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白藜芦醇对视网膜色素上皮细胞增殖的影响
目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对视网膜色素上皮细胞增殖的影响,并初步探讨其作用机制.方法:用0、50、100、150、200和300μmol/L Res作用于ARPE-19细胞24、48和72 h后,CCK-8法检测Res对ARPE-19细胞增殖的影响,0、100、150和200μmol/L Res作用ARPE-19细胞48 h,PI单染流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光化学法检测PCNA蛋白表达,实时荧光定量PCR(real-time PCR)法检测PCNA、P21和P27的mRNA表达水平.结果:CCK-8结果显示,Res抑制ARPE-19细胞增殖,呈时间和剂量依赖性;流式细胞术显示,Res使S期细胞百分比显著上升且各组凋亡率没有区别;免疫荧光显示,Res抑制PCNA蛋白表达,荧光减弱;real-time PCR显示,Res浓度依赖性地抑制PCNA的mRNA表达,而诱导表达P21和P27的mRNA.结论:Res能抑制ARPE-19细胞的增殖,使细胞阻滞在S期,其机制可能与白藜芦醇诱导P21与P27的mRNA表达、抑制PCNA的mRNA表达有关.王雯婕,陈剑,刘小勇,曲艺欣,周清,袁晟辰,郝晓宁 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
沉默NANOG表达对人肝癌细胞HepG2中cyclin D1表达及细胞增殖的影响
目的:探讨RNA干扰沉默NANOG表达后对肝癌细胞HepG2中细胞周期素D1 (cyclin D1)表达及细胞增殖的影响.方法:将以NANOG基因为靶点的NANOG-siRNA瞬时转染肝癌细胞HepG2,real-time PCR和Western boltting检测NANOG、cyclin D1 mRNA和蛋白的表达,CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期情况.结果:与mock组比较,转染NANOG-siRNA后,肝癌细胞HepG2中NANOG、cyclin D1mRNA和蛋白水平均下调(P<0.05),细胞增殖能力下降(P<0.05),进入G0/G1期的细胞比例增多(P<0.05).结论:沉默NANOG表达可引起肝癌细胞HepG2中cyclin D1的表达下降,导致细胞增殖能力下降.周嘉嘉,陈汝福,邓小耿,周雨,周泉波,张杰,伍耀豪,曾乐祥,邱荣林 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
异丹叶大黄素下调膀胱癌细胞中细胞周期蛋白D1表达的分子机制研究
目的:探索异丹叶大黄素(ISO)下调肿瘤细胞中细胞周期蛋白D1表达的分子机制.方法:以ISO作用于人源性膀胱癌UMUC3、RT12和RT4细胞后用Western blotting法检测细胞周期蛋白D1表达水平;以RTPCR法检测细胞周期蛋白D1 mRNA的表达水平.稳定转染细胞周期蛋白D1启动子萤光素酶报告基因至UMUC3细胞并筛选后,检测ISO预处理后萤光素酶活性.ISO预处理UMUC3细胞后,提取核蛋白检测核转录因子表达水平的变化.分别稳定转染GFP和GFP-细胞周期蛋白D1表达构建载体,筛选克隆;ISO预处理后,Western blotting 法检测细胞周期蛋白D1的蛋白表达水平,贴壁依赖性细胞生长实验法检测细胞生长能力的变化,流式细胞术检测细胞周期的变化.分别稳定转染人源性细胞周期蛋白D1野生型和-163位点突变型萤光素酶报告基因质粒载体至UMUC3细胞并筛选,ISO预处理后检测细胞的萤光素酶活性.最后利用染色质免疫沉淀的方法,以抗Sp1抗体检测ISO对Sp1与细胞周期蛋白D1启动子结合力的影响.结果:ISO可从mRNA和蛋白水平显著抑制肿瘤细胞的细胞周期蛋白D1水平,并且是从内源性转录水平来抑制细胞周期蛋白D1的转录.ISO可抑制、下调核转录因子Sp1的表达,并抑制Sp1与细胞周期蛋白D1启动子区域的结合力,该结合位点主要位于启动子-92到+27bp的5’-非翻译区.结论:ISO可通过下调Sp1核转录因子表达及其与细胞周期蛋白D1启动子的结合,从内源性转录水平来抑制细胞周期蛋白D1的表达,从而诱导G0/G1细胞周期阻滞并抑制肿瘤细胞增殖.我们的研究将为临床中药单体ISO综合治疗肿瘤提供新的策略.方勇,王章桂,侯琦,卢瑜 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
siArid2重组腺病毒载体的构建及其对肝癌细胞增殖的影响
目的:通过RNA干扰技术沉默内源性抑癌基因Arid2(si Arid2)的表达,观察其对肝癌细胞生长及细胞周期的影响.方法:设计3对特异性沉默Arid2基因的shRNA序列,分别克隆到腺病毒骨架载体上形成重组腺病毒质粒.将质粒转染到HEK293细胞中,包装和扩增形成完整高滴度的重组腺病毒Adsi Arid2-1~3.用构建好的腺病毒感染人肝癌SMMC-7721细胞,Western blotting方法检测Arid2蛋白的表达,筛选干扰效果最佳的重组腺病毒.MTS技术和流式细胞术观察干扰Arid2基因后肝癌细胞增殖和细胞周期的变化.结果:成功构建了高滴度的重组腺病毒Adsi Arid2-1~3.经Western blotting鉴定,Adsi Arid2-3为抑制效果最佳的重组腺病毒.MTS结果显示,Adsi Arid2组细胞在72 h、96 h的吸光度值与空细胞组和Adsicontrol组相比增高,细胞增殖速率明显加快.流式细胞术检测结果显示,Adsi Arid2组处于G1期、S期的细胞百分比与空细胞组和Adsicontrol组相比,G1期细胞百分比明显减少,S期细胞百分比明显增多.结论:成功构建干扰Arid2的重组质粒及重组腺病毒.沉默Arid2可以促进肝癌细胞的增殖,促进其由G1期向S期的转换.段玉洁,聂丽珠,田玲,李治,陈震,唐霓 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
非小细胞肺癌中Geminin、Ki-67的表达及其预后意义
目的 观察Geminin和Ki-67单独和联合使用后在非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,探讨二者表达与患者预后的关系.方法 回顾性分析96例NSCLC的免疫表型与预后的关系.结果 96例NSCLC中不同性别患者Ki-67增殖指数有差异(P<0.05),不同性别和年龄患者Geminin表达有差异(P <0.05);Ki-67在癌组织中的表达高于癌旁组织(P <0.05);Ki-67与Geminin的表达具有相关性(P<0.05);随访52例患者,中位生存时间为43.6个月,3年生存率为46%,Ki-67和Geminin高表达者累积生存率明显低于低表达者(P<0.05);对随访病例进行细胞周期分期,结果显示患者的生存时间差异有显著性(P<0.05).结论 NSCLC中Ki-67和Geminin的表达具有一定特异性,联合使用二者对随访病例进行细胞周期分期,同时对预后进行评估具有一定可行性.刘谦,路名芝,欧阳斌燊,刘勇 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
沉默JAG1基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响
目的:探究沉默Jagged 1(JAG1)基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响及其分子生物学机制.方法:用已构建的pRS-JAG1重组质粒转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用Western blotting方法检测重组质粒对JAG1蛋白表达的影响;MTT比色法测定沉默JAG1对细胞生长的抑制情况;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡;蛋白印记分析细胞周期蛋白1(cyclin D1)、p21 CIP1/WAF1、p27KIP1、p-Rb、Bcl-2、Bax、Bcl-xL和cleaved caspase-3蛋白水平的变化.结果:Western blotting结果证实重组质粒可在72h内有效抑制JAG1蛋白表达;人乳腺癌MDA-MB-231细胞JAG1被沉默后,细胞的生长速度明显减慢,细胞明显阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),cyclin D1、p-Rb、Bcl-2和Bcl-xL蛋白水平被下调(P<0.05),而p21CIP1/WAFI、p27KIP1、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平显著升高(P<0.05).结论:沉默JAG1可有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡.本研究为以JAG1为分子靶点的三阴乳腺癌治疗提供实验依据.袁磊,李伯和,时冉冉,高丽,宋金玲,王建国 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
慢病毒介导的 RASSF1A 表达抑制小细胞肺癌 H446细胞的生长
目的:探讨Ras相关结构域家族1A (Ras-association domain family 1A, RASSF1A)抑制小细胞肺癌细胞生长的机制。方法:构建含有RASSF1A基因的慢病毒表达载体,包装成病毒颗粒,感染H446小细胞肺癌细胞。 MTT测细胞生长曲线;流式细胞术测细胞周期;real-time PCR和Western blotting分别检测细胞周期相关蛋白mRNA和蛋白水平的表达。结果:成功获取稳定表达RASSF1A的H446细胞(RASSF1A-H446)。 RASSF1A-H446细胞生长缓慢,细胞周期阻滞在G1期。 Real-time PCR和Western blotting 结果显示在RASSF1A-H446细胞中,p21和p27的表达明显升高,E2F1的表达明显降低。结论: RASSF1A通过升高p21、p27和降低E2F1的表达,抑制H446细胞的生长。孔丽君,张立霞,栾希英,张丽沙,王绪菡,于恒运,张月芝 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
人细胞周期蛋白依赖性激酶2与抑制剂roscovitine作用的理论研究
目的:研究人细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)与抑制剂roscovitine相互作用的机制.方法:利用分子动力学模拟的方法研究roscovitine与CDK2之间的相互作用.结果:和空载CDK2相比,roscovitine的存在会使RMSD和RMSF值略微降低,但roscovitine会显著影响CDK2活性位点残基侧链二面角.Roscovitine在分子动力学模拟过程中会与Ile10和Leu83形成稳定的氢键作用.结论:Roscovitine对CDK2骨架运动影响不大,但会使CDK2活性位点残基的侧链构象发生变化.Roscovitine与Ile10和Leu83之间的氢键作用是CDK2对roscovitine进行识别的重要途径.赵宏涛,黎云燕,徐为人 - 天津医科大学学报文章来源： 万方数据 -
GRP78在胃癌生长中的作用
目的:探讨内质网分子伴侣葡萄糖调节蛋白78( GRP78)参与胃癌细胞生长的作用。方法:回顾性分析34例胃癌及34例癌旁组织,利用组织微阵列技术,构建组织阵列,采用免疫组织化学技术SP法检测该阵列中GRP78蛋白在胃癌及其癌旁组织中表达情况。利用Western blotting 检测人体胃癌组织、癌旁组织(肿瘤旁1 cm处)和正常组织(远离肿瘤≥10 cm 处)中GRP78蛋白的表达情况。利用Western blotting 检测人胃癌细胞SGC7901和过表达GRP78的SGC7901-H78细胞(稳定转染GRP78)中GRP78和生长相关蛋白cyclin D1的表达情况。结果:(1)免疫组织化学检测发现:人体胃癌组织中GRP78表达水平明显高于癌旁组织和正常组织,且与性别、分化程度相关(P<0.05);(2) Western blotting检测发现:胃癌组织中GRP78蛋白的表达明显高于癌旁组织和正常组织;(3) Western blotting检测发现:相对于SGC7901细胞,SGC7901-H78细胞中GRP78蛋白的表达明显升高,同时检测生长相关蛋白cyclin D1的表达发现,随着GRP78表达的上调,cyclin D1蛋白表达增加。结论:GRP78蛋白的高表达可能参与了胃癌细胞的生长。付政祺,镇鸿燕,刘丽江 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
miR-193通过细胞周期相关蛋白调控大鼠骨髓间充质干细胞的增殖能力
目的:探讨microRNA-193( miR-193)对大鼠骨髓间充质干细胞( bone marrow mesenchymal stem cells,MSCs)增殖和凋亡的影响,并进一步分析miR-193影响MSCs增殖的可能机制。方法:体外培养大鼠MSCs,分别转染miR-193片段或其抑制剂到MSCs。采用MTS法、BrdU细胞增殖比色法和Ki-67免疫染色法检测细胞增殖,AnnexinV/PI双染流式细胞术分析细胞凋亡,qRT-PCR检测miR-193对细胞周期相关蛋白表达的调控。结果:(1) siPORT NeoFX Transfection Agent 转染miR-193到MSCs 能有效调控MSCs中miR-193的表达水平。(2)过表达miR-193能显著促进MSCs 的增殖(P<0.05),而抑制miR-193能显著降低MSCs 的增殖(P<0.05)。(3) miR-193对MSCs的凋亡无明显影响( P>0.05)。(4) qRT-PCR结果显示miR-193能调控细胞周期蛋白依赖性激酶2(cyclin-dependent kinase 2,CDK2)的表达水平(P<0.01)。结论:miR-193具有促进MSCs增殖的作用,并且可能是通过增强CDK2的表达来实现的。毛晨熙,陆地,孙成超 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据
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