科创中国

遗传和环境因素均参与糖尿病及其并发症的病理过程,表观遗传调控在其中的作用也日渐明确.糖尿病及其并发症中的主要病理过程如高血糖、氧化应激、炎症等均会导致表观遗传调控的异常,从而影响染色质结构和基因表达,而这些染色质表观遗传修饰的持续存在和糖尿病相关的代谢记忆现象相联系.表现机制相关的药物和治疗手段的研发或将成为糖尿病及相关并发症靶向治疗的新方面.

Muller细胞接触并包裹视网膜神经元细胞体和突触,对视网膜神经元的功能及代谢起到支持作用;对维护视网膜细胞外环境的稳定,如离子、水平衡和血视网膜屏障(BRB)等具有重要调控作用;可释放神经胶质递质和刺激性神经物质,通过对神经递质的再吸收循环,为视网膜神经元提供神经递质前体进而影响神经突触的活性.此外,Muller细胞对病理刺激能够产生反应.该反应一方面具有视网膜神经元保护作用,如分泌神经营养因子、吸收降解兴奋性毒素、分泌抗氧化剂等,另一方面也可引起视网膜神经元谷氨酸盐代谢紊乱和离子平衡紊乱,导致视网膜水肿和神经元变性损伤.Muller细胞对糖尿病视网膜病变(DR)的发生发展具有重要影响.DR可引起Muller细胞增生,除造成谷氨酸盐代谢紊乱外,还会引起Muller细胞大量分泌炎症介质和血管内皮生长因子等破坏BRB.深入研究Muller细胞,对探讨DR的发病及防治具有重要意义.针对Muller细胞靶向转染的腺病毒载体研制成功,利用两亲肽携带蛋白或抗体直接转染细胞达到抑制DR的效果,这些方法为早期防治DR提供了新的途径.

目的 观察早期糖尿病视网膜病变(DR)状态下,以pSUPER为载体的缺氧诱导因子1α(HIF1α)特异性小干扰(siHIF1α)RNA对髓样细胞表面黏附分子CD18及神经损伤诱导蛋白-1(Ninj-1)表达的影响.方法 实验分为健康人血清培养组(A组)、糖尿病血清培养组(B组)、糖尿病血清培养联合pSUPERH1-siHIF1α转染组(C组)及糖尿病血清培养联合pSUPER空载体组(D组)进行.A组采用健康志愿者血清培养人髓样细胞系白血病细胞系(K562)细胞;B、C、D组均采用DR患者血清培养K562细胞.C、D组在加入DR患者血清前24 h分别转染pSUPERH1-siHIF1α及pSUPER空载体.采用流式细胞仪检测各组K562细胞表面的CD18、Ninj-1表达.行细胞黏附实验,检测各组K562细胞与恒河猴视网膜脉络膜血管内皮细胞系(RF/6A)细胞黏附率.结果 A、B、C、D组K562细胞表面CD18表达比较,4组间差异有统计学意义(F=14.33,P=0.01).组间CD 18表达两两比较,B组明显高于A组(P=0.001);C组明显低于B组(P=0.001)和D组(P=0.02);C组与A组间无明显差异(95%可信区间=-14.89~2.13,P=0.12).A、B、C、D组K562细胞表面Ninj-1表达比较,4组间差异有统计学意义(F=39.38,P=0.001).组间Ninj-1表达两两比较,B组明显高于A组(P=0.00);C组与B组间无明显差异(P=0.06);C组与D组间也无明显差异(P=0.49).A、B、C、D组K562细胞与RF/6A细胞黏附率比较,4组间差异有统计学意义(F=20.62,P=0.00).组间K562细胞与RF/6A细胞黏附率两两比较,B组明显高于A组(P=0.00);C组较B组明显下降(P=0.01),较A组明显提高(P=0.002);B组与D组间无明显差异(P=0.68).结论 早期DR状态下,以pSUPER为载体的siHIF1α RNA可降低K562细胞表面CD18的表达,但对Ninj-1表达无明显影响.

目的 观察血管内皮生长抑制因子(VEGI)及其相关因子在糖尿病(DM)大鼠外周血、玻璃体液及视网膜组织中的表达,探讨VEGI在糖尿病视网膜病变(DR)发病机制中的作用.方法 70只6周龄雄性Wistar大鼠,随机分为空白对照组(10只),DM 1、3、6个月组(各20只).DM大鼠模型建立后,分别于1、3、6个月时取大鼠外周血、玻璃体液、全眼球.酶联免疫吸附测定法检测肿瘤坏死因子样配体1/血管内皮生长抑制因子251(TL1A/VEGI 251)、血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)在血清及玻璃体液浓度,石蜡切片免疫组织化学法检测各因子在视网膜组织中的表达,苏木素-伊红(HE)染色评价各组大鼠DR进程.比较空白对照组和DM实验组间大鼠血清、玻璃体液及视网膜组织中TL1A、VEGF、TNF-α、IL-1β的表达差异.结果 分析采用单因素方差分析、独立样本f检验和最小显著差法检验.结果 空白对照组、DM 1、3、6个月组大鼠血清TL1A浓度分别为(92.09±2.05)、(118.36±8.30)、(85.90±7.51)、(78.90±4.88) ng/L,组间血清TL1A浓度比较,差异有统计学意义(F=77.405,P<0.05).从空白对照组到DM 1、3、6个月组,大鼠血清TNF-α、IL-1β浓度均呈升高趋势,4组间血清TNF-α、IL-1β浓度比较,差异有统计学意义(F=3.508、15.416,P<0.05).VEGF浓度在DM 1个月时升高,DM 3个月时下降,DM 6个月时再次升高,但4组间VEGF浓度比较,差异无统计学意义(F=1.242,P>0.05).各组大鼠玻璃体液TL1A浓度分别为(91.50±8.18)、(67.03±6.74)、(47.44±4.92)、(46.01±4.62) ng/L,组间TL1A浓度比较,差异有统计学意义(F=114.777,P<0.05).从空白对照组到DM 1、3、6个月组,大鼠玻璃体液VEGF、TNF-α、IL-1β浓度均呈升高趋势,4组间VEGF、TNF-α、IL-1β比较,差异有统计学意义(F=8.816、4.392、3.635,P<0.05).免疫组织化学检测结果显示,DM 1、3个月组大鼠视网膜TL1A表达吸光度[A,旧称光密度(OD)]值均较空白对照组降低(t=6.851、6.066,P<0.05),但DM 6个月组与空白对照组的TL1A表达A值比较,差异无统计学意义(t=1.401,P>0.05);DM各组大鼠视网膜VEGF和TNF-α表达A值均较空白对照组显著升高(tVEGF=-4.709、-16.406、-9.228,P<0.05;t TNF.=-4.703、-6.583、-17.762,P<0.05);DM 1、6个月组大鼠视网膜IL-1β表达A值均较空白对照组显著升高(t=-4.108、-3.495,P<0.05),但DM 3个月组与空白对照组IL-1β表达A值比较,差异无统计学意义(t=-0.997,P>0.05).HE染色结果显示,空白对照组与DM 1个月组大鼠视网膜组织结构基本正常;DM 3个月组大鼠视网膜组织水肿,细胞排列紊乱;DM 6个月组大鼠视网膜组织明显水肿,神经节细胞核染色加深,内丛状层可见大量新生血管,内核层细胞排列紊乱、水肿,可见大量脂肪空泡,视网膜各层结构不清晰.结论 VEGI可能通过与VEGF、TNF-α、IL-1β等因子的相互作用参与DR的发生发展过程.

目的 观察糖尿病视网膜病变(DR)患眼激光光凝治疗前后黄斑区脉络膜厚度的变化.方法 经荧光素眼底血管造影检查确诊为3~5期DR且符合激光光凝治疗指征的23例患者45只眼纳入研究.其中,男性10例,女性13例;平均年龄(55.48±5.43)岁.所有患眼均行黄斑区格栅样激光光凝及全视网膜激光光凝治疗.治疗前及治疗后1、2、3、4周,采用频域光相干断层扫描的增强深部成像技术对所有患眼黄斑区脉络膜进行水平扫描,测量黄斑中心凹下脉络膜厚度(SFCT)、距中心凹1、3、6 mm的鼻侧脉络膜厚度(NCT)和颞侧脉络膜厚度(TCT).对比观察治疗前后患眼不同测量位点脉络膜厚度的变化.结果 治疗后1周,患眼SFCT、NCT1mm、NCT3 mm、TCT1 mm、TCT3 mm、TCT6 mm较治疗前明显增厚,差异均有统计学意义(t=4.728、4.422、3.759、3.743、5.713、2.502,P<0.05).治疗后2周,患眼SFCT、NCT1 mm、NCT3 mm、TCT1mm、TCT3 mm较治疗后1周变薄,差异均有统计学意义(t=3.189、2.122、2.742、2.196、2.076,P<0.05).治疗后2、3、4周和治疗前比较,患眼各测量位点脉络膜厚度均无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05).治疗前后患眼NCT6 mm比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 激光光凝治疗后1周内DR患眼脉络膜厚度明显增厚,随着治疗后时间的延长其厚度逐渐降低.

目的 观察视网膜分支静脉阻塞(BRVO)模型兔眼视网膜微循环变化,评估激光散斑成像(LSI)技术定量监测兔眼视网膜微循环的可行性.方法 4月龄健康青紫蓝兔10只纳入实验,选取右眼作为实验眼.裂隙灯显微镜下选择兔眼视网膜毗邻视盘0.5~1.0 mm处的视网膜主干静脉为靶血管,利用仪器自带软件测量靶血管直径以及靶血管0.2 mm2区域面积的血流量.采用光动力疗法诱导建立兔眼BRVO模型.建模10 min后采用与建模前相同的方法测量兔眼眼底相同位置血管直径和相同区域面积的血流量.结果 LSI技术可获得同步显示的彩色眼底、红外激光和血流分布伪彩图图像.建模前与建模后10 min,靶血管直径分别为(0.104±0.009)、(0.122±0.008) mm,靶血管0.2 mm2区域面积的血流量分别为(578.400±25.638)、(244.000±49.295)PU.建模后靶血管直径较建模前明显增粗,差异有统计学意义(t=12.114,P=0.008).建模后靶血管0.2 mm2区域面积的血流量较建模前明显降低,差异也有统计学意义(t=183.00,P=0.009).结论 BRVO模型兔眼眼底靶血管直径明显增粗,靶血管0.2 mm2区域面积的血流量明显降低.LSI技术可实时定量检测兔眼视网膜微循环状态.

目的 观察糖尿病黄斑水肿(DME)患眼不同眼底自身荧光(FAF)和光相干断层扫描(OCT)图像分型以及黄斑中心凹视网膜厚度(CRT)、黄斑体积与最佳矫正视力(BCVA)的关系.方法 临床检查确诊的DME患者47例84只眼纳入研究.所有患眼均行BCVA、眼底彩色照相、FAF、OCT检查.根据FAF检查结果,将患眼分为正常组、单囊样增强组、多囊样增强组;OCT检查结果,将患眼分为弥漫水肿型、囊样水肿型、浆液视网膜脱离型.其中,正常组、单囊样增强组、多囊样增强组分别为30、20、34只眼;OCT检查所见的弥漫水肿、囊样水肿、浆液视网膜脱离分别为44、18、22只眼.统计FAF各组中不同OCT分型者的比例;不同FAF分型患眼BCVA、平均CRT、平均黄斑体积的关系;不同OCT分型患眼平均CRT、平均黄斑体积与BCVA的关系.结果 患眼平均BCVA 0.38±0.26;平均CRT(360.23±139.40) μm;平均黄斑体积(9.59±1.97) mm3.正常组、单囊样增强组中,弥漫水肿型患眼分别占本组患眼的83.3%、60.0%;多囊样增强组中浆液视网膜脱离型患眼占本组患眼的50.0%.正常组、单囊样增强组、多囊样增强组患眼平均BCVA分别为0.47±0.26、0.43±0.30、0.28±0.19;平均CRT分别为(275.50±58.22)、(315.50±100.55)、(461.29±147.68) μm;平均黄斑体积分别为(8.67±1.03)、(8.94±1.63)、(10.79±2.20) mm3.3组间平均BCVA(x2 =11.34)、CRT(x2 =30.25)、黄斑体积(x2=20.14)比较,差异有统计学意义(P<0.05).弥漫水肿型、囊样水肿型、浆液脱离型患眼平均BVCA分别为0.43±0.25、0.45±0.30、0.22±0.14;平均CRT分别为(272.41±48.62)、(402.84±134.89)、(505.67±135.20) μm;平均黄斑体积分别为(8.58±0.95)、(9.22±1.33)、(12.03±2.01)mm3.不同类型黄斑水肿患眼平均BCVA(x2=11.79)、CRT(x2 =42.38)、黄斑体积(x2=39.00)比较,差异有统计学意义(P<0.05).相关性分析结果显示,CRT与黄斑体积呈显著相关(r=0.85,P<0.05);BCVA与CRT、黄斑体积呈负相关(r=-0.31、-0.34,P>0.05).结论 正常组、单囊样增强组弥漫水肿型患眼最多,多囊样增强组浆液脱离型患眼最多.FAF分型较OCT分型,与视力的关系更加密切.

糖尿病视网膜病变(DR)临床研究涉及的领域庞大,选题方向广泛.DR与全身疾病的关系、发生发展的影响因素以及早期筛检发现手段、减少延缓DR发生发展的措施以及改进提高治疗效果的干预手段等一些围绕改善DR治疗效果的临床研究是目前DR临床研究的热点.但由于DR发病机制复杂,影响其发生发展的因素众多,导致DR防控周期长,涉及层面复杂以及DR临床研究中不易剔除的混杂因素较多均是DR临床研究的难点.从长远角度看,延缓DR发生和进展、建立高效实用的防控体系等方面的研究是未来应着重关注的研究方向.

缝隙连接是相邻细胞之间直接交换离子和小分子物质的通道,由相邻细胞膜上的2个连接子相互锚定组成.连接子是由6个缝隙连接蛋白亚单位构成的六聚体.视网膜各层细胞均有缝隙连接蛋白表达.缝隙连接不仅参与视网膜发育过程的调控,协助和增强视觉信息的传递以及维持神经元细胞外微环境的稳态;也和糖尿病视网膜病变、青光眼、老年性黄斑变性、视网膜色素变性以及视网膜损伤等视网膜疾病的发生发展密切相关.以缝隙连接为靶点干预治疗视网膜疾病将逐渐成为国内外眼底疾病研究的热点.

目的 观察阈值期和阈值前期早产儿视网膜病变(ROP)的远期视网膜电图特征.方法 诊断为阈值期或阈值前期ROP的24例患儿48只眼(ROP组)纳入研究.选择出生年龄、体重与之匹配的未发生ROP的早产儿10例20只眼为对照组.经过湖南省儿童医院医学伦理委员会批准并取得所有受检者父母的知情同意后,所有受检儿行全视野闪光视网膜电图(F-ERG)检查,记录视杆反应、最大混合反应以及视锥反应.结果 与对照组比较,ROP组患儿的视杆反应b波潜伏期明显延长,差异有统计学意义(t=5.643,P<0.05);振幅明显降低,差异也有统计学意义(t=7.068,P<0.05).与对照组比较,ROP组患儿的最大混合反应a、b波潜伏期均延长,差异有统计学意义(t=3.099、2.886,P<0.05);振幅均降低,差异也有统计学意义(t=5.614、2.850,P<0.05).与对照组比较,ROP组患儿的视锥细胞反应a、b波潜伏期(t=0.819、0.948)及振幅(t=0.904、0.850)无明显变化,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 阈值期和阈值前期ROP患儿远期视网膜视杆反应b波及最大混合反应a、b波潜伏期延长,振幅降低;视锥反应a、b波无明显变化.