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绵羊肺炎支原体标准株Y98外膜蛋白MOP30基因真核表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达
以绵羊肺炎支原体(Mycoplasma oumvipneoniae,MO)标准株Y98基因组为模板,设计1对特异引物,PCR扩增得到798bp的P30目的基因(MOP30),将其定向克隆到pMD19-T Simple载体中进行测序分析.重组质粒进行XbaⅠ/BamHⅠ双酶切并回收目的片段,将目的基因亚克隆入黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,YFP)表达载体pCAMBIA1300-YFP中构建重组融合表达质粒pCAMBIA1300-MOP30-YFP.双酶切验证后的融合表达质粒转化农杆菌(Agrobacterium)感受态细胞,侵染烟草(tobacco)叶片.通过激光共聚焦成像显微镜(cofocal imagingmicroscope)观察到融合表达的黄色荧光蛋白,Western-blotting试验得到57 000的特异条带,RT-PCR检测到MOP30基因在烟草叶片中转录.MOP30-YFP融合蛋白在烟草中的成功表达,为转基因植物疫苗防治绵羊支原体肺炎奠定了基础.张亚宁,赵利峰,张乐祎,赵宝华 - 中国兽医学报文章来源： 万方数据 -
弓形虫 SAG2和 GRA2基因疫苗的免疫保护研究
DNA疫苗是将编码抗原的基因插入载体质粒中构成重组体,直接接种机体,在接种部位摄取表达并达到抗感染目的的一种疫苗。 pCMV-Taq2B载体具有人巨细胞病毒( Human cytomegalovirus, CMV)高效启动子/增强子序列,可使目的基因在真核细胞中高水平稳定表达成为DNA疫苗载体。构建pCMV-Taq2B-Surface antigen 2(表面膜抗原2)( pSAG2)、 pCMV-Taq2B-Dense granule protein 2(致密颗粒蛋白2)(pGRA2)及 pCMV-Taq2B-SAG2-GRA2( pSAG2-GRA2) DNA 疫苗并研究其免疫保护效果。将 pSAG2、pGRA2、 pSAG2-GRA2 DNA疫苗(实验组)、磷酸盐缓冲液(Phosphate buffered saline, PBS)、 pCMV-Taq2B空质粒(对照组)分别肌肉注射BALB/c小鼠, ELISA法检测血清IgG抗体水平。末次免疫后第28 d,各组每只小鼠经腹腔注射弓形虫速殖子1000个,观察小鼠的生存时间。结果显示单基因疫苗pSAG2、 pGRA2和双基因疫苗pSAG2-GRA2免疫组均能诱导产生特异性IgG抗体,且于末次免疫后第28 d达到最高值,此时单基因疫苗pGRA2(0.382±0.66)和双基因疫苗pSAG2-GRA2(0.548±0.137)免疫组吸光度值显著高于PBS (0.137±0.016)或pCMV-Taq2B (0.135±0.010)对照组吸光度值。免疫单基因疫苗pSAG2(14.3±1.8)、 pGRA2组(13.5±2.1)小鼠存活时间(d)明显长于PBS (4.3±1.6)及pCMV-Taq2B组(4.1±1.3),且双基因疫苗 pSAG2-GRA2组(19.6±2.4)小鼠存活时间明显长于单基因疫苗 pSAG2组及pGRA2组。弓形虫双基因疫苗pSAG2-GRA2能够诱导小鼠产生抗弓形虫感染保护性免疫,其免疫保护性优于pSAG2、 pGRA2单基因疫苗。全娟花,李鹏,喻才元,楚佳奇 - 寄生虫与医学昆虫学报文章来源： 万方数据 -
某部官兵接种乙型肝炎疫苗免疫效果研究
目的 了解官兵接种不同剂量乙肝疫苗后的免疫效果,为今后做好乙肝疫苗接种工作提供依据.方法 将乙肝三系五项阴性的官兵随机分组,用10 μg和20 μg乙型肝炎疫苗按0、1、6个月程序接种,全程接种后1、12、24个月检测血清抗-HBs,并记录不良反应.结果 接种20 μg乙型肝炎疫苗者抗-HBs的产生率显著高于10 μg接种者,抗体几何平均滴度(GMT)值增高且下降也明显减缓,不良反应无统计学差异(P>0.05).结论 部队官兵宜首选20μg乙型肝炎疫苗按程序接种.刘元德,刘新春 - 临床军医杂志文章来源： 万方数据 -
入学入托儿童预防接种证查验结果
儿童入托入学查验预防接种证是贯彻实施《中华人民共和国传染病防治法》和《疫苗流通和预防接种管理条例》的一项重要内容,发现未依照国家免疫规划受种的儿童,应当向所在地的县级疾病预防控制机构或者儿童居住地承担预防接种工作的接种单位报告,并配合疾病预防控制机构或者董国萍 - 浙江预防医学文章来源： 万方数据 -
乙肝疫苗无(低)应答儿童不同疫苗再免疫效果分析
目的:探讨乙肝疫苗免疫后无(低)应答儿童接种不同类型乙肝疫苗的再免疫效果.方法:将乙肝疫苗免疫后无(低)应答儿童400例随机分为汉逊组和酵母组各200例,汉逊组接种国产10μg汉逊乙肝疫苗,酵母组接种进口10μg重组酵母乙肝疫苗,疫苗接种前及完成再免疫第3剂疫苗后1个月采集静脉血5 mL,采用放射免疫法(RIA)进行HBsAb定量检测,对两组接种有效应答率进行比较.结果:酵母组再免疫有效应答率为83.5%,高于汉逊组的65.5%,两组比较差异有统计学意义(χ2=17.055,P<0.05).结论:对于乙肝疫苗无(低)应答儿童再次免疫接种时,可考虑优先选择进口重组酵母乙肝疫苗进行接种.钟运香,姚雪榕,袁娇,王晓炜,关承恩 - 儿科药学杂志文章来源： 万方数据 -
人类mtDNA D-Loop区位点变异对基因表达的影响
Case-Control研究表明,人线粒体基因(mtDNA) D-Loop区mt235、mt514-515、mt16183、mt16290和mt16319多态位点与有氧运动能力有关.拟从下游基因表达做进一步的研究,以探讨上述多态位点的分子调控机理.方法:采用全基因组合成法合成包含上述多态位点的DNA序列,分别连接到pGL3-promoter载体构建重组质粒,将重组质粒转染至293T细胞,观察携带5对mtDNA质粒对下游双荧光素酶报告基因的表达及荧光素酶mR-NA表达的影响.结果:携带mt235A、mt514-515CA、mt16183A和mt16319G的载体转染细胞的双荧光素酶基因表达量显著高于mt235G、mt514-515Del、mt16183C和mt16319A(P<0.01);携带mt16290两种基因型的质粒转染细胞报告基因表达没有明显差异.与pGL3-promoter载体相比,携带mt16319A的质粒转染细胞荧光素酶mRNA极显著下降(P<0.01),携带mt16290位点的两种质粒对报告基因mRNA的影响没有差异.结论:mt235、mt514-515、mt16183和mt16319多态位点影响荧光素酶基因表达,mt235A、mt514-515CA和mt16183A上调基因转录和翻译,mt16319A下调基因转录.这些基因表达上的差异可能是影响人有氧运动能力的重要调控因素.龚丽景,胡扬,李燕春,梅涛 - 体育科学文章来源： 万方数据 -
地域文化基因再现及人本观转基因空间控制理念
文化景观是环境层面上文化行为的空间产物,地域文化景观反映该地域文化体系的地理单元特征.地域文化遗产性景观揭示传统文化(尤其是心理期盼认知传统行为)在空间上传承与形制叠加的人文地理性.对后者的研究国外已借用生物传承多样性的"基因、物种和生态系统"理念去解构.诸多研究多涉及聚落景观及其基因方面,还没有全方位延伸到地域文化景观的各类型,尤其很少介入地域传统文化(风水观)遗产性基因,及其遗产景观基因的排列或组合或结构的研究.本文引用人文地理学"社会-文化"转向创立的"现象学结构主义"方法,首次系统揭示(中国)地域文化遗产(形制)基因与结构;并据后现代人本性空间观理念,即在满足遗产性景观所在地(或社区)生活空间质量需求规律下,论及提升文化产业展现内涵下的遗产景观基因再现控制理念.王兴中,李胜超,李亮,郭祎,刘娇 - 人文地理文章来源： 万方数据 -
IPO8基因启动子区rs35100176位点变异对基因表达的影响
目的:研究人importin 8( IPO8)基因启动子区rs35100176多态性位点CCT插入/缺失对基因表达的影响。方法:PCR扩增IPO8基因启动子区包含rs35100176多态位点的342 bp序列,通过测序获得了49例DNA样本的基因多态性分布。以CCT/CCT插入纯合子或-/-缺失纯合子DNA样本为模板,扩增含有不同插入/缺失序列的IPO8基因启动子片段,插入萤光素酶报告质粒pGL3-Basic,构建pGL3-3N Insertion和pGL3-3N Deletion重组表达载体。重组质粒经Fugene 6.0转染入细胞,采用双萤光素酶报告系统,检测携带不同多态性序列的重组质粒中报告基因的表达活性;real-time PCR 检测各不同基因型细胞中 IPO8 mRNA 表达。结果:通过测序发现rs35100176多态位点存在 CCT/CCT、CCT/-和-/-3种表型,其基因分布频率分别为18.37%、55.10%和26.53%。成功构建pGL3-3N Insertion和pGL3-3N Deletion重组表达载体。双萤光素酶报告基因活性检测结果显示,pGL3-3N Insertion启动下游报告基因表达的相对活性与pGL3-3N Deletion 相比显著减弱,两者存在显著差异(P<0.05);real-time PCR结果显示,CCT纯合插入的HEK293细胞中IPO8 mRNA的表达显著低于CCT纯合缺失的Saos-2细胞。结论:IPO8基因启动子区rs35100176位点的CCT碱基插入变异能显著抑制启动子活性,从而影响IPO8基因的转录。熊建军,江和,许晓源,周小鸥,王庭,李卫东 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
比较表观基因组学方法来研究基因组调节功能
人类基因组测序产生了大量的基因信息,但是理解每个基因的功能的目标仍未实现.比较表观基因组学(comparative epigenomics)能进行DNA和组蛋白修饰的种间比较,对起调节作用的基因组序列进行标注,该方法能确定基因的作用.- 中国农业科技导报文章来源： 万方数据 -
易感基因突变与遗传性乳腺癌的关系
随着第三代测序技术的发展,学者们对基因突变在癌症发生、发展中的作用进行了广泛的分析.特别是全基因组关联研究(genome-wide association studies,GWAS)的开展,使得学者们能够发现更多的与疾病有关的基因[1].目前,GWAS研究在识别肿瘤和疾病易感基因的研究中扮演着越来越重要的角色.除了广为研究的樊菁,吕勇刚,王廷,巫姜,崔风强,边杰芳,凌瑞 - 中华乳腺病杂志(电子版)文章来源： 万方数据
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