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人骨髓间充质干细胞体外不同分离与培养方法的比较
目的 探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)理想的分离、培养方法.方法 采用密度梯度离心法和全骨髓贴壁法分离培养人骨髓干细胞,并将其分别置于普通培养瓶、60Co培养瓶中培养,应用倒置显微镜和免疫组化法观察和鉴定骨髓间充质干细胞;流式细胞术检测细胞表面标志.结果 人骨髓干细胞呈均一梭形、成纤维细胞样,形成集落样生长.60Co培养瓶细胞贴壁情况明显好于普通培养瓶,且费用低;免疫组化及流式细胞术显示CD34、CD45表达为阴性,CD29、CD44表达为阳性.60Co照射处理的培养瓶结合采用全骨髓贴壁法分离培养法获得的骨髓干细胞活性高,增殖力强,克隆形成早,传代时间短.结论 全骨髓贴壁法和密度梯度离心法均可获得高纯度贴壁生长的骨髓干细胞,其中60Co照射处理的培养瓶结合采用全骨髓贴壁法分离培养简单易行,骨髓干细胞增殖快,活性好,传代力持久.可以收获大量、高纯度的MSCs;本实验为MSCs进一步的研究与临床应用提供了实验方法及依据.刘贤华,仝青英,白晓东 - 武警医学文章来源： 万方数据 -
间充质干细胞与乳腺癌转移的相关性
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁妇女的健康与生命.转移是恶性肿瘤的基本生物学特征,也是乳腺癌患者死亡的主要原因.最新研究表明,肿瘤细胞与微环境之间的相互作用是肿瘤转移的重要机制.早期多数研究将重点放在肿瘤细胞上,随着研究的不断深入,人们发现肿瘤组织中存在的非肿瘤细胞对肿瘤的形成和发展有着十分重要的作用.间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)是杨海玉,刘勇 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
白细胞介素4调节人脐带间充质干细胞的增殖和造血支持能力
目的:间充质干细胞(MSC)被认为在多种自身免疫系统疾病和移植物抗宿主病中有良好的应用前景,但是其在各种炎症因子作用下生物学功能的变化仍然值得进一步研究.本文探讨了白细胞介素4(IL-4)对脐带间充质干细胞(UC-MSC)的多种生物学特性以及造血支持作用的影响.方法:IL-4刺激UC-MSC后,使用流式细胞术检测UC-MSC免疫表型;使用MTT检测细胞活力改变,并使用Brd U-ELISA的方法,检测其增殖能力;使用油红O和茜素红染色来检测UC-MSC成脂和成骨分化;使用实时荧光定量PCR的方法,检测UC-MSC中mRMA表达的差异;收集IL-4刺激的UC-MSC的上清,检测其在促进CD34+细胞集落形成能力的变化.结果:IL-4刺激后,UC-MSC表面的CD11b、CD19、CD34、CD45、CD73、CD90、CD105、人类白细胞抗原(HLA)-DR和HLA-ABC并未有明显改变.MTT和Brd U-ELISA都表明,IL-4处理组UC-MSC的增殖在72 h后相对于未处理组明显下降(P<0.05).IL-4处理后,UC-MSC成脂和成骨分化能力未检测到明显的变化.此外,IL-4可以明显增强UC-MSC中IL-6mRNA表达(P<0.01),增强UC-MSC培养上清的促CD34+细胞粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)的集落形成能力(P<0.01).结论:IL-4可以抑制UC-MSC增殖,促进UC-MSC造血支持能力.杨舟鑫,韩之波,贾兵兵,王国付 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
MicroRNA-378*通过抑制CTGF促进人骨髓间充质干细胞凋亡
目的:研究年龄相关microRNA-378*(miR-378*)对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)存活和凋亡的调控作用。方法:通过microRNA芯片和qRT-PCR检测供体年龄对hMSCs中miR-378*表达的影响;通过H2 O2诱导hMSCs凋亡;通过转染miR-378*模拟物或抑制物,过表达或抑制miR-378*的表达;用MTT、LDH、caspase-3/7、TUNEL检测等方法研究其对hMSCs存活和凋亡的影响;通过siRNA研究结缔组织生长因子( CTGF)对hMSCs存活和凋亡的影响。结果:随供体年龄增加,hMSCs中miR-378*的表达增加。 H2 O2刺激可促进miR-378*表达,抑制CTGF表达。过表达miR-378*可减少hMSCs的存活,促进细胞凋亡。相反,抑制miR-378*的表达促进hMSCs的存活,减少细胞凋亡。同时抑制miR-378*和CTGF的表达,使miR-378*失去对hMSCs存活和凋亡的调控作用。直接抑制CTGF的表达可减少hMSCs的存活,促进细胞凋亡。结论:miR-378*通过抑制CTGF的表达减少hMSCs存活,促进hMSCs凋亡。董珺,曾波航,刘宁宁,莫沛,熊龙根,刘世明,黎佼 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
人脐带间充质干细胞传代后发生染色体核型变异
据文献报道人脐带间充质干细胞传代10次以上染色体核型分析都正常,我们在研究中发现,一例人脐带间充质干细胞传代到第8代,发生了染色体核型变异.现报道如下.阮光萍,潘兴华,邓永丽,姚翔,庞荣清,王金祥,王强,马丽花 - 中国优生与遗传杂志文章来源： 万方数据 -
梓醇促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖过程中W nt信号通路的变化
目的:观察梓醇促进大鼠骨髓间充质干细胞( bone marrow mesenchymal stem cells , BMSCs )增殖过程中Wnt信号通路的变化。方法:(1)采用机械分离及差速贴壁法分离培养SD大鼠BMSCs,将细胞分为空白对照组与梓醇(1.0 mg/L)处理组,流式细胞术检测各组细胞细胞周期分布情况,计算其增殖指数。(2)实时荧光定量PCR法检测各组细胞中Wnt3a、Wnt5a、Wnt11及β-catenin mRNA的表达水平;Western blotting技术检测各组细胞β-catenin蛋白的表达变化。结果:(1)空白对照组与梓醇处理组BMSCs增殖指数分别为8.90%±0.46%和17.93%±1.68%(P<0.01)。(2)与空白对照组相比,梓醇处理组Wnt5a、Wnt11、β-catenin mRNA及β-catenin蛋白表达均明显提高,但Wnt3a mRNA表达无显著变化。结论:梓醇在促进BMSCs增殖过程中可同时激活经典与非经典Wnt信号通路。傅淑平,杨丽,洪浩,偶晨,张荣华 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
骨髓间充质干细胞体外诱导免疫调节机制的探讨
目的:观察骨髓间充质干细胞(BM MSCs)对体外活化T细胞的免疫调节作用.方法:提取Wistar大鼠BM MSCs及新鲜脾淋巴细胞做共培养.实验分3组,3个时间点:分别为0、24、48 h脾淋巴细胞/BM MSCs+刀豆蛋白A(ConA)(实验组),脾淋巴细胞+ConA(对照组),单纯淋巴细胞组(空白组).MTT检测T淋巴细胞活性,ELISA检测细胞因子TNF-α、IL-10及TGF-β水平,流式检测Foxp3+调节性T细胞表达率.结果:(1)与对照组相比,实验组24、48 h在2个时间点T淋巴细胞活性均显著降低(P<0.05);(2)与对照组相比,实验组TNF-α在2个时间点有显著降低(P<0.05),实验组IL-10、TGF-β表达水平有显著升高(P<0.05);(3)实验组Foxp3+T调节细胞表达率高于对照组;(4)随着时间延长,空白组及对照组T淋巴细胞活性均显著降低(P<0.05),实验组T淋巴细胞活性随时间延长差异无统计学意义.结论:BM MSCs可以抑制T淋巴细胞活化,并通过减少炎症因子TNF-α的释放抑制免疫应答.另外,BM MSCs可通过自分泌及诱导T调节细胞产生并分泌免疫抑制因子IL-10、TGF-β下调免疫反应,产生免疫耐受.杜杰静,宋红丽,沈中阳,郭瑞雪,吴本娟,付楠楠 - 天津医科大学学报文章来源： 万方数据 -
晚期糖基化终产物对人脂肪间充质干细胞功能影响的体外研究
目的:探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对人脂肪来源的间充质干细胞(hADSCs)促进创伤修复功能的影响.方法:体外培养hADSCs,实验分为牛血清白蛋白(BSA)对照组、低浓度糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)效应组和高浓度AGE-BSA效应组.采用WST法和Transwell迁移实验检测各组细胞增殖和迁移情况.应用实时定量PCR和ELISA检测各组细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)、肝细胞生长因子(HGF)和胰岛素样生长因子1(IGF-1)的表达.结果:与对照组相比,AGE-BSA组增殖能力和迁移能力明显下降(P<0.05),VEGF、HGF和IGF-1 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05).结论:AGEs能损伤hADSCs的促进创伤修复功能,因而能够影响hADSCs治疗糖尿病皮肤溃疡病的治疗效果.王哲,刘晓玉,张殿宝,王秋实 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
连续传代培养对 hUC-MSCs 上NLR 家族 mRNA 表达的影响
目的:探讨连续传代培养对人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)表达NOD样受体(NLR)家族所有23个成员mRNA的影响,为改进hUC-MSCs传代培养质量与增加hUC-MSCs在实验和临床应用中的数量及安全性寻找切入途径。方法:取剖宫产无菌新生儿脐带,经胶原酶II消化结合贴壁选择分离纯化hUC-MSCs,并连续传代培养;采用流式细胞术、诱导分化和RT-qPCR对连续培养传代前后的hUC-MSCs(第3和28代)进行鉴定并对23个NLR家族成员mRNA的表达进行定量分析。结果:连续传代培养前后hUC-MSCs的细胞表型均为CD29+/CD44+/CD105+/CD31-/CD34-/CD40-/CD45-/CD106-/HLA-DR-,能被诱导为成骨和脂肪细胞,符合国际细胞治疗协会建议的MSCs基本特征。全部NLR家族成员的mRNA在培养第3代hUC-MSCs上均有表达,且NOD1、NLRC4、NL-RC5、NLRP1、NLRP3、NLRP10、NAIP、NLRX1和APAF1高表达,其余成员低表达。培养传代至第28代除NLRP10的mRNA表达上升、NLRC5和NLRX1 mRNA表达基本不变外,其余成员的mRNA表达均有所下降,其中NLRP1 mR-NA表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论:体外连续传代培养对hUC-MSCs表达NLR家族成员的影响是多向性的。这些影响与MSCs的增殖、分化及其免疫调节功能的联系有待进一步实验探讨。- 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
siRNA对预分化骨髓间充质干细胞β2M表达的影响
目的:研究小干扰RNA(siRNA)对预分化骨髓间充质干细胞(BMSCs)β2-微球蛋白(β2M)基因表达的影响。方法:BMSCs成软骨诱导液预分化21 d后,将β2 M siRNA用Lipofectamine 2000转染BMSCs、分为转染组、空白对照组和阴性对照组,应用实时定量PCR、Western blotting、激光共聚焦显微观察等方法检测siRNA对预分化BMSCs的β2 M mRNA和蛋白的表达情况,甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫荧光检测预分化BMSC的蛋白聚糖多聚体和Ⅱ型胶原分泌情况。结果:实时定量PCR、Western blotting 和激光共聚焦显微观察结果显示siRNA成功抑制β2 M mRNA和蛋白的表达,甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫荧光结果显示siRNA不影响预分化BMSCs蛋白聚糖多聚体和Ⅱ型胶原蛋白的分泌。结论: RNAi 干扰β2 M 可降低BMSCs 中β2 M mRNA和蛋白的表达,但不影响预分化BMSCs的软骨细胞特性。戴兵,范时洋,陈龙,金海东,蔡建武,潘骏 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据
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