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恙虫病东方体合肥分离株截短56 kDa蛋白抗原表达及活性分析
本文获得恙虫病东方体合肥分离株截短56 kDa外膜蛋白基因工程纯化抗原,并鉴定其免疫学活性,为进一步研制广谱诊断试剂、疫苗以及分析其在东方体致病的分子机制奠定基础.我们通过DNAStar和Mega等软件对含有440个氨基酸的合肥株56 kDa蛋白序列进行抗原性分析;将合肥株56 kDa截短蛋白基因克隆至原核表达载体pET28a获重组质粒,转入大肠杆菌E.coli BL21感受态中,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳分析检测蛋白表达;采用亲和层析法纯化目的蛋白,Western-blot及ELISA法鉴定其免疫学活性.序列分析发现合肥分离株56 kDa蛋白可分为4个保守区和3个可变区,抗原性分析结果显示,其保守区的亲水性和抗原性均有很高峰值.SDS-PAGE电泳显示约56 kDa的目的重组蛋白表达条带,Western-blot分析显示该重组蛋白可与恙虫病病人血清反应,阴性血清则未出现相应印迹,ELISA分析结果显示该蛋白最低浓度为80 ng/μL时仍可检出阳性血清;5μg/mL蛋白可检测阳性血清滴度高达1∶12 800,证实其具有较强反应原性.本实验获得恙虫病东方体合肥株56 kDa截短外膜蛋白基因工程抗原具有良好的抗原活性,有望进一步应用于恙虫病的诊断、疫苗研制及致病机制分析.耿美玲,郑峰,吕恒,朱进,胡丹,郝丽娜,张凤玉,龚秀芳,李丙军 - 寄生虫与医学昆虫学报文章来源： 万方数据 -
禾谷缢管蚜水通道蛋白基因RpAQP1的克隆、分子特性和表达分析
为探究禾谷缢管蚜Rhopalosiphum padi(Linnaeus)水通道蛋白基因Rp AQP1的序列特征及其在不同龄期的表达,利用RT-PCR和RACE技术克隆了Rp AQP1基因的c DNA全序列,采用生物信息学软件分析了Rp AQP1编码蛋白的特性,利用qRT-PCR分析了Rp AQP1在不同龄期的表达量.结果显示:禾谷缢管蚜水通道蛋白基因Rp AQP1的c DNA全长为1 216 bp,其750 bp的开放阅读框编码250个氨基酸,蛋白分子量为27.36 k D.Rp AQP1属于水通道蛋白亚家族DRIP(果蝇内嵌蛋白Drosophila integral protein)的一员,具有6个跨膜区,2个保守的NPA结构单元和1个压缩区域Ar/R;qRT-PCR结果显示,Rp AQP1在整个发育历期均有表达,其在2龄若蚜中表达水平最高,是成蚜表达量的1.432倍;在4龄若蚜中表达量最低,为成蚜表达量的0.444倍,显著低于其它龄期,而其余各龄期Rp AQP1表达量无显著差异.左亚运,李晓叶,李玉婷,王康,乔宪凤,陈茂华 - 植物保护学报文章来源： 万方数据 -
论工会利益整合-表达及其特点
以现代社会使用的利益整合和利益表达概念对工会利益整合-表达及其特点进行了界定和分析.工会是维护工人利益的组织,对工人的利益进行整合和表达是工会的重要职能,也是工会存在及其发展的基础.作为工会维护工人利益的必要过程和手段,利益整合与利益表达不仅具有主体的同一性,还具有过程的同一性.作为一种组织行为,工会利益整合-表达具有组织化程度高、组织成员数量多、与政党联系紧密等特点.刘勇 - 西北大学学报(哲学社会科学版)文章来源： 万方数据 -
IPO8基因启动子区rs35100176位点变异对基因表达的影响
目的:研究人importin 8( IPO8)基因启动子区rs35100176多态性位点CCT插入/缺失对基因表达的影响。方法:PCR扩增IPO8基因启动子区包含rs35100176多态位点的342 bp序列,通过测序获得了49例DNA样本的基因多态性分布。以CCT/CCT插入纯合子或-/-缺失纯合子DNA样本为模板,扩增含有不同插入/缺失序列的IPO8基因启动子片段,插入萤光素酶报告质粒pGL3-Basic,构建pGL3-3N Insertion和pGL3-3N Deletion重组表达载体。重组质粒经Fugene 6.0转染入细胞,采用双萤光素酶报告系统,检测携带不同多态性序列的重组质粒中报告基因的表达活性;real-time PCR 检测各不同基因型细胞中 IPO8 mRNA 表达。结果:通过测序发现rs35100176多态位点存在 CCT/CCT、CCT/-和-/-3种表型,其基因分布频率分别为18.37%、55.10%和26.53%。成功构建pGL3-3N Insertion和pGL3-3N Deletion重组表达载体。双萤光素酶报告基因活性检测结果显示,pGL3-3N Insertion启动下游报告基因表达的相对活性与pGL3-3N Deletion 相比显著减弱,两者存在显著差异(P<0.05);real-time PCR结果显示,CCT纯合插入的HEK293细胞中IPO8 mRNA的表达显著低于CCT纯合缺失的Saos-2细胞。结论:IPO8基因启动子区rs35100176位点的CCT碱基插入变异能显著抑制启动子活性,从而影响IPO8基因的转录。熊建军,江和,许晓源,周小鸥,王庭,李卫东 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
从经典影像到多元视角-当代建筑摄影中的控制与表达
通过对建筑学中经典建筑案例拍摄过程的回顾,探讨了建筑师与建筑摄影师的合作方式,结合对当代建筑摄影多元视角及其特征的归纳,揭示出建筑影像背后所隐含的各种意图和具体控制,以此阐述建筑摄影对当代建筑学演进的特殊意义.耿涛 - 建筑学报文章来源： 万方数据 -
重组结核分枝杆菌CFP10的克隆与表达
目的:克隆和表达结核分枝杆菌CFP10,并分析其免疫学活性.方法:自结核分枝杆菌标准株H37Rv提取基因组DNA,PCR扩增cfp10基因,克隆至T载体pMD18T,转化入大肠杆菌JM109,菌落PCR鉴定阳性克隆并测序分析.将测序正确的pMD18-cfp10的cfp10基因亚克隆至表达载体PQE30,构建重组质粒PQE30-cfp10,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,PCR和双酶切鉴定阳性重组体,IPTG诱导CFP10表达,亲和层析纯化,western-blot分析其免疫活性.结果:成功构建PQE30-cfp10重组表达质粒,表达、纯化获得分子量约10kDa的CFP10,并能被结核病人血清识别.结论:克隆表达获得具有免疫活性的重组结核分枝杆菌CFP10.杨双,袁仕善,谭云洪,邓志高,孙文霞,李民 - 湖南师范大学学报(医学版)文章来源： 万方数据 -
肿瘤中DNA甲基化对miRNA调控作用的研究进展
miRNA的异常表达与肿瘤的发生、发展密切相关,但miRNA的表达调控机制目前尚不清楚。有研究提示,在肿瘤细胞中DNA 甲基化异常会引起 miRNA 的表达改变,即DNA甲基化程度的改变将促进或抑制miRNA的表达,从而抑制或促进肿瘤的发生、发展。因此,DNA甲基化对miRNA的调控作用已成为肿瘤相关研究领域中的“新大陆”。该文就DNA甲基化调控miRNA的表达并参与人类肿瘤发生、发展的有关研究进展作一综述。顾页,林洁 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
蚊虫嗅觉受体的研究进展
蚊虫是传播疟疾、登革热、黄热病、日本脑炎等疾病的重要媒介,嗅觉系统影响着蚊虫的栖息地选择、繁殖、觅食、吸血、趋避及信息传递等行为。嗅觉受体是嗅觉系统的关键成分之一,近年来相关的研究较多。本文简介了蚊虫嗅觉受体蛋白的特征、表达与功能,此外,综述了结构和功能高度保守的Or83 b受体蛋白以及蚊虫驱避剂的研究进展。代玉华,赵忠懿,程鹏,刘丽娟,公茂庆 - 寄生虫与医学昆虫学报文章来源： 万方数据 -
绵羊肺炎支原体标准株Y98外膜蛋白MOP30基因真核表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达
以绵羊肺炎支原体(Mycoplasma oumvipneoniae,MO)标准株Y98基因组为模板,设计1对特异引物,PCR扩增得到798bp的P30目的基因(MOP30),将其定向克隆到pMD19-T Simple载体中进行测序分析.重组质粒进行XbaⅠ/BamHⅠ双酶切并回收目的片段,将目的基因亚克隆入黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,YFP)表达载体pCAMBIA1300-YFP中构建重组融合表达质粒pCAMBIA1300-MOP30-YFP.双酶切验证后的融合表达质粒转化农杆菌(Agrobacterium)感受态细胞,侵染烟草(tobacco)叶片.通过激光共聚焦成像显微镜(cofocal imagingmicroscope)观察到融合表达的黄色荧光蛋白,Western-blotting试验得到57 000的特异条带,RT-PCR检测到MOP30基因在烟草叶片中转录.MOP30-YFP融合蛋白在烟草中的成功表达,为转基因植物疫苗防治绵羊支原体肺炎奠定了基础.张亚宁,赵利峰,张乐祎,赵宝华 - 中国兽医学报文章来源： 万方数据 -
香蕉中内源条斑病毒的基因型及其激活
为明确香蕉中不同基因型内源条斑病毒(endogenous Banana streak virus,eBSV)的激活及其机制,根据eBSOLV-GD(endogenous Banana streak OL virus Guangdong)的结构设计引物,采用内源条斑病毒基因型分析方法及RT-PCR检测法对其基因型、表达和激活进行了研究.结果表明,只含A基因组的香蕉不含eBSOLV-GD;含B基因组的香蕉均含eBSOLV-GD.在所检测的含B基因组的香蕉中eBSOLV-GD可分为6种基因型,部分为感染型的eBSOLV-GD.粉蕉和大蕉中eBSOLVGD的片段Ⅱ和Ⅲ能表达,eBSOLV-GD经组织培养后可激活产生BSOLV-GD,引起香蕉发病,发病率为8.6%~18.0%,表明发病率的高低与香蕉的基因型有关,与eBSV基因型无关.刘春柳,莫俊杰,梁钾贤,黄红,胡汉桥,吴仁锋 - 植物保护学报文章来源： 万方数据
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