搜索 - 科创中国

小鼠胚胎干细胞钙敏感受体的表达和其对细胞增殖的影响

目的:观察钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)在小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)的功能性表达。方法:(1)采用Western blotting 技术及免疫荧光染色分析CaSR蛋白在129小鼠ES-D3细胞系的表达;采用激光共聚焦扫描技术检测不同处理因素(包括G蛋白-PLC-IP3通路)对细胞内钙离子浓度([ Ca2+] i )的影响;应用MTT法和流式细胞术分析CaSR活化对mESCs增殖的影响。结果:CaSR蛋白在mESCs有表达;增加细胞外钙或者给予CaSR激动剂新霉素均可引起[ Ca2+] i和CaSR表达增加;CaSR活化可增加mESCs 的存活率和磷酸化ERK2蛋白的表达。 NPS2390( CaSR抑制剂)则能减弱这种作用。结论: CaSR在mESCs有表达;CaSR的活化参与了mESCs的增殖。

孙健,于金凤,栾海荣,李爽,许晓义,何志鹏,魏韬,李丽,徐长庆 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

活性氧在多能干细胞中的作用

多能干细胞是具有自我更新能力和能向体内多种细胞分化的一类细胞群体.活性氧(reactive oxy gen species,ROS)是反应活性极强的代谢分子.虽然过多的ROS会对干细胞产生毒性,引起干细胞的衰老和凋亡,但是ROS的调节在维持干细胞的干性和分化中起重要作用.ROS在不同的干细胞中发挥的作用也不尽相同.深入了解ROS如何调控干细胞的功能将有助于加强干细胞在转化医学方面的应用.本文将以胚胎干细胞和诱导性多能干细胞为主,对近年来ROS调节多能干细胞功能的研究进行简要综述.

徐洁,刘俊许,康雪玲,蒋丽,周忠伟,陈思锋,孟丹 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

转化生长因子-β受体抑制剂复合物C促进人胚胎干细胞向视网膜色素上皮细胞定向诱导

目的观察转化生长因子-β(TGF-β)受体抑制剂复合物C对人胚胎干细胞(hESC)向视网膜色素上皮(RPE)细胞定向诱导效率的影响.方法将H1 hESC分为对照组和实验组.对照组在细胞过度融合后,以去除碱性成纤维细胞生长因子的血清替代物培养体系诱导RPE细胞定向分化.实验组于诱导分化前6d在培养体系中加入1μmol/L复合物C.诱导分化第1、3、5周,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测两组人类配对盒基因(PAX6)、小眼球相关转录因子(MITF)、细胞视黄醛结合蛋白(CRALBP)、RPE65 mRNA的表达.将hESC来源的RPE(hESC-RPE)细胞分离纯化,采用RT-PCR、蛋白免疫印迹法(Western blot)和细胞免疫荧光法对纯化的hESC-RPE细胞进行鉴定.结果诱导分化第4周,实验组肉眼可见色素团块,对照组无色素团块出现.将实验组的色素细胞分离纯化后,可见l00%的细胞表现为多角形色素化.RT-PCR检测结果显示,实验组PAX6 mRNA表达在诱导分化第1、3周显著高于对照组,差异有统计学意义(t=28.498、3.141,P<0.05);诱导分化第3、5周,实验组MITF(t=8.866、10.111)、CRALBP(t=5.293、5.394)和RPE65(t=9.263、9.504)的表达均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).hESC-RPE细胞PAX6、MITF、CRALBP、RPE65 mRNA表达均显著高于hESC(t=9.154、17.284、18.204、44.194)和ARPE-19(t=7.605、16.770、18.190、44.190)细胞,差异有统计学意义(P<0.05).Western blot检测结果显示,hESC-RPE细胞高水平表达RPE标志蛋白PAX6、RPE65.荧光显微镜观察发现,hESC-RPE细胞表达RPE细胞特异性标志蛋白PAX6、紧密连接蛋白-1.结论 TGF-β受体抑制剂复合物C能显著提高hESC向RPE定向诱导效率.

杨博宇,杨春波,于敏,李筱荣 - 中华眼底病杂志

文章来源：万方数据

小鼠来源诱导多能干细胞定向分化为神经元的体外实验研究

目的:探讨源于小鼠的诱导多能干细胞( induced pluripotent stem cells , iPSCs)体外定向分化为神经元的方法,为大量稳定地获得神经元及提供种子细胞治疗脊髓损伤奠定体外实验基础。方法:源于小鼠的iPSCs在不同的诱导培养基中经悬浮、贴壁、再悬浮和再贴壁培养。免疫荧光检测iPSCs多能性标志物、神经干细胞及其分化细胞标志物的表达。 RT-PCR检测神经元及胶质细胞基因表达并行神经元基因测序鉴定,流式细胞术检测iP-SCs定向分化为神经干细胞及进一步分化为神经元的比例。结果:源于小鼠的iPSCs表达干细胞多能性标志物Sox2、Oct4和SSEA1。悬浮培养可以形成类球形拟胚体;经诱导及机械分离后的细胞可形成神经球,神经球经诱导后可分化为神经元。免疫荧光显示iPSCs可诱导出表达nestin的神经球,贴壁培养的神经球可分化为分别表达微管相关蛋白2(MAP-2)、胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)及髓磷脂碱性蛋白(MBP)的神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。 RT-PCR及基因鉴定结果显示形成小鼠神经元;流式细胞术检测结果显示分化细胞中神经干细胞和神经元的比例分别为63.93%±1.47%和21.40%±1.70%。结论:源于小鼠的诱导多能干细胞能够稳定地在体外定向分化为神经元,为脊髓损伤的治疗提供了一个可靠的细胞来源。

庞卯,杨阳,刘斌,张良明,戎利民 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

绿色荧光蛋白转基因小鼠不同源性间充质干细胞原代培养及生物学特性比较

目的:探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠脐带和骨髓源性间充质干细胞( MSCs )的体外分离培养方法、生物学特性、表面标志及多向分化潜能。方法:应用Ⅱ型胶原酶消化培养法分离脐带MSCs及密度梯度离心法分离骨髓MSCs进行体外培养。在倒置显微镜下观察2种细胞的生长特点,运用生长曲线和MTT法检测其原代细胞增殖能力,台盼蓝法测定细胞传代成活率,采用流式细胞术测定2种第3代( P3)细胞DNA周期及表面标志物的表达,并比较其向成脂细胞和成骨细胞的分化潜能。结果:酶消化法分离培养的脐带MSCs 1 d后,细胞贴壁呈成纤维形,2 d后呈漩涡状生长且增殖明显,3 d后达80%融合即可传代;应用密度梯度离心法分离骨髓MSCs,体外培养4 d后,细胞贴壁呈圆形、梭形和多角形生长,5 d后呈克隆样生长且增殖明显,7 d后达80%融合即可传代。原代培养的脐带MSCs生长曲线近似“S”形,骨髓MSCs 生长曲线较平缓;MTT法显示脐带MSCs在3~5 d增殖较明显,骨髓MSCs 7 d后细胞增殖较明显。2种P3细胞传代成活率均为96%以上,G0/G1期细胞均为85%以上,无明显差异(P>0.05);2种P3细胞CD44、CD90和CD105阳性率均为(60.7±2.3)%以上高表达,CD45、CD19、CD14和CD79a均为(25.6±4.8)%低表达,两者无明显差异( P>0.05);2种MSCs在体外均具有向成骨细胞和成脂细胞分化的潜能,脐带MSCs向成骨及成脂细胞分化率均为90%以上,与骨髓MSCs的分化潜能比较有显著差异( P<0.05)。结论:脐带MSCs较骨髓MSCs具有较强的增殖能力及分化潜能。绿色荧光蛋白转基因小鼠的脐带MSCs可作为较好干细胞示踪的细胞源。

- 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

人骨髓间充质干细胞体外不同分离与培养方法的比较

目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)理想的分离、培养方法.方法采用密度梯度离心法和全骨髓贴壁法分离培养人骨髓干细胞,并将其分别置于普通培养瓶、60Co培养瓶中培养,应用倒置显微镜和免疫组化法观察和鉴定骨髓间充质干细胞;流式细胞术检测细胞表面标志.结果人骨髓干细胞呈均一梭形、成纤维细胞样,形成集落样生长.60Co培养瓶细胞贴壁情况明显好于普通培养瓶,且费用低;免疫组化及流式细胞术显示CD34、CD45表达为阴性,CD29、CD44表达为阳性.60Co照射处理的培养瓶结合采用全骨髓贴壁法分离培养法获得的骨髓干细胞活性高,增殖力强,克隆形成早,传代时间短.结论全骨髓贴壁法和密度梯度离心法均可获得高纯度贴壁生长的骨髓干细胞,其中60Co照射处理的培养瓶结合采用全骨髓贴壁法分离培养简单易行,骨髓干细胞增殖快,活性好,传代力持久.可以收获大量、高纯度的MSCs;本实验为MSCs进一步的研究与临床应用提供了实验方法及依据.

刘贤华,仝青英,白晓东 - 武警医学

文章来源：万方数据

原发性肝细胞癌中干细胞标志物的表达与上皮细胞-间质转化的关系

目的探讨原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中肝干细胞标志物的表达及其与上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系.方法采用免疫组化法检测72例HCC中肝干细胞标志物CK19、EpCAM、CD133、CD90的表达及其与EMT相关蛋白E-cadherin、vimentin和Snail的关系.结果 HCC组织中CK19、EpCAM、CD133、CD90阳性率分别为31.9%(23/72)、40.3% (29/72)、51.4% (37/72)、41.7%(30/72),有镜下癌栓和门静脉癌栓组中CK19、EpCAM、CD133、CD90阳性率均高于无镜下癌栓和无门静脉癌栓组,Ⅲ+Ⅳ期、肿瘤数目多发的HCC中EpCAM、CD133、CD90阳性率高于Ⅰ+Ⅱ期和单发的HCC;<46岁、组织学Ⅲ+Ⅳ级、血清AFP≥350 ng/ml的HCC中CK19阳性率高于其相应对照组.E-cadherin与其余两种EMT标志物均呈负相关(vimentin:r=-0.572,P=0.004;Snail:r=-0.597,P=0.003),CK19、Ep-CAM、CD90阳性HCC组中vimentin阳性强度均高于阴性组,CD133阳性HCC组中E-cadherin阳性强度低于CD133阴性组,vimentin、Snail阳性强度均高于CD133阴性组.结论与CK19、EpCAM、CD90相比,CD133阳性的肝癌干细胞与EMT的关系更加密切,CD133可作为同时针对HCC肝干细胞和EMT的治疗靶点.

徐军,胡勇,王健,王星星,程兰兰,余宏宇 - 临床与实验病理学杂志

文章来源：万方数据

骨组织工程种子细胞研究进展

近年来,随着创伤领域各种新的治疗方法的涌现和各种先进理念的不断完善,使创伤导致的骨折得到了更合理地治疗,也使骨缺损的发病率明显下降,但是骨缺损的治疗仍是国际骨科学领域的一个难题.随着骨组织工程的迅速发展,

杨杜明,李福兵,唐辉,闻一新,刘华,徐永清 - 西南国防医药

文章来源：万方数据

微RNA-34 a与乳腺癌相关信号通路

据卫生部疾病预防控制中心发布的乳腺癌发病数据显示:全国肿瘤登记地区乳腺癌发病率位居女性恶性肿瘤的第1位[1].近20年来,全球乳腺癌病死率呈现出下降趋势,一方面是因为乳腺癌筛查工作的开展,使早期病例的比例增加,另一方面是乳腺癌综合治疗的开展,提高了疗效.随着微RNA-34a(miR-34a)在乳腺癌中的相对特异性表达被越来越多的学者认识,其作用机制也成为近年的研究热点,而信号通路在其中占有重要

解永松,贾淞淦,李连宏 - 中华乳腺病杂志(电子版)

文章来源：万方数据

大肠原发癌和转移癌组织中肿瘤干细胞的检测与分选

目的:对10例大肠癌新鲜标本的原发癌组织和转移癌组织中肿瘤干细胞( cancer stem cell, CSC)的含量进行检测并分选,为进一步探讨转移肿瘤干细胞( migrating cancer stem cell, MCSC)的生物功能和机制奠定基础。方法应用流式抗体CD133-PE和CD44-FITC分别标记大肠癌原发癌组织和转移癌组织细胞悬液,应用流式细胞仪检测CD133-PE和CD44-FITC阳性细胞的含量并对其进行分选。结果在大肠癌原发癌组织和转移癌组织中均存在一定比例的CD133和CD44阳性细胞,转移癌组织中CSC比例高于原发癌组织(P<0.05)。结论大肠癌原发癌组织和转移癌组织中均存在CSC,转移癌组织中CSC比例明显高于原发癌组织,提示CSC参与大肠癌的转移过程并发挥作用。

贾茹,孙青 - 临床与实验病理学杂志

文章来源：万方数据