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实时控制FISH预处理中酶消化的操作
荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)是通过荧光素标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交,在荧光显微镜下观察探针的杂交信号.在产前诊断、肿瘤遗传学等领域研究得到广泛应用.然而在FISH检测过程中,有多种因素(如组织标本的固定、切片厚度、酶的消化、杂交后洗涤)影响检测结果.其中影响最多的是蛋白酶的预处理,即蛋白酶的种类及消化时间[1-8].作者在实验中发现,控制消化时间固然重要,但掌握组织或细胞消化的程度徐明堂,赵焕芬,何春年,康林,张秀智,陈琛 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
XT超高温井下监控系统
XT超高温监控系统是Zenith油田技术公司在HT高温测量计的基础上升级改进而成的,抗温能力由原来的260℃提高到500℃,可以用于蒸汽热采井等高温高压井.该系统安装在生产油管与套管的环空之宗艳波 - 石油钻探技术文章来源： 万方数据 -
异氟烷预处理或后处理对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的影响
目的 探讨异氟烷预处理或后处理对大鼠局灶性脑缺血/再灌注(I/R)时炎症因子、脂质过氧化等相关指标的影响.方法 将32只SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、异氟烷预处理组及异氟烷后处理组4组,每组8只.对照组不给予异氟烷与脑缺血处理;模型组大鼠接受90 min右侧大脑中动脉闭塞(MCAO);异氟烷预处理组大鼠在MCAO前24 h给予2%异氟烷30 min;异氟烷后处理组大鼠在MCAO后,于再灌注开始时给予2%异氟烷60 min.操作结束24 h后取心脏血,检测血清炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量及脂质过氧化相关指标丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹试验(Westen Blot)检测右侧脑组织基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)及紧密连接蛋白闭合蛋白5(Claudin-5)、咬合蛋白(Occludin)的mRNA和蛋白表达.结果 与对照组相比,模型组大鼠血清IL-1β(ng/L)、TNF-α(ng/L)及MDA(μmol/L)含量均显著增加,SOD(U/L)活性则显著下降(IL-1β:76.81±11.14比52.43±8.86,TNF-α:64.93±10.81比33.64±7.94,MDA:8.63±1.42比4.14±0.98,SOD:0.95±0.21比2.36±0.80,均P<0.05);与模型组比较,经异氟烷预处理或后处理后,大鼠血清IL-1β、TNF-α及MDA含量显著下降,SOD活性则显著回升(IL-1β:54.37±9.06、56.82±8.67比76.81±11.14,TNF-α:43.72±6.16、39.49±9.34比64.93±10.81,MDA:5.65 ±0.83、5.82±0.78比8.63±1.42,SOD:1.64±0.47、1.71±0.52比0.95±0.21,均P<0.05).同时,I/R可导致受损脑组织MMP表达升高,紧密连接蛋白表达降低;与模型组比较,经过异氟烷预处理或后处理后,大鼠受损脑组织中MMP-2与MMP-9的mRNA及蛋白表达均明显下降(MMP-2 mRNA:1.25±0.08、1.32±0.12比2.48±0.26,MMP-2蛋白:1.56±0.09、1.50±0.08比2.12±0.11; MMP-9 mRNA:1.26 ±0.13、1.20±0.12比2.74±0.28,MMP-9蛋白:1.53±0.04、1.51±0.05比2.23±0.09,均P<0.05),而Claudin-5和Occludin的mRNA及蛋白表达均显著回升(Claudin-5 mRNA:0.40±0.08、0.38±0.06比0.28±0.03,Claudin-5蛋白:0.80±0.06、0.81±0.07比0.39±0.02; Occludin mRNA:0.54±0.07、0.50±0.08比0.26±0.06,Occludin蛋白:0.64±0.06、0.69±0.05比0.49±0.02,均P<0.05).结论 异氟烷预处理或后处理均可缓解I/R引起的血清中炎症因子分泌及脂质过氧化程度,并可降低大脑组织中MMP对紧密连接蛋白的蛋白水解活性,减少紧密连接蛋白的缺失,从而减轻I/R损伤.李国福,贾佳,符加红,汪海源,吉凯强,臧彬 - 中华危重病急救医学文章来源： 万方数据 -
基于NaOH预处理的废纸纤维发泡材料工艺及配方研究
通过2种途径对废纸纤维发泡材料的工艺配方进行了优化,以获得性能更好的废纸纤维发泡材料.一是对废纸纤维原料进行NaOH预处理,研究了NaOH预处理对发泡材料性能的影响;二是基于NaOH预处理,采用微波加热发泡工艺改善了废纸纤维发泡材料的性能.结果表明:NaOH预处理较大程度上改善了废纸纤维发泡材料的发泡倍率、密度及缓冲性能.试验确定了废纸纤维预处理的最佳条件和基于NaOH预处理的废纸纤维发泡材料的最佳工艺配方.张惠莹,张晶,孙昊,江兴亮,张新昌 - 包装工程文章来源： 万方数据 -
乳腺癌组织Slug和Snail细胞核抗原热修复方法的优化
充分的抗原修复是免疫组化染色效果好坏的重要环节,特别是抗原修复处理方法和抗原修复液的选择[1].抗原修复包括酶修复法和热修复法,胰蛋白酶消化法近年来很少使用[2].石善溶[3]认为从石蜡切片中提取蛋白质时选择适宜的加热条件进行处理,效果良好.高压修复和微波修复是目前最常用的两种热修复方法,枸橼酸缓冲液和EDTA缓冲液是最常用的两种修复液.为更好的显示细胞核抗原免疫组化结果,本实验拟在石蜡包埋乳腺浸润性导管癌组织切片中,选择不同的热修复方法和修复液,对Slug和Snail两个核蛋白进行免疫组化实验,探讨细胞核抗原的最佳修复方法.1材料与方法1.1材料与试剂选取石河子大学医学院第一附属医院李文琴,万国兴,李锋,梁伟华,李玉聪,李怡晓,杜小明,曹玉文 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
Hf02/Si02薄膜的激光预处理作用研究
对电子柬蒸发方式镀制的HfO2/SiO2反射膜采用大口径激光进行辐照,采用激光量热计测量了激光辐射前后的弱吸收值.实验发现HfO2/SiO2反射膜在分别采用1064nm和532nm的激光辐照前后薄膜吸收分别从5.4%和1.7%降低到1.4和1.2%.采用聚焦离子束技术分析了激光辐照后薄膜的损伤形态并探究了损伤原因,发现:薄膜在激光辐照下存在节瘤的地方容易出现薄膜损伤,具体表现为熔融、部分喷发、完全脱落3种形态,节瘤缺陷种子来源的差异是导致其损伤机理也存在着巨大差异的主要原因.同时这些节瘤缺陷种子来源也影响着激光预处理作用效果,激光预处理技术对于祛除位于基底上种子形成的节瘤是有效的,原因是激光辐射过后该节瘤进行了预喷发而不会对后续激光产生影响;而激光预处理技术对位于膜层中间的可能是镀膜过程中材料飞溅引起的缺陷是无效的,需要通过飞秒激光手段对该类节瘤进行祛除.李海波,杜雅薇,张清华,卫耀伟 - 应用光学文章来源： 万方数据 -
高温高压凝析气井全过程欠平衡设计
针对高温高压凝析气井钻井过程中的储层伤害问题,在对国内外最新设计方法综合研究分析的基础上,开展了室内试验和软件模拟,提出了一种新的全过程欠平衡设计方法.该方法综合分析了井控安全、井壁稳定性、储层凝析气反凝析发生的油锁伤害和毛细管力引起的水锁伤害等因素.同时,在计算水力参数时考虑了温度和压力对钻井液密度和黏度的影响.为了保证在钻进、起下钻和接单根整个钻井过程中井底一直处于欠平衡状态,配套安装了旋转防喷器、井下套管阀等工具和设备,优化了施工工艺.采用该方法对沙特B-0008井进行了详细的设计分析.该设计方法既能保证井下安全,又能避免储层伤害,提高了探井发现油气的成功率.杨顺辉,赵向阳,石宇,田璐,李陆武 - 石油钻探技术文章来源： 万方数据 -
改进的页面与时间阈值的会话识别法
会话识别是Web日志挖掘的基础,提高会话的识别率能为后续模式的挖掘提供准确可靠的数据,已有许多研究集中于此.在常用的计算时间阈值识别方法的基础上,提出一种改进的基于URL页面类型、页面信息量和停留时间的平均阈值识别方法.针对不同的URL页面类型采用不同的阈值计算方法,并设置时间阈值.相对于已有的对所有用户访问页面使用单一的先验阈值和现有动态阈值计算,该方法能够更真实地反映用户会话的情况,且识别的准确率有了较大提高.郑立山,滕少华 - 计算机应用与软件文章来源： 万方数据 -
亚低温预处理对谷氨酸诱导原代大鼠皮质神经细胞损伤的保护作用
目的 观察亚低温预处理对体外环境下培养大鼠大脑皮质细胞发生类缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用;比较亚低温单用或联合药物预处理的保护作用.方法 选择出生24 h内SD大鼠的大脑皮质细胞,体外培养至第3天,用阿糖胞苷(2.5 mg/L)培养基换液1次;培养6d后随机分为空白对照组、谷氨酸损伤组(加入含200 μmol/L谷氨酸的无血清培养基作用0.5 h)、亚低温预处理组(谷氨酸损伤前1d于33.5℃低温下培养24 h)、亚低温联合依达拉奉预处理组和亚低温联合丙泊酚预处理组(谷氨酸损伤前1d分别更换为100 μmol/L依达拉奉培养基和3 mg/L丙泊酚培养基后,再低温培养24 h).各组更换正常培养基24 h后检测细胞存活率[四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法]、细胞凋亡率、c-fos蛋白表达,苏木素-伊红(HE)染色后显微镜下观察细胞形态改变,铀-铅染色后透射电镜下观察细胞超微结构改变.结果 谷氨酸损伤组细胞存活率明显低于空白对照组[(0.20±0.02)%比(0.97±0.03)%,P<0.01],细胞凋亡率和c-fos蛋白表达均明显高于空白对照组[细胞凋亡率:(9.85±0.76)%比(0.94±0.20)%,c-fos(ng/L):6.96±0.75比1.65±0.59,均P<0.01].亚低温预处理可明显逆转谷氨酸损伤细胞的存活率、凋亡率及c-fos水平,且以亚低温联合丙泊酚预处理作用最为明显[存活率:(0.80±0.04)%比(0.20±0.02)%,凋亡率:(2.26±0.54)%比(9.85±0.76)%,c-fos(ng/L):2.98±0.46比6.96±0.75,均P<0.01].显微镜下观察细胞形态发现,空白对照组大部分细胞形态大致正常;谷氨酸损伤组较多细胞质呈深红色,核呈蓝黑色,同缩状态,轴突萎缩明显,个别细胞突起断裂,细胞数量锐减;各预处理组细胞数量减少不明显,可见少量凋亡细胞.透射电镜下观察细胞超微结构发现,空白对照组神经细胞超微结构无明显改变;谷氨酸损伤组细胞质内细胞器数量明显减少,线粒体严重肿胀、嵴消失,呈空泡化或固缩,粗面内质网严重扩张,核膜局部出现囊样改变、甚至溶解断裂,染色质浓缩、凝集在核膜周边;各预处理组病理改变较谷氨酸损伤组明显减轻.结论 亚低温预处理能降低体外培养谷氨酸对大鼠大脑皮质神经细胞的损伤,且亚低温联合丙泊酚预处理组的保护作用更好.薄丰山,王迪芬,刘文悦,付江泉 - 中华危重病急救医学文章来源： 万方数据 -
缝洞型碳酸盐岩凝析气藏注水开发物理模拟研究
与一般砂岩凝析气藏不同,缝洞型碳酸盐岩凝析气藏发育有大小不同、形状各异的裂缝和孔洞,使其具有非均质性强,流体流动规律复杂等特征。如何提高该类气藏的采收率是值得研究的问题。技术成熟的注水技术具有开发成本低、水气流度比好、水驱波及效率高等优点。以塔中86井为例,采用露头碳酸盐岩经过人工技术制成全直径缝洞型岩心,在原始地层条件下(140.6℃,58 MPa)完成注水开发物理模拟实验。结果表明,采用注水保压方式开发高含凝析油的缝洞型碳酸盐岩凝析气藏效果较好;凝析油的采收率受缝洞连通方式、缝洞充填与否、压力保持水平等因素的影响。彭松,郭平 - 石油实验地质文章来源： 万方数据
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