科创中国

目的 研究线粒体膜通透性转换(MPT)与肝细胞凋亡及线粒体损伤之间的关系,初步探讨姜黄素对MPT的影响及其可能机制.方法 将15只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、脓毒症组及姜黄素组,每组5只.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型;假手术组仅开腹翻动盲肠,不进行结扎、穿孔.姜黄素组术前以100 mg·kg-1·d-1姜黄素溶于生理盐水至10 mL/kg,连续灌胃7d,其余组灌胃等量生理盐水.术后12h取肝组织,透射电镜下观察肝细胞线粒体形态学改变;采用钙离子荧光探针Fluo-3/AM检测细胞内游离Ca2+浓度;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)和B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)及其相关X蛋白(Bax)的蛋白表达;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝细胞活化caspase-3、Bcl-2、Bax的mRNA表达.结果 透射电镜下观察假手术组细胞膜完整,胞质均匀,线粒体正常、清晰;脓毒症组肝细胞线粒体明显肿胀,内膜嵴断裂或消失,双层膜结构消失;姜黄素组线粒体轻度肿胀,少数细胞出现线粒体肿胀,双侧膜结构不清.假手术组、姜黄素组、脓毒症组荧光强度指数依次增高,分别为417.33±15.88、772.95±42.37、1 560.84±160.78 (F=184.149,P=0.000).脓毒症组活化caspase-3和Bax的蛋白及mRNA表达最高,姜黄素组次之,假手术组最低[活化caspase-3蛋白(灰度值):1.698±0.061、0.694±0.045、0.246±0.027,F=1 289.667,P=0.000;活化caspase-3 mRNA(2-ΔΔα):1.031±0.135、0.578±0.144、0.183±0.036,F=66.958,P=0.000; Bax蛋白(灰度值):1.826±0.126、1.254±0.140、0.623±0.901,F=94.536,P=0.000; Bax mRNA(2-△△Ct):2.774±0.338、1.661±0.226、0.656±0.114,F=124.710,P=0.000],且各组间两两比较差异均有统计学意义(均P<0.01);而假手术组、脓毒症组、姜黄素组Bcl-2的蛋白及mRNA表达依次升高[Bcl-2蛋白(灰度值):0.716±0.091、1.328±0.147、1.656±0.104,F=84.918,P=0.000; Bcl-2 mRNA(2△△Ct):0.617±0.118、1.393±0.096、1.650±0.167,F=83.846,P=0.000].脓毒症组Bcl-2/Bax的蛋白及mRNA表达最低,假手术组次之,姜黄素组最高[Bcl-2/Bax蛋白(灰度值):0.726±0.055、1.150±0.043、1.333±0.163,F=46.265,P=0.000; Bcl-2/Bax mRNA(2-ΔΔCt):0.505±0.041、0.944±0.097、1.006±0.168,F=12.211,P=0.001].结论 MPT可导致线粒体功能损伤,并进一步引起肝细胞凋亡;姜黄素通过降低细胞内Ca+浓度、促进抗凋亡基因Bcl-2表达以及抑制caspase-3活化和Bax基因表达,从而发挥调节MPT的作用.

目的:观察梯度运动对老龄大鼠心肌细胞自噬及凋亡的影响,探讨运动训练提高老龄大鼠心脏功能的机制.方法:实验分为3组,青年组(young)、老年组(old)和老年运动组(old+Ex).超声心动图记录大鼠心脏功能,透射电镜观察心肌细胞超微结构变化、自噬体的形成以及线粒体形态学的改变,Western blotting检测心肌组织自噬相关蛋白5(Atg5)、自噬相关蛋白Beclin 1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)及心肌线粒体细胞色素C(CytC)蛋白的表达,TUNEL方法检测心肌细胞凋亡,分光光度法检测钙诱导的线粒体通透性转换孔(mPTP)开放.结果:(1)与young组比较,透射电镜下可见old组大鼠心肌肌原纤维排列不整齐,线粒体基质疏松,线粒体膜有破裂,肌丝间有大量脂褐素颗粒沉积;心肌组织中Beclin 1与Atg5蛋白表达降低,LC3Ⅱ/Ⅰ比值降低,线粒体Cyt C表达下降,细胞凋亡指数增加,mPTP开放数目增加,左心室收缩末期与舒张末期直径明显增大,左心室射血分数与缩短分数降低(P<0.05或P<0.01).(2)与old组比较,old+Ex组大鼠心肌超微结构观察可见肌节结构清晰,线粒体基质致密,数目增多,自噬体形成增多,脂褐素颗粒沉积明显减少;并且心肌组织Beclin 1与Atg5蛋白表达增加,LC3 Ⅰ向LC3 Ⅱ转换增加,细胞凋亡指数减少,mPTP开放数目减少,心肌线粒体CytC表达上调,左室功能有明显改善(P<0.05或P<0.01).结论:运动训练通过上调老龄大鼠心肌细胞自噬,抑制细胞凋亡,改善老龄大鼠心脏功能.

目的 探讨百草枯中毒导致的内皮屏障功能障碍与p120连环蛋白(p120-ctn)的关系,以及芒果苷对p120-ctn的调节作用.方法 采用二室弥散模型培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),并分为对照组(给予含10%胎牛血清的DMEM培养液)、百草枯组(给予终浓度为0.05 μmol/L的百草枯培养液)和芒果苷干预组(百草枯培养基孵育30 min后加入终浓度为20 μmol/L的芒果苷继续孵育).各组分别培养6、12、24、48、72 h后测定细胞通透性;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)测定p120-ctn异构体p120-ctn 1A、p120-ctn 3A的mRNA表达及p120-ctn蛋白表达;采用免疫荧光分析并镜下观察p120-ctn的分布.结果 与对照组比较,百草枯组和芒果苷组细胞通透性均随时间延长呈增加趋势,于72 h达峰值[(29.86±3.98)%、(24.39±2.79)%比(11.71±1.67)%,均P< 0.05];而芒果苷组各时间点细胞通透性均显著低于百草枯组(均P<0.05).百草枯处理6 h p120-ctn 1A、p120-ctn 3A的mRNA表达(灰度值)及p120-ctn蛋白表达(灰度值)即较对照组明显降低(p120-ctn 1A mRNA:0.150±0.024比0.433±0.024,p120-ctn 3A mRNA:0.316±0.043比0.701±0.020,p120-ctn蛋白:0.485±0.031比0.763±0.038,均P<0.01);而芒果苷组p120-ctn 1A、p120-ctn 3A的mRNA表达及p120-ctn蛋白表达于干预6h即较百草枯组明显增加(p120-ctn 1AmRNA:0.281 ±0.021比0.150±0.024,p120-ctn 3A mRNA:0.602±0.042比0.316±0.043,p120-ctn蛋白:0.675±0.031比0.485±0.031,均P<0.01),并均随时间延长呈增加趋势,于72 h达峰值(p120-ctn 1A mRNA:1.376±0.128比0.150±0.024,p120-ctn 3A mRNA:1.251±0.059比0.316±0.043,p120-ctn蛋白:0.844±0.050比0.485±0.031,均P<0.01).荧光显微镜下观察,对照组p120-ctn主要分布在胞膜上,胞质内略有表达,胞核无表达;百草枯组随时间延长,细胞膜上p120-ctn表达逐渐减少,胞质和核内表达增多,细胞膜边缘模糊,细胞间隙增宽;芒果苷组相应时间点细胞膜上p120-ctn表达有所改善,胞质和核内表达减少.结论 p120-ctn下调与百草枯中毒后内皮通透性增加的机制相关,芒果苷可通过保护p120-ctn而减轻内皮损伤.

法国进口的递法明,主要成分为欧洲越枯花青苷(VMA)和β胡萝卜素,临床应用于增加静脉张力及起到保护血管的作用.国内的研究实验数据证明:此药能促进胶原合成,降低血管通透性并有利于保护视力.

法国进口的递法明,主要成分为欧洲越枯花青苷(VMA)和8胡萝卜素,临床应用于增加静脉张力及起到保护血管的作用.国内的研究实验数据证明:此药能促进胶原合成,降低血管通透性并有利于保护视力.

紧密连接蛋白由多种跨膜蛋白共同构成,包括claudin、occludin和连接粘附分子(JAMs),以及相应的适应蛋白和粘连蛋白如ZO-1、ZO-2、ZO-3、菌环蛋白等外周胞浆蛋白组成[1].紧密连接不仅能调控离子从细胞一侧扩散到另一侧,还能阻止细胞膜顶端和基底侧面成分的相互混合,对保持细胞的极性有重要作用,而且参与细胞增殖、分化的调节.正常肾小管上皮细胞最重要的特性是具有极性和紧密连接,目前认为在急性肾损

法国进口的递法明,主要成分为欧洲越枯花青苷(VMA)和B胡萝b素,临床应用于增加静脉张力及起到保护血管的作用.国内的研究实验数据证明:此药能促进胶原合成,降低血管通透性并有利于保护视力.口服递法明每日3次,每次1片,服药时间为6个月,有效率为88%.

法国进口的递法明,主要成分为欧洲越枯花青苷(VMA)和β胡萝卜素,临床应用于增加静脉张力及起到保护血管的作用.国内的研究实验数据证明:此药能促进胶原合成,降低血管通透性并有利于保护视力.口服递法明每日3次,每次1片,服药时间为6个月,有效率为88%.

法国进口的递法明,主要成分为欧洲越枯花青苷(VMA)和β胡萝卜素,临床应用于增加静脉张力及起到保护血管的作用.国内的研究实验数据证明:此药能促进胶原合成,降低血管通透性并有利于保护视力.口服递法明每日3次,每次1片,服药时间为6个月,有效率为88%.国外的临床实验数据证明服用递法明每日4片,连续服用20天,可以改善老年性黄斑变性患者的视力,有效率为85.7%.

法国进口的递法明,主要成分为欧洲越枯花青苷(VMA)和8胡萝卜素,临床应用于增加静脉张力及起到保护血管的作用.国内的研究实验数据证明:此药能促进胶原合成,降低血管通透性并有利于保护视力.口服递法明每日3次,每次1片,服药时间为6个月,有效率为88%.国外的临床实验数据证明服用递法明每日4片,连续服用20天,可以改善老年性黄斑变性患者的视力,