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弓形虫 SAG2和 GRA2基因疫苗的免疫保护研究

DNA疫苗是将编码抗原的基因插入载体质粒中构成重组体,直接接种机体,在接种部位摄取表达并达到抗感染目的的一种疫苗。 pCMV-Taq2B载体具有人巨细胞病毒( Human cytomegalovirus, CMV)高效启动子/增强子序列,可使目的基因在真核细胞中高水平稳定表达成为DNA疫苗载体。构建pCMV-Taq2B-Surface antigen 2(表面膜抗原2)( pSAG2)、 pCMV-Taq2B-Dense granule protein 2(致密颗粒蛋白2)(pGRA2)及 pCMV-Taq2B-SAG2-GRA2( pSAG2-GRA2) DNA 疫苗并研究其免疫保护效果。将 pSAG2、pGRA2、 pSAG2-GRA2 DNA疫苗(实验组)、磷酸盐缓冲液(Phosphate buffered saline, PBS)、 pCMV-Taq2B空质粒(对照组)分别肌肉注射BALB/c小鼠, ELISA法检测血清IgG抗体水平。末次免疫后第28 d,各组每只小鼠经腹腔注射弓形虫速殖子1000个,观察小鼠的生存时间。结果显示单基因疫苗pSAG2、 pGRA2和双基因疫苗pSAG2-GRA2免疫组均能诱导产生特异性IgG抗体,且于末次免疫后第28 d达到最高值,此时单基因疫苗pGRA2(0.382±0.66)和双基因疫苗pSAG2-GRA2(0.548±0.137)免疫组吸光度值显著高于PBS (0.137±0.016)或pCMV-Taq2B (0.135±0.010)对照组吸光度值。免疫单基因疫苗pSAG2(14.3±1.8)、 pGRA2组(13.5±2.1)小鼠存活时间(d)明显长于PBS (4.3±1.6)及pCMV-Taq2B组(4.1±1.3),且双基因疫苗 pSAG2-GRA2组(19.6±2.4)小鼠存活时间明显长于单基因疫苗 pSAG2组及pGRA2组。弓形虫双基因疫苗pSAG2-GRA2能够诱导小鼠产生抗弓形虫感染保护性免疫,其免疫保护性优于pSAG2、 pGRA2单基因疫苗。

全娟花,李鹏,喻才元,楚佳奇 - 寄生虫与医学昆虫学报

文章来源：万方数据

测定CystatinC和β2-微球蛋白的颗粒增强透射免疫比浊试剂盒抗干扰性能评价

目的对测定半胱氨酸蛋白酶抑制剂C( Cystatin C,Cys C)和β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)的颗粒增强透射免疫比浊法(PETIA)试剂盒的抗干扰性能进行评价.方法根据CLSI EP7-A2文件,对PETIA法Cys C和β2-MG试剂盒进行干扰评价试验.结果配对差异实验结果显示:1 000 U/L类风湿因子(RF)、1 450浊度乳糜微粒、342 μmol/L游离胆红素(F-Bil)、342 μmol/L结合胆红素(C-Bil)、30 mg/L维生素C(Vit C)对Cys C和β2-MG测定无干扰,5g/L血红蛋白(Hb)对高浓度Cys C和低浓度β2-MG测定均有干扰;5个浓度系列的剂量效应实验结果显示,Hb对Cys C和β2-MG测定可产生非线性干扰.结论 PETIA法测定Cys C和β2-MG试剂盒具有较强的抗干扰能力,基本能满足临床需求.

李咏梅,张之芬 - 临床检验杂志

文章来源：万方数据

Et-DHA通过激活线粒体途径和T细胞granzyme B诱导HepG2细胞凋亡

目的:本研究探讨了二十二碳六烯酸乙酯(Et-DHA)对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响.方法:HepG2细胞用于检测Et-DHA的抑癌活性,MTT法检测Et-DHA对HepG2细胞的直接抑制作用,Hoechst 33258荧光染色观察细胞的形态特征,ELISA法检测Et-DHA处理后HepG2细胞的活性氧簇(ROS)释放量、总超氧化物歧化酶(SOD)和caspase-9活性,Western blotting法检测胞质和线粒体中Bax、Bak、Bid、Bcl-2、Smac和细胞色素C(Cyt C),以及胞质中cleaved caspase-8、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的水平;T细胞与HepG2细胞共培养,进一步观察Et-DHA处理后T细胞的增殖对HepG2细胞活性的影响,并检测了颗粒酶(granzyme)B的水平.结果:Et-DHA显著抑制HepG2细胞的生长(P<0.05),这种抑制作用具浓度效应和时程效应;Et-DHA处理后HepG2细胞的ROS释放量增加,但总SOD活性无明显变化,caspase-9活性显著上升(P<0.05);线粒体上的促凋亡蛋白Bax、Bak和Bid水平增加,而抑凋亡蛋白Bcl-2以及线粒体中Cyt C和Smac的水平降低,胞质中的Cyt C、Smac、cleaved caspase-8、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3以及cleaved Bid水平呈剂量性升高.另外 T细胞和HepG2细胞共培养组在Et-DHA的诱导下,HepG2细胞的凋亡程度与Et-DHA单独作用时相比进一步增加.在Et-DHA刺激下,T细胞内granzyme B上调,释放到HepG2 细胞内的granzyme B明显增多.结论:Et-DHA可能主要通过线粒体内源性途径以及caspase-8途径,激活caspase-3,诱导HepG2细胞凋亡,以及通过间接活化T细胞,促使 granzyme B增多,从而增强对HepG2细胞的毒性作用.

陈鲲,陈永顺,王雪君,陈韵帆,刘轲莉,陈凤佳,鲁建军 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

共烧结法制备梯度致密化Al2O3中空纤维膜

用实验室自制的Al2O3中空纤维膜为基膜,以Al2O3粉末分散液和Al粉分散液为原料,用真空抽滤法与浸渍法制备过渡层,再浸涂勃母石溶胶,烧结形成梯度致密化Al2O3中空纤维膜.讨论了梯度致密化Al2O3中空纤维膜的形貌、泡点压力、膜孔径与渗透性能等因素.结果表明,造成膜性能差异的主要原因有:(1)Al2O3粉末与Al粉的熔点差异;(2)真空抽滤形成的滤饼与浸涂形成的吸附层之间的厚度差.同时,所制得的梯度致密化Al2O3中空纤维膜纯水通量为17~2 990 L/(m2·h·0.1 MPa),平均孔径为0.04~0.52 μm.

韩灵凤,曹悦,许振良 - 膜科学与技术

文章来源：万方数据

EBV-LMP2A和β-catenin蛋白在鼻咽癌中的表达关系及意义

目的探讨EB病毒编码的潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)和β-连环素(β-catenin)在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达关系及其临床意义.方法应用免疫组化SP法检测LMP2A和β-catenin蛋白在32例鼻咽黏膜慢性炎、56例NPC和18例NPC淋巴结转移灶中的表达,采用Western blot法和免疫荧光细胞化学染色法观察LMP2A和β-catenin蛋白在CNE2-LMP2A细胞及其对照组CNE2-Vector和CNE2细胞中的表达.结果 (1)LMP2A在NPC及其淋巴结转移灶中的阳性率分别为89.3%(50/56)和77.8%(14/18),均明显高于鼻咽黏膜慢性炎(37.5%,12/32)(P均<0.01);β-catenin在NPC及其淋巴结转移灶中的异常表达率分别为62.5%(35/56)和83.3%(15/18),均明显高于鼻咽黏膜慢性炎(3.1%,1/32)(P均<0.01);LMP2A与β-catenin正常表达呈负相关(rs=-0.391,P<0.01);LMP2A和β-catenin蛋白在鼻咽癌T分期、N分期和临床分期组间表达率的差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).(2)CNE2-LMP2A细胞中β-catenin蛋白表达水平明显高于CNE2-Vector和CNE2细胞;CNE2-LMP2A细胞中β-catenin胞质和胞核的表达水平明显高于CNE2-Vector和CNE2(P均<0.01).结论 LMP2A高表达和β-catenin异常表达与鼻咽癌临床生物学行为进展密切相关,其机制可能与LMP2A上调β-catenin蛋白水平并促进其核转位有关.

赵利容,饶洁,王艳,罗泊涛,陈小毅 - 临床与实验病理学杂志

文章来源：万方数据

心肺复苏后心功能障碍与心肌内质网Ca2+调控蛋白表达关系的研究

目的探讨心肌内质网Ca2+调控蛋白表达与心肺复苏(CPR)后心功能障碍的关系。方法38只SPF级雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组(12只)和心搏骤停组(26只)。静脉弹丸式注射氯化钾40μg/g诱导心搏骤停,8 min后进行CPR;对照组大鼠仅麻醉后置管并监测指标,不诱导心搏骤停。在复苏后进行有创血流动力学监测1 h,采用超声心动图测定心功能。分别于自主循环恢复(ROSC)后5 min和60 min时采集心肌标本,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测内质网Ca2+ATP酶(SERCA2a)、磷酸化受磷蛋白(p-PLB)和兰尼定受体(RyR)水平。结果心搏骤停组ROSC率为92.3%(24/26),平均复苏时间为(68±39)s。心搏骤停组复苏后1 h心功能明显下降,与对照组相比,射血分数、短轴缩短率(FS)、左室内压上升或下降最大速率(±dp/dt max)明显降低〔射血分数:0.548±0.060比0.809±0.043,F=71.692,P=0.000;FS:(34.4±4.4)%比(46.0±3.5)%,F=55.443,P=0.000;+dp/dt max (mmHg/s):4718±743比7098±394,P<0.01;-dp/dt max (mmHg/s):-3824±612比-6187±473,P<0.01〕。与对照组相比,心搏骤停组ROSC后5 min及60 min PLB磷酸化水平(灰度值)均显著降低(5 min:0.64±0.15比1.29±0.13,P<0.01;60 min:0.95±0.08比1.30±0.09,P<0.05),而内质网SERCA2a活性(灰度值)和RyR水平(灰度值)差异均无统计学意义(SERCA2a 5 min:1.01±0.18比1.24±0.07,60 min:1.03±0.14比1.25±0.06;RyR 5 min:0.96±0.13比0.97±0.13,60 min:0.88±0.14比0.99±0.11,均P>0.05)。结论内质网PLB磷酸化水平异常与CPR后心功能障碍密切相关。

黄煜,何庆 - 中华危重病急救医学

文章来源：万方数据

苦参碱对人髓母细胞瘤 D341细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:探讨苦参碱在体外对人髓母细胞瘤D341细胞凋亡及Bax、Bcl-2、丝氨酸/苏氨酸激酶Akt和磷酸化Akt(p-Akt)表达的影响。方法:体外培养的D341细胞分为实验组(加不同浓度的苦参碱)和对照组(不加苦参碱),用CCK-8法检测苦参碱对D341细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot-ting检测苦参碱对D341细胞Bax、Bcl-2、Akt和p-Akt蛋白表达的影响。结果:苦参碱在体外能明显地抑制D341细胞的生长,作用呈量效与时效关系;随着作用药物浓度的增高和作用时间的延长,其凋亡率逐渐升高,在透射电镜下观察,细胞可见染色质趋边固缩,胞浆中空泡增多、变大,并且出现凋亡小体;Western blotting结果表明,随着药物浓度的增加,药物能使瘤细胞Bax蛋白的表达水平增强,却使Bcl-2和p-Akt蛋白的表达水平下降。结论:苦参碱可诱导D341细胞的凋亡而发挥体外抗肿瘤作用,其诱导瘤细胞的凋亡与上调Bax蛋白、下调Bcl-2及PI3K /Akt信号通路中p-Akt蛋白的表达水平有关。

周开宇,毛天明,陈茜,罗永康 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

阿斯匹林对2型糖尿病血清C-反应蛋白及糖尿病肾病发生的影响

目的探讨阿斯匹林对2型糖尿病(T2DM)患者血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)的影响与糖尿病肾病发生的关系.方法 107例T2DM患者随机分为:A组48例口服阿斯匹林100mg/晚;B组59例维持原抗糖尿病治疗方案.经过12个月治疗后观察患者血清hs-CRP、尿白蛋白排泄率(UAER)、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素(INS)、空腹C肽、甘油三脂(TG)、胆固醇(TC)等指标的变化.结果两组比较,FBG、HbA1c、INS、C肽、TG、TC差异无统计学意义(P>0.05);A组治疗后与治疗前比较,hs-CRP降低(P0.05;B组治疗后较治疗前hs-CRP、UAER升高(P

权晓娟,王小峰,王妮 - 军医进修学院学报

文章来源：万方数据

膜联蛋白A2对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的:研究膜联蛋白A2(annexin A2,ANXA2)对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响.方法:以HeLa细胞为研究对象,构建过表达载体以及ANXA2-siRNA,转染入细胞.将细胞分为正常对照组、scrambled组、ANXA2过表达组及ANXA2-siRNA组.应用real-time PCR法检测ANXA2 mRNA表达水平及Western blotting检测ANXA2蛋白表达水平.分别采用MTT法、Boyden小室法和流式细胞术观察ANXA2对HeLa细胞增殖、迁移及凋亡能力的影响.结果:ANXA2过表达组可以显著促进HeLa细胞的增殖和迁移;ANXA2-siRNA组明显抑制HeLa细胞的增殖和迁移;ANXA2对HeLa细胞凋亡几乎无影响.结论:沉默ANXA2对人宫颈癌细胞的凋亡无显著影响,但可显著抑制其增殖能力和迁移能力.ANXA2可能在宫颈癌的发生发展中具有十分重要的作用,提示它有可能成为宫颈癌治疗的分子靶点.

魏建勋,马文君,李红梅 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

Shh在雷奈酸锶促进骨髓间充质干细胞成骨分化过程中的作用

目的:研究Sonic Hedgehog (Shh)在雷奈酸锶(strontium ranelate,Sr)促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化中的作用.方法:采用全骨髓贴壁培养法分离、纯化、培养大鼠BMSCs,取第3~5代BM-SCs加入成骨诱导液诱导成骨分化,再加入不同浓度Sr及Shh拮抗剂cyclopamine (Cy),分别观察它们对BMSCs向成骨细胞分化的影响.酶标法检测成骨细胞分化早期标志物碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的活性;茜素红染色检测细胞钙化水平;Western blotting法检测Shh和Runx2蛋白的表达情况.结果:Sr(3 mmoVL)可以使细胞ALP活性增高,钙结节形成增加.Sr(0.1~5 mmol/L)作用BMSCs 7 d,可明显促进Shh和Runx2蛋白的表达,且Shh蛋白在l mmol/L Sr作用时表达最多,而Runx2在3 mmol/L Sr作用时表达最多.1 mmol/L Sr作用BMSCs不同时间(1、3、5、7 d),呈时间依赖性地上调Shh和Runx2蛋白的表达.Cy(10 μmol/L)不仅拮抗Sr对Shh和Runx2表达的上调作用,还抑制Sr对ALP和钙结节形成的促进作用.结论:Sr可通过上调Shh蛋白及成骨特异性转录因子Runx2的表达促进BMSCs向成骨细胞分化.

靳思思,胡洁芬,吴文 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据