科创中国

目的 观察四逆汤对脓毒症大鼠炎症反应及免疫功能的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 66只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组(n=6)、模型组(n=30)和四逆汤组(n=30).腹腔注射脂多糖(LPS)5 mg/kg制备脓毒症大鼠模型.四逆汤组于制模后即刻灌胃四逆汤5 g/kg;模型组给予等量生理盐水;正常对照组不予任何处理.分别于制模后2、12、24、48、72 h经眼眶采血后处死大鼠,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清白细胞介素(IL-1、IL-6、IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及单核细胞人白细胞DR抗原(HLA-DR)表达水平,并观察肠黏膜组织病理改变.结果 制模后2h模型组IL-1水平(ng/L)即逐渐升高,至48 h达峰值(4.07±0.10)后逐渐下降;四逆汤组则于制模后12h达峰值(2.98±0.12)后逐渐下降.模型组和四逆汤组IL-6水平(ng/L)分别于制模后12 h(91.39± 1.55、73.00±2.38)、48 h(82.51±1.49、64.68±1.68)达到两个高峰.模型组IL-10水平(ng/L)于制模后2h达高峰(86.66±6.12)后逐渐下降;四逆汤组于制模后12h短暂下降(71.61±2.35)后逐渐上升,至48 h接近正常对照组水平(109.09±4.77比124.01±7.89,P>0.05).模型组TNF-α水平(ng/L)逐渐升高至48 h达峰值(83.37±3.79);四逆汤组升高至12h达峰值(48.52±1.21),72 h降到正常对照组水平(18.59±1.97比15.50±2.68,P>0.05).实验过程中,与模型组比较,四逆汤组各时间点IL-1、IL-6、TNF-α明显下降,IL-10明显升高.模型组和四逆汤组HLA-DR表达(μg/L)于制模后2h达峰值(4.86±0.15、4.85±0.17),随后逐渐下降;四逆汤组于制模后48 h和72 h时HLA-DR表达较模型组显著升高(48 h:4.21±0.12比2.74±0.16,72h:3.80±0.09比2.27±0.12,均P<0.01).光镜下观察显示:制模后2h,模型组和四逆汤组肠黏膜均有明显炎性细胞浸润,绒毛受损严重;于制模后12h起,四逆汤组炎性细胞浸润较模型组明显减轻,小肠黏膜绒毛修复较模型组更完整.结论 四逆汤可调节脓毒症大鼠全身炎症反应状态,促进肠黏膜的修复,保护肠道功能,并促进机体免疫功能的恢复.

目的:探讨转染微小RNA-132(miR-132)对肺泡巨噬细胞炎症反应的作用。方法:将体外去致热源培养的大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383分为空白对照组、阴性对照组和转染组,分别采用miR-132增敏剂、错义链和PBS作用。转染24 h后,CCK-8法检测细胞増殖;实时荧光定量PCR检测细胞中miR-132的表达;用脂多糖( LPS)作用细胞后,凝胶电泳迁移率实验( EMSA )检测细胞中NF-κB活性;Western blotting法检测细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的表达。结果:与空白对照组和阴性对照组相比较,转染组细胞中miR-132的表达明显升高;转染组细胞増殖被明显抑制,与空白对照组相比较,差异有统计学意义( P<0.05);LPS作用后,转染组NF-κB、TNF-α和IL-6表达量显著下降,与空白对照组和阴性对照组相比较,差异均有统计学意义( P <0.05)。结论:转染miR-132可抑制NR8383细胞増殖,并抑制LPS诱导的NR8383细胞的炎症反应。

目的 探讨苦柯胺B(KB)对脓毒症小鼠肺部炎症反应的抑制作用及分子机制.方法 将28只雄性ICR小鼠按随机数字表法分为对照组(8只)、脂多糖(LPS)组(10只)、LPS +KB组(10只).腹腔注射LPS 20 mg/kg制备脓毒症模型(LPS组);对照组给予等体积生理盐水;LPS +KB组于LPS刺激4h后经尾静脉注射KB 20 μg/kg.于LPS刺激后8h检测动物血浆LPS浓度及肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆、肺泡灌洗液及肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肺组织核转录因子-κB(NF-κB)活性和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达;用苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学改变;免疫组化法观察肺组织中细胞间黏附分子-1 (ICAM-1)蛋白表达.结果 与对照组比较,LPS组血浆LPS浓度(kEU/L:1 155.650±147.149比31.390±18.859)、MPO活性(U/g:1.177 ±0.093比0.775±0.166)、NF-κB活性(灰度值:1.557±0.105比0.824±0.032)、iNOS蛋白表达(灰度值:0.650±0.129比0.392±0.097)均显著升高(均P<0.05);KB干预后LPS浓度(624.461±149.012)、MPO活性(0.919±0.023)、NF-κB活性(1.127±0.074)、iNOS蛋白表达(0.425±0.066)均被明显抑制(均P<0.05).与对照组比较,LPS组血浆、肺泡灌洗液、肺组织匀浆中TNF-α(ng/L:47.325±13.864比6.534±0.544,13.382±2.231比3.748±0.692,31.127±7.399比14.948±4.673)、IL-1β(ng/L:74.329±11.890比29.921±6.487,9.422±2.674比1.105±0.364,528.509±32.073比109.945±13.561)浓度均显著增加(均P<0.05);而应用KB干预后TNF-α(20.331±7.789、7.145±1.202、15.966±2.946)、IL-1β(57.707±8.098、2.212±0.878、426.154±11.270)浓度均明显降低(血浆TNF-α:F=16.052、P=0.002,IL-1β:F=20.649、P=0.000;肺泡灌洗液TNF-α:F=31.134、P=0.001,IL-1β:F=22.792、P=0.002;肺组织匀浆TNF-α:F=10.013、P=0.009,IL-1β:F=319.857、P=0.000).光镜下观察显示,与LPS组比较,KB干预后肺组织病理改变明显减轻,ICAM-1表达明显减少.结论 KB作为新型的LPS中和剂,能够拮抗LPS对脓毒症小鼠的炎症刺激作用,减轻肺部炎症反应,保护脓毒症小鼠的肺脏功能.

目的 观察脂多糖(LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应后微小RNA-132(miR-132)的动态变化,以初步探讨miR-132在肺泡巨噬细胞炎症反应中的作用.方法 将体外去致热源培养的大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383分为空白对照组和以终浓度1 mg/LLPS刺激3、6、12及24 h组,分别收集各时间点上清液及细胞,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液中炎症因子肿瘤坏死因子-cα (TNF-α)、白细胞介素(IL-1β和IL-6)的含量,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞中miR-132的表达.结果 与空白对照组相比,LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞后3h上清液中TNF-α含量(ng/L:364.83±46.29比34.07±8.62,P<0.01)、IL-1β含量(ng/L:153.83±43.67比32.33±10.62,P<0.05)、IL-6含量(ng/L:183.85±43.52比42.62±11.21,P<0.05)即明显升高,随时间延长均逐渐升高至12h达峰值(TNF-α:605.09±57.13,IL-1β:377.09±28.55,IL-6:558.04±77.45,均P<0.01),24 h时均有所下降(TNF-α:281.95±41.61,IL-1β:263.17±51.36,IL-6:438.74±79.94),但仍显著高于空白对照组(均P<0.01).LPS刺激后3 h,miR-132表达水平较空白对照组上调了(1.12±0.11)倍(P=0.995),6、12、24h miR-132表达较空白对照组分别上调了(5.98±0.65)、(7.64±0.53)和(8.92±0.83)倍(均P<0.01).结论 LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应后,miR-132表达随时间延长逐步上调,其可能参与调控大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应.

目的:通过检测脓毒症患者外周血自然杀伤细胞(NK细胞)的表型和功能,探讨其在脓毒症免疫功能紊乱中的可能作用机制.方法采用回顾性研究方法,选择2011年8月至2013年8月安徽省立医院重症医学科收治的59例全身炎症反应综合征(SIRS)患者和65例脓毒症患者,在患者进入重症监护病房(ICU)48 h内抽取外周血,用流式细胞仪检测NK细胞的表型和功能.以同期28例健康体检者的血样本为对照.结果 SIRS和脓毒症患者外周血CD3-CD56+NK细胞比例及计数均正常,与健康对照组均无明显差异〔细胞比例:0.102±0.019、0.102±0.108比0.106±0.018,F=0.018,P=0.982;细胞计数(×106/L):182.46±65.98、172.97±63.51比179.25±60.44,F=0.349,P=0.706〕.NK细胞脱颗粒作用试验显示,健康对照组、SIRS组和脓毒症组CD107表达及γ-干扰素(IFN-γ)分泌无明显差异〔CD107:0.135±0.050、0.140±0.058、0.128±0.070,F=0.583,P=0.560;IFN-γ(kU/L):14.36±4.74、12.49±4.21、13.45±5.04, F=1.616,P=0.202〕.抗体依赖细胞毒作用(ADCC)试验显示,健康对照组、SIRS组和脓毒症组CD107表达无差异(0.574±0.166、0.643±0.165、0.581±0.157,F=0.808,P=0.448);但与健康对照组比较,SIRS组NK细胞分泌IFN-γ的能力显著增加(kU/L:40.5±13.2比28.4±9.6,P=0.001),而脓毒症组NK细胞分泌IFN-γ的能力显著降低(kU/L:19.8±6.7比28.4±9.6,P<0.01).与SIRS组比较,脓毒症组只有NK细胞表面抑制性受体CD158e(KIR 3DL1)表达明显升高(0.203±0.057比0.079±0.021,t=15.762,P<0.001);而两组间其他表型均无明显差异.与SIRS组比较,脓毒症组基础血清IFN-γ分泌水平显著降低(kU/L:0.280±0.040比0.310±0.038,t=3.390,P=0.009),IL-12的产生也明显减少(ng/L:0.15±0.03比0.30±0.08, t=32.832,P<0.001).结论 NK细胞表型和功能检测结果?

目的 探讨外周血淋巴细胞计数、淋巴细胞比例在非感染性全身炎症反应综合征(SIRS)、脓毒症及严重脓毒症患者中的变化及意义.方法 回顾分析201 1年1月至2013年9月入住北京大学第三医院急诊科重症监护病房(ICU)423例患者的临床资料,其中非感染性SIRS患者54例,脓毒症患者177例,严重脓毒症患者192例;死亡150例,存活273例.入院时检测外周血白细胞计数(WBC)、中性粒细胞比例(N)、淋巴细胞计数、淋巴细胞比例、乳酸、血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)和降钙素原(PCT)水平,并计算急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分.根据患者诊断和预后分组,比较各指标,并采用Spearman相关分析评价淋巴细胞与各指标的相关性.结果 年龄越大,病情越重.在SIRS组、脓毒症组及严重脓毒症组,随病情加重,APACHEⅡ评分(分:7.78±3.72、13.85±7.22、24.00±9.79)、住院时间[d:6.0(1.0,9.0)、12.0(8.0,22.0)、19.5(7.0,29.0)]、病死率(0、10.2%、52.6%)、WBC(×109/L:7.59±3.27、8.94±3.95、10.32±5.50)、N(0.685±0.132、0.778±0.135、0.831±0.086)、hs-CRP[mg/L:4.60(2.80,7.52)、23.58(13.49,49.22)、59.77(19.36,110.62)和PCT[μg/L:0.05(0.05,0.05)、0.09(0.05,0.61)、0.63(0.10,5.25)]呈升高趋势(均P=0.000),淋巴细胞计数[×109/L:1.53 (0.89,1.88)、0.90 (0.65,1.42)、0.80 (0.50,1.12)]、淋巴细胞比例(0.225±0.122、0.138±0.097、0.106±0.070)呈降低趋势(P<0.05和P<0.01);3组乳酸水平比较差异有统计学意义[分别为2.40(1.30,5.10)、1.10(0.80,2.00)、1.40(1.00,2.50)mmol/L,P=0.000].与存活组比较,死亡组年龄(岁:76.71±12.21比73.21±14.49)、APACHEⅡ评分(分:24.69±9.58比13.91±8.41)、住院时间[d:12.0(4.0,28.0)比11.0(8.0,22.0)]、WBC(×109/L:10.29±5.82比8.89±3.98)、N(0.809±0.130比0.776±0.120)、乳酸[mmol/L:1.80(1.10,2.90)比1.30(0.90,2.49)]、hs-CRP[mg/L:50.94(19.21,97.13)比21.71 (6.39,54.40)和PCT[μg/L:0.74 (0.13,5.83)比0.08(0.05,0.59)]明显升高(P<0.05或P<0.01),淋巴细胞计数[×109/L:0.90(0.50,1.29)比1.05 (0.70,1.54)]、淋巴细胞比例(0.123±0.098比0.143±0.097)明显降低((P<0.01和P<0.05).淋巴细胞计数与N(r=-0.597,P=0.000)、hs-CRP(r=-0.298,P=0.000)、PCT(r=-0.304,P=0.000)和APACHEⅡ评分(r=-0.214,P=0.000)呈明显负相关,与淋巴细胞比例呈明显正相关(r=0.691,P=0.000),与WBC(r=0.082,P=0.0910),乳酸(r=0.073,P=0.132)无相关性.结论 淋巴细胞水平与脓毒症的严重程度相关,监测其水平变化可作为脓毒症患者病情评估及治疗效果的辅助指标之一.

目的:探索骨髓间充质干细胞联合维生素E对急性肾损伤中炎症反应的抑制效果,开发针对急性肾损伤的新型治疗模式.方法:采用庆大霉素作为急性肾损伤药物,复制大鼠急性肾损伤模型,以骨髓间充质干细胞联合维生素E对急性肾损伤进行治疗,治疗结束后,收集大鼠的血浆和肾脏组织,采用实时荧光定量PCR及ELISA方法,评价血浆及组织中炎症蛋白的表达.结果:通过骨髓间充质干细胞联合维生素E对大鼠急性肾损伤模型进行治疗后,大鼠血浆中的炎症蛋白显著降低;在肾脏组织中,与单一应用骨髓间充质干细胞或维生素E相比,二者联合在某些炎症蛋白的抑制方面具有更明显的效果.结论:骨髓间充质干细胞联合维生素E对急性肾损伤中炎症反应具有一定抑制效果,优于单一骨髓间充质干细胞或单一维生素E的治疗方式,所以,这种联合治疗模式在急性肾损伤的治疗方面更具有临床应用价值.

中东核危机由来已久.由于以色列的"核垄断".该地区在40年时间里都处于独特的"安全失衡状态".以色列对核武器的依赖导致其不允许该地区存在其他核力量.1981年.以轰炸了伊拉克核反应堆.又于2007年打击叙利亚的核设施.对以色列核特权的恐惧导致潜在对手更渴望发展核武器.

目的 动态观察部分液体通气(PLV)对内毒素诱导急性肺损伤(ALI)幼猪促炎/抗炎因子的影响.方法 选择12头上海小白猪,按随机数字表法分为单纯机械通气(MV)组和PLV组,每组6头.静脉输注内毒素60 μg·kg-1·h-1静脉维持2h诱导ALI模型.PLV组在MV基础上气管内注入全氟萘烷(PFC) 10 mL/kg.两组分别于基础状态下和ALI模型制备成功后0、1、2、4h时监测血流动力学、呼吸力学、动脉血气分析等参数,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)动态检测血清白细胞介素(IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;光镜下观察肺组织病理学改变,并进行病理学评分.结果 PLV组给药后通气和氧合功能逐渐改善,气道阻力下降,在成模4h时各指标与MV组比较差异均有统计学意义[心率(HR,次/min):144±6比179 ±9,呼吸频率(RR,次/min):58±4比77±6,平均动脉压(MAP,mmHg,1 mmHg=0.133 kPa):99±7比75±29,肺顺应性(Cdyn,mL·cmH2O-1·kg-1):1.9±0.3比1.2±0.4,潮气量(VT,mL/kg):7.8 ±0.4比5.8±0.9,平均气道阻力(Raw,cmH2O·L-1·s-1):20.5±6.6比35.2±4.0,平均气道压(Paw,cmH2O,1 cmH2O =0.098 kPa):1.0±0.5比3.0±0.9,通气效率指标(VEI):0.18±0.02比0.08±0.02,pH值:7.386±0.143比7.148 ±0.165,动脉血氧分压(PaO2,mmHg):121.8±12.5比73.6±10.9,动脉血二氧化碳分压(PaCO2,mmHg):39.6±20.3比66.8±23.5,氧合指数(PaO2/FiO2,mmHg):311±35比184±27,P<0.05或P<0.01].两组成模时血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10均较基础状态时明显升高,且随时间延长逐渐上升,成模后各时间点PLV组促炎因子明显低于MV组,以4h时最为明显[TNF-α(ng/L):98.4±21.1比178.0±55.0,IL-1β(ng/L):142.0±38.0比226.0±55.0,IL-6(ng/L):763.0±282.0比1 303.0±260.0,IL-8(ng/L):1 183.0±403.0比1 876.0±232.0,P<0.05或P<0.01],而两组间抗炎因子IL-10差异无统计学意义(ng/L:292.0±40.0比208.0±82.0,P>0.05);PLV组TNF-α/IL-10比值于成模2h即显著低于MV组(0.58±0.13比1.13±0.54,P<0.05),而IL-6/IL-10比值在成模4h显著低于MV组(2.72±1.27比7.17±3.08,P<0.01).光镜下观察PLV组肺内炎性细胞浸润、肺充血及间质水肿均较MV组明显改善.PLV组肺损伤评分明显低于MV组(非重力依赖区:9.8±0.8比11.8±1.0,t=3.956,P=0.003;重力依赖区:5.0±0.6比14.7±2.3,t=10.127,P=0.000).结论 PLV可显著降低ALI幼猪促炎因子水平,且在维持促炎/抗炎因子平衡方面效果更明显,这可能是PLV改善肺损伤的机制之一.

为了提高单脉冲和差通道的幅相一致性,以降低测角误差,研究了幅相失衡的机理及解决途径.对此,结合单脉冲和差测角体制,分析和差通道幅相失衡的原理,并仿真其对测角特性的影响.最后,在分析理论校正模型的基础上,提出了基于FPGA的数字式校正方案,并给出了实现流程.实践表明,该方法具有较好的可行性,能有效控制和差信号的一致性.