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研究显示,HMGB1作为晚期炎症介质,在感染性早产孕妇的血清、胎盘等中的表达明显升高[1].胎盘组织内细胞丰富,尤其是红细胞、炎细胞等,对HMGB1的免疫组化染色干扰较大.本文旨在从抗原修复、消除非特异性染色方面优化HMGB1的免疫组化染色.1材料与方法1.1材料与试剂选取江苏大学附属医院2012~2013年因慢性绒毛炎早产的胎盘10例;HMGB1(1︰1 000,宜百康公司);柠檬酸缓冲液(p H 6.0)、EDTA缓冲液(p H 9.0)、EnVision显色系统及2.5 L高压锅均购于福州迈新公司.

目的:探讨血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平与脑电图(EEG)检查在手足口病(HFMD)合并脑炎患儿中的临床应用价值.方法:分析2010年1月至2012年12月我院收治的68例确诊为HFMD合并脑炎患儿的临床资料、EEG及血清NSE水平,并分析HFMD合并脑炎患儿的脑炎严重程度与EEG异常程度及血清NSE水平之间的关系.结果:68例HFMD合并脑炎患儿的首次EEG检查异常率为100%,HFMD合并脑炎患儿的脑炎严重程度与EEG的异常程度呈显著正相关(rs=0.4397,P<0.01).重度脑炎组血清NSE含量为(14.31±2.46)μg/L,明显高于中度组的(12.28±1.96)μg/L及轻度组的(10.31±1.22)μg/L(q=8.367及8.072,P均<0.01).结论:EEG及血清NSE水平对HFMD并发脑炎的严重程度判断具有重要价值.

目的:调查本地区变应性鼻炎患者变应原血清特异性IgE阳性率,比较不同年龄和性别患者血清特异性IgE阳性率的差别.方法:对145例变应性鼻炎患者进行血清吸入性和食入性变应原特异性IgE检测,并将受检者按年龄及性别分组,分别进行阳性率比较.结果:145例变应性鼻炎患者变应原特异性IgE总阳性94例,阳性率64.8%.其中,单一变应原阳性45例(47.9%),两种及以上变应原阳性49例(52.1%);以吸入性变应原为主.男性与女性变应原特异性IgE阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05);成年人与青少年阳性率比较差异有统计学意义(P

目的:寻找一种有价值的高敏感、高特异性的肿瘤标志物联合检测方法,提高消化道恶性肿瘤的诊断率。方法选择136例消化道恶性肿瘤患者作为观察组,包括结肠癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、胆管癌,均经影像学及病理检查确诊;另选择健康体检者52例作为对照组。使用电化学发光免疫法检测2组糖类抗原( CA19-9)、黏蛋白分子 CA72-4、高分子糖蛋白 CA50、甲胎蛋白(AFP)及癌胚抗原(CEA),比较2组检测结果。结果 CA19-9对胆管癌以及胰腺癌敏感度较高,AFP 则对肝癌敏感性高,CA72-4对胃癌敏感度高;对于部分消化道肿瘤,肿瘤标志物单项检测有效性以及灵敏度与联合检测相比较均显著降低( P 均﹤0.05),但部分联合检测的特异性有一定下降。对于胰腺癌、胆管癌以及结肠癌,CEA 联合CA19-9、CA50为首选检测标志物;对于胃癌,CEA 联合 CA19-9、CA72-4可作为首选标志物;对于肝癌,CEA 联合AFP 是首选标志物。胰腺癌及结肠癌术后几种标志物水平均有下降,术后1.5个月 CEA 与 CA19-9恢复趋于正常。结论对于消化道恶性肿瘤,选择互补性较强且有价值的肿瘤标志物十分重要,可做到早发现、早诊断及早治疗,有着较重要的临床价值和应用意义。

目的 探讨程序性坏死特异性抑制剂-1(Nec-1)对创伤失血性休克大鼠的肝脏保护作用.方法 采用左下肢股骨、胫骨骨折及腹部软组织损伤并失血/再灌注的方法制备大鼠创伤失血性休克模型.选择雄性SD大鼠,22只按随机数字表法分为模型组和Nec-1组,每组11只,观察72 h死亡率.72只同法随机分为假手术组、模型组、Nec-1组,每组24只.假手术组仅麻醉和分离、结扎血管,不进行创伤、失血、再灌注;Nec-1组于再灌注前5 min经股静脉给予1 mg/kg Nec-1;模型组给予等体积溶剂.于再灌注后2、4、8h采集各组血清和肝组织,用全自动生化仪检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的水平;光镜下观察肝组织病理学改变;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA表达;蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肝组织受体相互作用蛋白酶-1/3(RIP1/RIP3)的蛋白表达.结果 Nec-1组大鼠72 h死亡率较模型组明显降低[18.18%(2/11)比63.64%(7/11),P=0.040].模型组2h血清ALT、AST即较假手术组明显升高[ALT(U/L):110.21 ±22.32比80.98±19.94,AST (U/L):364.29±64.83比279.76±70.64,均P<0.05],8h达高峰[ALT(U/L):387.41±47.11比82.76±22.44,AST(U/L):973.35±77.51比261.49±52.03,均P<0.01].Nec-1组血清ALT、AST水平较模型组明显降低[ALT(U/L)4 h:144.64±33.79比213.96±36.21,8 h:159.48±43.57比387.41 ±47.11;AST(U/L)4 h:398.78±59.48比630.61±59.93,8 h:427.38±80.75比973.35±77.51,均P<0.01].光镜下模型组大鼠肝窦扩张、淤血,肝细胞变性、坏死,大量炎性细胞浸润;Nec-1组肝组织损伤程度明显减轻.模型组肝组织TNF-α、IL-1β的mRNA表达和RIP1、RIP3的蛋白表达随时间延长呈逐渐升高趋势;给予Nec-1后各时间点TNF-α、IL-1β的mRNA表达均较模型组明显降低,以8h最为明显(TNF-α mRNA:1.457±0.081比2.317-0.062,IL-1β mRNA:0.690-0.087比1.812±0.112,均P<0.01),而肝组织RIP1、RIP3的蛋白表达与模型组相比差异无统计学意义(RIP1蛋白8 h:0.561±0.033比0.587±0.036,RIP3蛋白8 h:0.976±0.040比1.044±0.115,均P>0.05).结论 Nec-1对创伤失血性休克大鼠肝脏具有明显的保护作用,具体机制需进一步深入研究.

病毒是引起小儿感染的最常见病原之一,尤其在婴幼儿更为突出.在急性上、下呼吸道感染性疾病中病毒病原占有很大比例.常见的病毒有呼吸道合胞病毒、流感病毒、副流感病毒、EB病毒、CMV病毒、单纯疱疹病毒、偏肺病毒、腺病毒.目前从我国

目的:建立一套快速制备斑马鱼肝脏特异表达转基因载体的新方法.方法:首先利用multi-site gateway技术将斑马鱼肝脏脂肪酸结合蛋白(fabp10a)启动子片段与入门载体进行BP重组获得启动子的入门克隆pENTR-fabp10a,然后将目的基因克隆到载体pME-MCS中形成入门克隆pENTR-interest,最后通过multi-site gateway技术将pENTR-fabp10a、pENTR-interest和含有EGFP标记基因的p3E-IRES-EGFPpA质粒在To12转座载体pDestTo12pA2上进行定向重组即可获得斑马鱼肝脏特异性表达转基因载体pTo12-fabp10a-interest-IRES-EGFP.本研究采用红色荧光蛋白基因DsRed2作为目的基因,用上述方法构建了转基因载体pTo12-fabp10a-DsRed2-IRES-EGFP,并将其注射至单细胞期斑马鱼胚胎中进行表达分析.结果:转基因载体pTo12-fabp10a-DsRed2-IRES-EGFP在斑马鱼肝脏组织中能实现红色和绿色荧光蛋白同步特异表达.结论:利用To12转座系统以及multi-site gateway技术构建斑马鱼肝脏特异性表达转基因载体是一套行之有效的方法.

目的探讨老年术后认知功能障碍(POCD)患者血清氧化应激状态与NSE、S-100B水平及临床意义.方法选择接受全麻的老年患者128例,根据术前及术后MMSE变化分为非POCD组61例及POCD组67例,分别检测2组血清氧化应激状态与NSE及S-100β.结果非POCD组术后S-100β较术前有显著增加(P<0.05),POCD组NSE、S-100β、MMSE较术前差异有统计学意义(P<0.05),术后POCD组NSE、S-100β、MMSE较非POCD组差异有统计学意义(P<0.05).POCD组MDA、SOD、GSH较术前差异有统计学意义(P<0.05),术后POCD组MDA、SOD、GSH较非POCD组差异有统计学意义(P<0.05).NSE与SOD呈负相关(P<0.05),S-100β与MDA呈正相关(P<0.05),与SOD、GSH显著负相关(P<0.05).结论活性氧损伤是导致POCD发生的重要机制,与NSE、S-100β结合有助于对该疾病发生及进展做出监测.

目的:探讨前列腺特异性膜抗原(PSMA)是否通过c-Jun氨基末端激酶/应激激活的蛋白激酶(JNK/SAPK)通路对前列腺癌细胞凋亡进行调控.方法:利用前期研究中建立的高效阻断PSMA表达的shRNA慢病毒载体,阻断前列腺癌细胞中PSMA的表达作为实验的干扰组;同时利用构建的PSMA载体转染前列腺癌细胞,促进前列腺癌细胞中PSMA的表达作为阳性实验组;不做任何处理的细胞株作为空白组;加入JNK/SAPK抑制剂SP600125作为阴性对照.Western blotting及免疫细胞化学方法观察各组细胞p-JNK/SAPK的表达量,CCK-8法检测细胞生长情况、流式细胞术检测细胞周期及凋亡.结果:Western blotting及细胞免疫化学提示抑制PSMA表达后,p-JNK/SAPK表达水平下降;增强PSMA表达后p-JNK/SAPK表达水平上升;在SP600125作用下,3组细胞p-JNK/SAPK均处于较低水平,且彼此无明显差异.CCK-8法和流式细胞术检测细胞周期提示PSMA表达受抑制后细胞增殖能力下降,细胞S期百分比减少;增加PSMA表达,细胞增殖能力增强,S期百分比增加;在SP600125作用下,3组细胞增殖和S期百分比均处于低水平,无明显差异.在抑制PSMA表达组中,前列腺癌细胞的凋亡率明显升高;而在增强PSMA表达组,细胞凋亡率明显降低;加入SP600125后,细胞凋亡率均低于常规培养组.结论:PSMA通过上调JNK/SAPK信号通路对前列腺癌细胞的增殖、细胞周期及凋亡产生影响,但JNK/SAPK并不是唯一通路.

目的 研究线粒体膜通透性转换(MPT)与肝细胞凋亡及线粒体损伤之间的关系,初步探讨姜黄素对MPT的影响及其可能机制.方法 将15只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、脓毒症组及姜黄素组,每组5只.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型;假手术组仅开腹翻动盲肠,不进行结扎、穿孔.姜黄素组术前以100 mg·kg-1·d-1姜黄素溶于生理盐水至10 mL/kg,连续灌胃7d,其余组灌胃等量生理盐水.术后12h取肝组织,透射电镜下观察肝细胞线粒体形态学改变;采用钙离子荧光探针Fluo-3/AM检测细胞内游离Ca2+浓度;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)和B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)及其相关X蛋白(Bax)的蛋白表达;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝细胞活化caspase-3、Bcl-2、Bax的mRNA表达.结果 透射电镜下观察假手术组细胞膜完整,胞质均匀,线粒体正常、清晰;脓毒症组肝细胞线粒体明显肿胀,内膜嵴断裂或消失,双层膜结构消失;姜黄素组线粒体轻度肿胀,少数细胞出现线粒体肿胀,双侧膜结构不清.假手术组、姜黄素组、脓毒症组荧光强度指数依次增高,分别为417.33±15.88、772.95±42.37、1 560.84±160.78 (F=184.149,P=0.000).脓毒症组活化caspase-3和Bax的蛋白及mRNA表达最高,姜黄素组次之,假手术组最低[活化caspase-3蛋白(灰度值):1.698±0.061、0.694±0.045、0.246±0.027,F=1 289.667,P=0.000;活化caspase-3 mRNA(2-ΔΔα):1.031±0.135、0.578±0.144、0.183±0.036,F=66.958,P=0.000; Bax蛋白(灰度值):1.826±0.126、1.254±0.140、0.623±0.901,F=94.536,P=0.000; Bax mRNA(2-△△Ct):2.774±0.338、1.661±0.226、0.656±0.114,F=124.710,P=0.000],且各组间两两比较差异均有统计学意义(均P<0.01);而假手术组、脓毒症组、姜黄素组Bcl-2的蛋白及mRNA表达依次升高[Bcl-2蛋白(灰度值):0.716±0.091、1.328±0.147、1.656±0.104,F=84.918,P=0.000; Bcl-2 mRNA(2△△Ct):0.617±0.118、1.393±0.096、1.650±0.167,F=83.846,P=0.000].脓毒症组Bcl-2/Bax的蛋白及mRNA表达最低,假手术组次之,姜黄素组最高[Bcl-2/Bax蛋白(灰度值):0.726±0.055、1.150±0.043、1.333±0.163,F=46.265,P=0.000; Bcl-2/Bax mRNA(2-ΔΔCt):0.505±0.041、0.944±0.097、1.006±0.168,F=12.211,P=0.001].结论 MPT可导致线粒体功能损伤,并进一步引起肝细胞凋亡;姜黄素通过降低细胞内Ca+浓度、促进抗凋亡基因Bcl-2表达以及抑制caspase-3活化和Bax基因表达,从而发挥调节MPT的作用.