧环境饲养;OIR模型组小鼠出氧箱后不作任何处理.12、14日龄时,PEDF治疗组小鼠玻璃体注射分别注射2 μg/A的PEDF 1 μl;PBS干预对照组小鼠玻璃体腔注射等量PBS.视网膜铺片、冰冻切片荧光染色观察视网膜新生血管生长情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)观察小鼠视网膜白细胞介素(IL)-1β蛋白表达量;实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCT)检测小鼠视网膜IL-1β mRNA相对表达量.结果 视网膜铺片检查结果显示,OIR模型组视网膜新生血管面积较正常对照组明显增大,差异有统计学意义(t=15.02,P<0.01);PEDF治疗组视网膜新生血管面积较PBS干预对照组明显减小,差异有统计学意义(t=5.96,P<0.01).荧光显微镜观察结果显示,OIR模型组视网膜可见外丛状层(OPL)与神经节细胞层(GCL)之间的新生血管簇较正常对照组明显增多;PEDF治疗组视网膜OPL与GCL之间的新生血管簇较PBS干预对照组明显减少.Western blot检测结果显示,OIR模型组视网膜IL-1β蛋白表达水平较正常对照组显著提高,差异均有统计学意义(t=3.35,P<0.05).PEDF治疗组与PBS干预对照组比较,IL-1β蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P<0.05).正常对照组与PEDF治疗组比较,IL-1β蛋白表达水平无显著差异(F=11.764,P>0.05).实时RT-PCR检测结果显示,OIR模型组视网膜IL-1βmRNA相对表达量较正常对照组明显增加,差异有统计学意义(t=4.43,P<0.01).PEDF治疗组与PBS干预对照组比较,前者IL-1β mRNA相对表达量显著减少,差异有统计学意义;正常对照组与PEDF治疗组比较,IL-1β mRNA相对表达量无显著差异(F=11.151,P>0.05).结论 PEDF可抑制OIR视网膜新生血管的形成.下调IL-1β在视网膜的表达可能是其机制之一.王亚娜,高莎,沈玺 - 中华眼底病杂志文章来源： 万方数据 -
不同氧环境及葡萄糖浓度对骨骼肌卫星细胞生长的影响
研究目的:通过离体实验,观察不同氧环境及葡萄糖浓度对其增殖、损伤的影响,分析相关原因,为骨骼肌的损伤修复提供进一步的实验依据.研究方法:原代骨骼肌卫星细胞取自4周龄雄性SD大鼠双侧的腓肠肌与比目鱼肌.经0.1%Ⅱ型胶原酶结合0.25%胰蛋白酶消化法,两次差速贴壁纯化得到骨骼肌卫星细胞,使用横纹肌肌动蛋白鉴定骨骼肌卫星细胞的纯度.取第三代骨骼肌卫星细胞,分别置于常氧低糖(21% O2+5.5mM Glu)、常氧高糖(21% O2 +25mM Glu)、低氧低糖(1% O2 +5.5mM Glu)及低氧高糖(1% O2 +25mMGlu)环境下进行培养,3h后采用CCK-8法和LDH法进行增殖、损伤程度的测定.结果:CCK-8的结果显示,常氧高糖实验组的A值显著高于常氧低糖实验组(P<0.01),低氧高糖实验组的A值显著高于低氧低糖实验组(P<0.01),低氧低糖实验组的A值显著高于常氧低糖实验组(P<0.01);LDH的结果显示,低氧低糖实验组的A值显著高于常氧低糖实验组(P<0.01),低氧高糖实验组的A值显著高于常氧高糖实验组(P<0.01).结论:1)相同氧气浓度下,高葡萄糖浓度较低葡萄糖浓度的培养液更能促进骨骼肌卫星细胞的增殖.2)相同葡萄糖浓度下,低氧浓度可以促进骨骼肌卫星细胞的增殖.3)相同葡萄糖浓度下,低氧会使骨骼肌卫星细胞的LDH释放量增加.吴嵽,陆耀飞 - 体育科学文章来源： 万方数据 -
热休克蛋白27致敏对大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响
目的 观察热休克蛋白27(HSP27)致敏对大鼠视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的影响.方法 35只雌性Wistar大鼠分为HSP27致敏组、硼酸盐缓冲液(BBS)对照组、正常组,分别为15、15、5只大鼠.给予HSP27致敏组大鼠后肢皮下注射100μg的HSP27和完全弗式佐剂,腹腔注射1μg百日咳毒素.BBS对照组大鼠于相同部位注射等量BBS.正常组大鼠不作任何处理.注射前3d及注射后3d,1、2、4、6、8周,检测大鼠双眼眼压.注射后4、6、8周行视网膜冰冻切片,采用原位末端标记法检测RGC的凋亡情况,计算细胞凋亡率;采用酶联免疫吸附试验检测大鼠血清和脑脊液中HSP27抗体的含量.结果 HSP27致敏组、BBS对照组、正常组大鼠注射前后眼压均无明显波动,差异均无统计学意义(P>0.05).HSP27致敏组于注射后4周即可见RGC凋亡,注射后6周凋亡的RGC明显增多.BBS对照组及正常组均未见RGC凋亡.HSP27致敏组大鼠血清、脑脊液中HSP27抗体含量分别于注射后4、6周出现高峰,然后随着注射时间延长而递减.注射后4、6、8周,HSP27致敏组RGC凋亡率、血清中HSP27抗体含量、脑脊液中HSP27抗体含量分别与BBS对照组、正常组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);BBS对照组RGC凋亡率、血清中HSP27抗体含量、脑脊液中HSP27抗体含量与正常组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 HSP27致敏可促进大鼠RGC的凋亡.脑脊液中HSP27抗体含量与RGC凋亡趋势一致.赵薇,戴乐,唐志屏,曾勇,李燕 - 中华眼底病杂志文章来源： 万方数据 -
肝癌细胞系L2不同途径接种造模的比较
目的:比较大鼠肝癌细胞系L2肝、脾原位接种肝细胞癌( hepatocellular carcinoma, HCC)发生及侵袭转移情况,筛选理想的L2 HCC肺转移动物模型。方法将20只7周龄雌性BALB/cA裸鼠随机分为2组,应用肝癌细胞系L2分别对2组小鼠进行肝、脾原位接种造模,观察裸鼠存活率,HCC的发生与侵袭转移率以及肿瘤病理学特点。结果肝原位接种组肝成瘤率100%,肿瘤呈结节膨胀性生长,与周围肝组织和腹壁侵袭粘连明显,肺转移率为60%,未见脾转移;脾原位接种组脾成瘤率78%,肝转移率67%,肿瘤亦呈结节膨胀性生长,与周围组织和腹壁也有侵袭粘连,肺转移率11%,明显低于肝接种组( P<0.05)。镜下肺门淋巴结转移率为33%。结论肝癌细胞系L2肝、脾原位接种均易成瘤且有肺转移发生,其中肝原位接种动物模型更适用于HCC肺转移机制及体内药物干预等实验分析。刘勇,唐红,罗霞,阮思蓓,张元,唐明希 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
mTOR 信号通路在克唑替尼诱导的 EML4-ALK融合基因阳性肺癌细胞株 H2228凋亡中的作用
目的:探讨以磷脂酰肌醇3-激酶相关激酶蛋白家族成员哺乳动物雷帕霉素靶蛋白( mTOR)为中心的信号通路在克唑替尼( crizotinib)诱导的棘皮动物微管结合蛋白样蛋白4-间变性淋巴瘤激酶( EML4-ALK)融合基因阳性的非小细胞肺癌细胞株H2228凋亡中的作用。方法:根据不同的实验目的处理H2228细胞后,荧光定量PCR检测基因状态,MTT法检测细胞抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;Western blotting 检测细胞mTOR信号通路中关键蛋白的表达及活化水平。结果: Crizotinib对H2228细胞有促凋亡作用,呈时间和剂量依赖性,且能使H2228细胞阻滞在G1期。在使用crizotinib处理的凋亡细胞株中发现mTOR活化水平降低,mTOR上、下游关键蛋白的活化水平都呈下降趋势,肺癌细胞株H2228中特殊表达的融合蛋白EML4-ALK变异体3表达量未受影响,但其活化形式p-ALK明显受到抑制。结论:初步证实mTOR信号通路在crizotinib诱导含有EML4-ALK融合基因的肺癌细胞H2228凋亡中有一定作用,为crizotinib的作用机制提供了依据。- 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据
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