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猪圆环病毒2型河南株全基因组的克隆与序列分析
利用PCR方法,对河南郑州、南阳、焦作等地采集的疑似猪圆环病毒2型(PCV2)感染的病料进行检测.PCR检测为阳性的病料经处理后,接种无PCV污染的PK-15细胞中盲传6代,克隆11株PCV2全基因组并进行序列分析.结果表明,11株PCV2中有10株基因组全长为1 767bp,基因组分型为PCV2b,1株为1 768bp,说明PCV2b是河南省断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)发生的主要因素;11个毒株的同源性位于94.9%~100%,与其他毒株的同源性为94.7%~100%;10株基因组为1 767bp的毒株处于一大分支上,遗传进化比较稳定;本试验为PCV2在河南地区的分子流行病学、遗传变异及防治奠定了基础.王亚丹,卢权威,陈红英,崔保安,王淑娟,朱前磊,王子馨,钞安军 - 中国兽医学报文章来源： 万方数据 -
枯草芽孢杆菌紫外诱变异甘露聚糖酶基因突变的研究
异甘露聚糖酶是制备益生元甘露寡糖的关键酶.对分泌异甘露聚糖酶枯草芽孢杆菌K-6(Bacillus subtilis K-6)的紫外诱变正突变株K-6-9(Bacillus subtilis K-6-9)的诱变机理进行了研究.通过对出发菌株和正突变株的异甘露聚糖酶基因进行克隆和表达,以生物信息学的方法对异甘露聚糖酶基因序列和蛋白序列进行分析,得到突变株的突变碱基以及突变氨基酸.基因序列研究结果显示,突变体的总碱基突变频率为1.02,碱基突变类型包括碱基的颠换、转换.在检测到的11个碱基突变中,转换的频率(54.5%)是颠换频率(45.5%)的1.2倍,其中,C/T之间的转换所占比例最大,A-G和A-T也具有较高的替换频率,说明胸腺嘧啶(T)具有较高的辐射敏感.通过蛋白序列的比较分析,有2个氨基酸发生突变,由第21位保守氨基酸脯氨酸变异为非保守氨基酸丝氨酸,第23位非保守氨基酸丝氨酸变异为保守氨基酸谷氨酸.综合分析表明:保守区氨基酸与非保守区氨基酸的相互突变可能对其蛋白的正确组装及功能的发挥起重要作用.穆昭艳,汪立平,赵勇,王娜,李安雪,汪欣 - 华北农学报文章来源： 万方数据 -
禾谷缢管蚜水通道蛋白基因RpAQP1的克隆、分子特性和表达分析
为探究禾谷缢管蚜Rhopalosiphum padi(Linnaeus)水通道蛋白基因Rp AQP1的序列特征及其在不同龄期的表达,利用RT-PCR和RACE技术克隆了Rp AQP1基因的c DNA全序列,采用生物信息学软件分析了Rp AQP1编码蛋白的特性,利用qRT-PCR分析了Rp AQP1在不同龄期的表达量.结果显示:禾谷缢管蚜水通道蛋白基因Rp AQP1的c DNA全长为1 216 bp,其750 bp的开放阅读框编码250个氨基酸,蛋白分子量为27.36 k D.Rp AQP1属于水通道蛋白亚家族DRIP(果蝇内嵌蛋白Drosophila integral protein)的一员,具有6个跨膜区,2个保守的NPA结构单元和1个压缩区域Ar/R;qRT-PCR结果显示,Rp AQP1在整个发育历期均有表达,其在2龄若蚜中表达水平最高,是成蚜表达量的1.432倍;在4龄若蚜中表达量最低,为成蚜表达量的0.444倍,显著低于其它龄期,而其余各龄期Rp AQP1表达量无显著差异.左亚运,李晓叶,李玉婷,王康,乔宪凤,陈茂华 - 植物保护学报文章来源： 万方数据 -
典型油气藏上方甲烷氧化菌群的分子生物学解析
以胜利油田典型油气藏为研究对象,原位提取土壤中的甲烷氧化微生物群落组成信息,明确了油气指示微生物类群。通过对油田、气田和背景区土壤的pmoA基因克隆文库分析发现,来自油气藏上方土壤与背景区土壤的甲烷氧化菌群结构的差异较大。背景区土壤的甲烷氧化Ⅱ型菌---甲基孢囊菌和甲基弯曲菌的相对丰度明显高于油气藏上方土壤,而甲烷氧化Ⅰ型菌---甲基球菌和甲基暖菌则显著减少,表明长期的油气微渗漏能使甲烷氧化微生物群落向Ⅰ型菌演替。 T-RFLP 多变量统计分析结果显示,经过地质历史时期的微量轻烃连续驯化,油气藏上方的甲烷氧化微生物群落发生了演替,甲基球菌和甲基杆菌可能是推动这种演替变化的关键种群。甲烷氧化pmoA基因的丰度在油气藏上方的异常可以用于预测下伏油气藏的存在。汤玉平,高俊阳,赵克斌,任春,许科伟 - 石油实验地质文章来源： 万方数据 -
Molecular cloning and identification of mouse epididymis-specific gene mHongl, the homologue of rat HongrES1
Shuang-Gang Hu, Han Du, Guang-Xin Yao, Yong-Lian Zhang - 亚洲男性学杂志(英文版)文章来源： 万方数据 -
重组结核分枝杆菌CFP10的克隆与表达
目的:克隆和表达结核分枝杆菌CFP10,并分析其免疫学活性.方法:自结核分枝杆菌标准株H37Rv提取基因组DNA,PCR扩增cfp10基因,克隆至T载体pMD18T,转化入大肠杆菌JM109,菌落PCR鉴定阳性克隆并测序分析.将测序正确的pMD18-cfp10的cfp10基因亚克隆至表达载体PQE30,构建重组质粒PQE30-cfp10,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,PCR和双酶切鉴定阳性重组体,IPTG诱导CFP10表达,亲和层析纯化,western-blot分析其免疫活性.结果:成功构建PQE30-cfp10重组表达质粒,表达、纯化获得分子量约10kDa的CFP10,并能被结核病人血清识别.结论:克隆表达获得具有免疫活性的重组结核分枝杆菌CFP10.杨双,袁仕善,谭云洪,邓志高,孙文霞,李民 - 湖南师范大学学报(医学版)文章来源： 万方数据 -
追溯致死性前列腺癌的克隆起源
以往的研究认为,原发前列腺肿瘤具有多灶和多克隆异质性,但大多数来自同一患者不同部位远处转移肿瘤共享大部分遗传变异,提示致死性转移癌细胞为单克隆起源.然而,近期作者应用伞基因组测序和分子病理检测,分析1例死于转移性前列腺癌患者的致死细胞克隆起源却有了一些不同的发现.李慧明,余英豪 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
人类mtDNA D-Loop区位点变异对基因表达的影响
Case-Control研究表明,人线粒体基因(mtDNA) D-Loop区mt235、mt514-515、mt16183、mt16290和mt16319多态位点与有氧运动能力有关.拟从下游基因表达做进一步的研究,以探讨上述多态位点的分子调控机理.方法:采用全基因组合成法合成包含上述多态位点的DNA序列,分别连接到pGL3-promoter载体构建重组质粒,将重组质粒转染至293T细胞,观察携带5对mtDNA质粒对下游双荧光素酶报告基因的表达及荧光素酶mR-NA表达的影响.结果:携带mt235A、mt514-515CA、mt16183A和mt16319G的载体转染细胞的双荧光素酶基因表达量显著高于mt235G、mt514-515Del、mt16183C和mt16319A(P<0.01);携带mt16290两种基因型的质粒转染细胞报告基因表达没有明显差异.与pGL3-promoter载体相比,携带mt16319A的质粒转染细胞荧光素酶mRNA极显著下降(P<0.01),携带mt16290位点的两种质粒对报告基因mRNA的影响没有差异.结论:mt235、mt514-515、mt16183和mt16319多态位点影响荧光素酶基因表达,mt235A、mt514-515CA和mt16183A上调基因转录和翻译,mt16319A下调基因转录.这些基因表达上的差异可能是影响人有氧运动能力的重要调控因素.龚丽景,胡扬,李燕春,梅涛 - 体育科学文章来源： 万方数据 -
地域文化基因再现及人本观转基因空间控制理念
文化景观是环境层面上文化行为的空间产物,地域文化景观反映该地域文化体系的地理单元特征.地域文化遗产性景观揭示传统文化(尤其是心理期盼认知传统行为)在空间上传承与形制叠加的人文地理性.对后者的研究国外已借用生物传承多样性的"基因、物种和生态系统"理念去解构.诸多研究多涉及聚落景观及其基因方面,还没有全方位延伸到地域文化景观的各类型,尤其很少介入地域传统文化(风水观)遗产性基因,及其遗产景观基因的排列或组合或结构的研究.本文引用人文地理学"社会-文化"转向创立的"现象学结构主义"方法,首次系统揭示(中国)地域文化遗产(形制)基因与结构;并据后现代人本性空间观理念,即在满足遗产性景观所在地(或社区)生活空间质量需求规律下,论及提升文化产业展现内涵下的遗产景观基因再现控制理念.王兴中,李胜超,李亮,郭祎,刘娇 - 人文地理文章来源： 万方数据 -
IPO8基因启动子区rs35100176位点变异对基因表达的影响
目的:研究人importin 8( IPO8)基因启动子区rs35100176多态性位点CCT插入/缺失对基因表达的影响。方法:PCR扩增IPO8基因启动子区包含rs35100176多态位点的342 bp序列,通过测序获得了49例DNA样本的基因多态性分布。以CCT/CCT插入纯合子或-/-缺失纯合子DNA样本为模板,扩增含有不同插入/缺失序列的IPO8基因启动子片段,插入萤光素酶报告质粒pGL3-Basic,构建pGL3-3N Insertion和pGL3-3N Deletion重组表达载体。重组质粒经Fugene 6.0转染入细胞,采用双萤光素酶报告系统,检测携带不同多态性序列的重组质粒中报告基因的表达活性;real-time PCR 检测各不同基因型细胞中 IPO8 mRNA 表达。结果:通过测序发现rs35100176多态位点存在 CCT/CCT、CCT/-和-/-3种表型,其基因分布频率分别为18.37%、55.10%和26.53%。成功构建pGL3-3N Insertion和pGL3-3N Deletion重组表达载体。双萤光素酶报告基因活性检测结果显示,pGL3-3N Insertion启动下游报告基因表达的相对活性与pGL3-3N Deletion 相比显著减弱,两者存在显著差异(P<0.05);real-time PCR结果显示,CCT纯合插入的HEK293细胞中IPO8 mRNA的表达显著低于CCT纯合缺失的Saos-2细胞。结论:IPO8基因启动子区rs35100176位点的CCT碱基插入变异能显著抑制启动子活性,从而影响IPO8基因的转录。熊建军,江和,许晓源,周小鸥,王庭,李卫东 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据
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