科创中国

目的:探讨血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)水平与脑电图(EEG)检查在手足口病(HFMD)合并脑炎患儿中的临床应用价值.方法:分析2010年1月至2012年12月我院收治的68例确诊为HFMD合并脑炎患儿的临床资料、EEG及血清NSE水平,并分析HFMD合并脑炎患儿的脑炎严重程度与EEG异常程度及血清NSE水平之间的关系.结果:68例HFMD合并脑炎患儿的首次EEG检查异常率为100%,HFMD合并脑炎患儿的脑炎严重程度与EEG的异常程度呈显著正相关(rs=0.4397,P<0.01).重度脑炎组血清NSE含量为(14.31±2.46)μg/L,明显高于中度组的(12.28±1.96)μg/L及轻度组的(10.31±1.22)μg/L(q=8.367及8.072,P均<0.01).结论:EEG及血清NSE水平对HFMD并发脑炎的严重程度判断具有重要价值.

目的探讨老年术后认知功能障碍(POCD)患者血清氧化应激状态与NSE、S-100B水平及临床意义.方法选择接受全麻的老年患者128例,根据术前及术后MMSE变化分为非POCD组61例及POCD组67例,分别检测2组血清氧化应激状态与NSE及S-100β.结果非POCD组术后S-100β较术前有显著增加(P<0.05),POCD组NSE、S-100β、MMSE较术前差异有统计学意义(P<0.05),术后POCD组NSE、S-100β、MMSE较非POCD组差异有统计学意义(P<0.05).POCD组MDA、SOD、GSH较术前差异有统计学意义(P<0.05),术后POCD组MDA、SOD、GSH较非POCD组差异有统计学意义(P<0.05).NSE与SOD呈负相关(P<0.05),S-100β与MDA呈正相关(P<0.05),与SOD、GSH显著负相关(P<0.05).结论活性氧损伤是导致POCD发生的重要机制,与NSE、S-100β结合有助于对该疾病发生及进展做出监测.

研究显示,HMGB1作为晚期炎症介质,在感染性早产孕妇的血清、胎盘等中的表达明显升高[1].胎盘组织内细胞丰富,尤其是红细胞、炎细胞等,对HMGB1的免疫组化染色干扰较大.本文旨在从抗原修复、消除非特异性染色方面优化HMGB1的免疫组化染色.1材料与方法1.1材料与试剂选取江苏大学附属医院2012~2013年因慢性绒毛炎早产的胎盘10例;HMGB1(1︰1 000,宜百康公司);柠檬酸缓冲液(p H 6.0)、EDTA缓冲液(p H 9.0)、EnVision显色系统及2.5 L高压锅均购于福州迈新公司.

目的:探讨乳头状胶质神经元肿瘤( papillary glioneuronal tumor, PGNT)的临床病理学特征、免疫表型及鉴别诊断。方法分析3例PGNT的临床表现、影像学、病理形态及免疫表型特征,并复习相关文献。结果本组中女性2例,男性1例,临床表现为头晕或慢性难治性癫痫,头部MRI检查显示左侧颞叶或右侧顶叶脑实质内囊性占位。镜下可见肿瘤由星形胶质细胞、少突样胶质细胞和神经节细胞及神经节样细胞构成,呈假乳头状排列,乳头中心为玻璃样变性的血管。免疫表型:星形胶质细胞GFAP阳性,少突样胶质细胞Olig-2阳性,神经节细胞Syn、NeuN阳性。结论 PGNT是一种新增的、少见的神经元-胶质混合性肿瘤,绝大多数呈良性经过,属WHOⅠ级,预后良好。熟悉其病理学特征有助于与其他具有乳头状结构的中枢神经系统肿瘤鉴别诊断。

目的:研究Sombati细胞模型中神经元Toll样受体4(TLR4)表达变化,探讨TLR4在Sombati癫痫细胞发病过程中的意义.方法:将新生SD乳鼠海马神经元进行体外培养至第9天,随机分为对照组和Sombati细胞模型组,分别检测TLR4蛋白及TLR4mRNA的表达.结果:免疫组化结果显示Sombati细胞TLR4蛋白表达增强,荧光定量PCR显示Sombati细胞组TLR4 mRNA表达增加(P<0.05),且随时间的延长而增强.结论:Sombati细胞模型中TLR4mRNA与蛋白表达均增加,可能与癫痫的发病有关.

目的 研究丙戊酸(VPA)对致死性烫伤大鼠心肌的保护作用及机制.方法 78只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假烫组(n=10)、假烫+VPA组(n=10)、烫伤组(n=29)、烫伤+VPA组(n=29)4组.采用80℃水浴浸泡背部15s、双下肢15s、腹部8s造成55%总体表面积(TBSA)Ⅲ度烫伤大鼠模型;假烫组用37℃水浴浸泡,部位和时间与烫伤组相同.烫伤(假烫)后即刻皮下注射VPA300 mg/kg或等体积生理盐水(作为对照).各组分别于烫伤后6h取5只大鼠腹主动脉血,测定血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平;然后处死动物取心肌组织,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测心肌细胞中组蛋白乙酰化水平及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)活化水平;各组余下大鼠观察12h生存情况.结果 与假烫组相比,烫伤组大鼠伤后6h血浆CK-MB水平明显升高(U/L:5 438.0±413.6比2 881.0±324.8,P<0.05),心肌组蛋白3第9位乙酰化的赖氨酸(Ac-H3K9)水平明显降低(灰度值:0.55±0.18比1.00±0.20,P<0.05),心肌caspase-3活化水平明显增高(灰度值:1.75±0.25比1.00±0.18,P< 0.05);而给予VPA处理后能明显降低血浆CK-MB水平[(4018.0±388.3) U/L],明显升高心肌Ac-H3K9水平(灰度值:2.20±0.23),明显降低心肌caspase-3活化水平(灰度值:1.33±0.20),与烫伤组比较差异均有统计学意义(均P<0.05).Kaplan-Meier生存曲线分析发现,VPA能显著延长大鼠烫伤后存活时间,12h时大鼠存活率可由0升高至50%(P<0.05).结论 VPA能改善致死性烫伤休克大鼠心肌酶学指标并延长其存活时间,其机制可能与其对组蛋白去乙酰化酶及caspase-3的抑制作用有关.

目的:调查本地区变应性鼻炎患者变应原血清特异性IgE阳性率,比较不同年龄和性别患者血清特异性IgE阳性率的差别.方法:对145例变应性鼻炎患者进行血清吸入性和食入性变应原特异性IgE检测,并将受检者按年龄及性别分组,分别进行阳性率比较.结果:145例变应性鼻炎患者变应原特异性IgE总阳性94例,阳性率64.8%.其中,单一变应原阳性45例(47.9%),两种及以上变应原阳性49例(52.1%);以吸入性变应原为主.男性与女性变应原特异性IgE阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05);成年人与青少年阳性率比较差异有统计学意义(P

目的 研究线粒体膜通透性转换(MPT)与肝细胞凋亡及线粒体损伤之间的关系,初步探讨姜黄素对MPT的影响及其可能机制.方法 将15只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、脓毒症组及姜黄素组,每组5只.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型;假手术组仅开腹翻动盲肠,不进行结扎、穿孔.姜黄素组术前以100 mg·kg-1·d-1姜黄素溶于生理盐水至10 mL/kg,连续灌胃7d,其余组灌胃等量生理盐水.术后12h取肝组织,透射电镜下观察肝细胞线粒体形态学改变;采用钙离子荧光探针Fluo-3/AM检测细胞内游离Ca2+浓度;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)和B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)及其相关X蛋白(Bax)的蛋白表达;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝细胞活化caspase-3、Bcl-2、Bax的mRNA表达.结果 透射电镜下观察假手术组细胞膜完整,胞质均匀,线粒体正常、清晰;脓毒症组肝细胞线粒体明显肿胀,内膜嵴断裂或消失,双层膜结构消失;姜黄素组线粒体轻度肿胀,少数细胞出现线粒体肿胀,双侧膜结构不清.假手术组、姜黄素组、脓毒症组荧光强度指数依次增高,分别为417.33±15.88、772.95±42.37、1 560.84±160.78 (F=184.149,P=0.000).脓毒症组活化caspase-3和Bax的蛋白及mRNA表达最高,姜黄素组次之,假手术组最低[活化caspase-3蛋白(灰度值):1.698±0.061、0.694±0.045、0.246±0.027,F=1 289.667,P=0.000;活化caspase-3 mRNA(2-ΔΔα):1.031±0.135、0.578±0.144、0.183±0.036,F=66.958,P=0.000; Bax蛋白(灰度值):1.826±0.126、1.254±0.140、0.623±0.901,F=94.536,P=0.000; Bax mRNA(2-△△Ct):2.774±0.338、1.661±0.226、0.656±0.114,F=124.710,P=0.000],且各组间两两比较差异均有统计学意义(均P<0.01);而假手术组、脓毒症组、姜黄素组Bcl-2的蛋白及mRNA表达依次升高[Bcl-2蛋白(灰度值):0.716±0.091、1.328±0.147、1.656±0.104,F=84.918,P=0.000; Bcl-2 mRNA(2△△Ct):0.617±0.118、1.393±0.096、1.650±0.167,F=83.846,P=0.000].脓毒症组Bcl-2/Bax的蛋白及mRNA表达最低,假手术组次之,姜黄素组最高[Bcl-2/Bax蛋白(灰度值):0.726±0.055、1.150±0.043、1.333±0.163,F=46.265,P=0.000; Bcl-2/Bax mRNA(2-ΔΔCt):0.505±0.041、0.944±0.097、1.006±0.168,F=12.211,P=0.001].结论 MPT可导致线粒体功能损伤,并进一步引起肝细胞凋亡;姜黄素通过降低细胞内Ca+浓度、促进抗凋亡基因Bcl-2表达以及抑制caspase-3活化和Bax基因表达,从而发挥调节MPT的作用.

目的:寻找一种有价值的高敏感、高特异性的肿瘤标志物联合检测方法,提高消化道恶性肿瘤的诊断率。方法选择136例消化道恶性肿瘤患者作为观察组,包括结肠癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、胆管癌,均经影像学及病理检查确诊;另选择健康体检者52例作为对照组。使用电化学发光免疫法检测2组糖类抗原( CA19-9)、黏蛋白分子 CA72-4、高分子糖蛋白 CA50、甲胎蛋白(AFP)及癌胚抗原(CEA),比较2组检测结果。结果 CA19-9对胆管癌以及胰腺癌敏感度较高,AFP 则对肝癌敏感性高,CA72-4对胃癌敏感度高;对于部分消化道肿瘤,肿瘤标志物单项检测有效性以及灵敏度与联合检测相比较均显著降低( P 均﹤0.05),但部分联合检测的特异性有一定下降。对于胰腺癌、胆管癌以及结肠癌,CEA 联合CA19-9、CA50为首选检测标志物;对于胃癌,CEA 联合 CA19-9、CA72-4可作为首选标志物;对于肝癌,CEA 联合AFP 是首选标志物。胰腺癌及结肠癌术后几种标志物水平均有下降,术后1.5个月 CEA 与 CA19-9恢复趋于正常。结论对于消化道恶性肿瘤,选择互补性较强且有价值的肿瘤标志物十分重要,可做到早发现、早诊断及早治疗,有着较重要的临床价值和应用意义。

目的:建立谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型,观察雌激素及雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)对谷氨酸诱导的神经细胞损伤的作用.方法:原代培养小鼠大脑皮层神经细胞,神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)免疫组化染色鉴定神经元的纯度.建立谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型.用前期实验中已构建成功的ERα重组慢病毒(V-ERα-RFP-flag)感染经谷氨酸诱导的神经细胞.实时荧光定量PCR和Western blotting检测ERα mRNA和蛋白表达水平.实验分为3组:(1)对照组:用空慢病毒(V-RFP-flag)感染经谷氨酸诱导的神经细胞;(2)雌激素组:用雌激素干预经谷氨酸诱导的神经细胞;(3)慢病毒组:用V-ERα-RFP-flag感染经谷氨酸诱导的神经细胞.流式细胞术检测各组神经细胞凋亡率;实时荧光定量PCR及免疫荧光染色检测各组神经细胞中N-甲基-D-天冬氨酸受体1(N-methyl-D-aspartate receptor 1,NMDAR1)及囊泡膜谷氨酸转运体蛋白1(vesicular glutamate transporter protein 1,VGLUT1)的变化.结果:成功原代培养神经细胞,经NSE免疫组化方法鉴定神经元纯度大于90%.成功建立经谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型.MOI=7的V-ERα-RFP-flag感染神经细胞72 h后,在荧光显微镜观察下可见到红色荧光表达,与对照病毒相比,能增加神经细胞中ERα mRNA和蛋白表达水平(P<0.01).与对照组相比,雌激素组和慢病毒组细胞凋亡率降低(P<0.05),且实时荧光定量PCR结果显示,雌激素组和慢病毒组的NMDAR1和VGLUT1 mRNA表达降低(P<0.05),免疫荧光实验结果提示NMDAR1和VGLUT1阳性的细胞数减少(P<0.01).结论:雌激素和ERα能减轻谷氨酸对神经细胞的损伤效应,该保护作用可能通过抑制NMDAR1和VGLUT1的表达来实现.