科创中国

以绵羊肺炎支原体(Mycoplasma oumvipneoniae,MO)标准株Y98基因组为模板,设计1对特异引物,PCR扩增得到798bp的P30目的基因(MOP30),将其定向克隆到pMD19-T Simple载体中进行测序分析.重组质粒进行XbaⅠ/BamHⅠ双酶切并回收目的片段,将目的基因亚克隆入黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,YFP)表达载体pCAMBIA1300-YFP中构建重组融合表达质粒pCAMBIA1300-MOP30-YFP.双酶切验证后的融合表达质粒转化农杆菌(Agrobacterium)感受态细胞,侵染烟草(tobacco)叶片.通过激光共聚焦成像显微镜(cofocal imagingmicroscope)观察到融合表达的黄色荧光蛋白,Western-blotting试验得到57 000的特异条带,RT-PCR检测到MOP30基因在烟草叶片中转录.MOP30-YFP融合蛋白在烟草中的成功表达,为转基因植物疫苗防治绵羊支原体肺炎奠定了基础.

为探明枯草芽胞杆菌PTS-394在番茄根围的定殖能力,采用电转化法获得绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记菌株PTS-GFP,构建其生长曲线,采用对峙生长法评价其室内抑菌活性,并应用抗生素平板回收结合激光扫描共聚焦显微镜观察标记菌株在番茄根围的定殖数量.结果显示:与原始菌株PTS-394相比,标记菌株PTS-GFP的生长、对青枯病菌和4种病原真菌的室内抑菌能力无明显差异.标记菌株PTS-GFP和青枯病菌菌液单独或混合处理番茄苗,灌根当天标记菌株初始菌量接近108CFU/g,处理3 d后种群数量迅速下降,约106CFU/g,随后缓慢下降,处理10d后种群数量约104CFU/g,处理30 d后,标记菌株仍然能被检测到,约20 CFU/g.表明枯草芽胞杆菌PTS-394在番茄根际土壤中具有一定的定殖能力.

目的:探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠脐带和骨髓源性间充质干细胞( MSCs )的体外分离培养方法、生物学特性、表面标志及多向分化潜能。方法:应用Ⅱ型胶原酶消化培养法分离脐带MSCs及密度梯度离心法分离骨髓MSCs进行体外培养。在倒置显微镜下观察2种细胞的生长特点,运用生长曲线和MTT法检测其原代细胞增殖能力,台盼蓝法测定细胞传代成活率,采用流式细胞术测定2种第3代( P3)细胞DNA周期及表面标志物的表达,并比较其向成脂细胞和成骨细胞的分化潜能。结果:酶消化法分离培养的脐带MSCs 1 d后,细胞贴壁呈成纤维形,2 d后呈漩涡状生长且增殖明显,3 d后达80%融合即可传代;应用密度梯度离心法分离骨髓MSCs,体外培养4 d后,细胞贴壁呈圆形、梭形和多角形生长,5 d后呈克隆样生长且增殖明显,7 d后达80%融合即可传代。原代培养的脐带MSCs生长曲线近似“S”形,骨髓MSCs 生长曲线较平缓;MTT法显示脐带MSCs在3~5 d增殖较明显,骨髓MSCs 7 d后细胞增殖较明显。2种P3细胞传代成活率均为96%以上,G0/G1期细胞均为85%以上,无明显差异(P>0.05);2种P3细胞CD44、CD90和CD105阳性率均为(60.7±2.3)%以上高表达,CD45、CD19、CD14和CD79a均为(25.6±4.8)%低表达,两者无明显差异( P>0.05);2种MSCs在体外均具有向成骨细胞和成脂细胞分化的潜能,脐带MSCs向成骨及成脂细胞分化率均为90%以上,与骨髓MSCs的分化潜能比较有显著差异( P<0.05)。结论:脐带MSCs较骨髓MSCs具有较强的增殖能力及分化潜能。绿色荧光蛋白转基因小鼠的脐带MSCs可作为较好干细胞示踪的细胞源。

荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)是通过荧光素标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交,在荧光显微镜下观察探针的杂交信号.在产前诊断、肿瘤遗传学等领域研究得到广泛应用.然而在FISH检测过程中,有多种因素(如组织标本的固定、切片厚度、酶的消化、杂交后洗涤)影响检测结果.其中影响最多的是蛋白酶的预处理,即蛋白酶的种类及消化时间[1-8].作者在实验中发现,控制消化时间固然重要,但掌握组织或细胞消化的程度

目的探讨前列腺癌(prostate cancer,PC)中TMPRSS2-ERG(T-E)融合基因和ERG蛋白表达及其与各临床病理参数和预后的关系.方法采用FISH和免疫组化技术分别检测145例PC穿刺标本中T-E融合基因和ERG蛋白的表达,以癌旁正常腺体为内对照.结果 145例PC中37例(25.5%)T-E融合基因阳性.T-E融合基因表达与患者年龄、术前血清PSA水平、Gleason评分、肿瘤有无远处转移和生存期均无相关性(P>0.05).PC中ERG蛋白阳性率为24.8%(36/145).ERG蛋白与术前血清PSA水平具有相关性(P<0.05);与患者年龄、Gleason评分、肿瘤有无远处转移和患者生存期均无相关性.结论T-E融合基因和ERG蛋白表达仅出现在PC中,而不出现于正常前列腺腺体,T-E融合基因和ERG蛋白可作为PC的特异性标志物.仅ERG蛋白表达与PSA水平相关,而T-E融合基因与临床病理参数和预后均无相关性.

Life-history theory predicts that in hibemators age of maturation is related positively to body size and negatively to the duration of active season aboveground. Yellow souslik is a large-sized ground squirrel with long hibernation, which suggests late maturation. We used four-year field observations of marked individuals to determine the age of maturation in males through analysis of age-dependent variation in body size, mass, androgen status, timing of spring emergence, ranging patterns and social behavior during the mating season. Yearling males were smaller, lighter, had lower level of fecal testosterone, emerged later and had smaller home ranges than older males. Social activity and the number of females encountered did not differ between age classes. After the second hibernation none of the studied parameters varied with age. Cluster analysis revealed two behavioral tactics: "active" males (adults only) emerged earlier, ranged more widely, initiated more contacts, encountered more females and were heavier than "passive" males (both yearling and adult). Thus, males of S. fulvus reached adult size and matured after two hibernations, which is relatively fast for such a big species with short active period. Indirect evidence for copulations and high variation among yearlings in all parameters suggest that some of them might successfully compete with adults. Active tactic of wandering and searching for females is energetically costly, and probably only adult males in good physical condition can afford it, whereas passive tactic of residing is energy saving and good for adults in poor condition and for yearlings that are continuing to grow.

染色体异常包括胚胎染色异常和夫妇染色体异常,是自然流产最常见的原因,其中胚胎染色异常是导致自然流产发生的主要原因[1].采用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术对自然流产的绒毛及胎儿组织中的13、16、18、21、22、XY染色体数目异常进行检测,FISH具有成功率高、准确、省时,对检测标本限制低等优点[2].而如何确保FISH的制片质量尤为重要,本文着重介绍FISH技术操作在3种类型流产组织中的应用体会.1材料与方法1.1标本来源收集广州医科大学附属第三医院病理科诊

一部叫《非洲怪客》的纪录片,讲的是那些天生和另4的同类长得不太一样的动物,比如一只白色的非洲狮子、一只黄色的鳄鱼和一只长着条状花纹的猎豹.因为基因变异的缘故,它们得了皮肤病,因此在种群中会特别显眼,成为怪客.但这却是一件威胁到生存的糟糕事.白色的狮子无法在草丛里隐藏,黄色的小鳄鱼在水里特别扎眼.无法接近猎物,是他们致命的弱点,但这就是大自然的法则.而大自然的另一个法则是,

目的:发展一种基于量子点的重现性好、灵敏度高、选择性强的检测叶酸的荧光探针.方法:以聚乙烯亚胺功能化量子点,使其表面拥有大量氨基,利用叶酸的羧基和量子点表面氨基的静电吸附作用导致的电子转移调控量子点的荧光.结果:该探针对于光照和pH变化均有良好的耐受性,而且对于叶酸的检测有良好的选择性,可以抵抗很多金属离子和小分子的干扰.2.0μmol/L叶酸的加标回收率在99%~104%.检测限为35 nmol/L,与同类型的叶酸荧光探针的最佳检测限具有可比性.结论:基于PEI-QDs的叶酸荧光探针具有良好的重现性、灵敏度和选择性,有望成为替代液相色谱检测叶酸的高效、廉价分析手段.

目的 改进石蜡组织的处理,提高结核分枝杆菌在石蜡组织中检测的敏感性.方法 选择荧光定量PCR检测石蜡组织结核分枝杆菌检测结果为临界值的蜡块标本,行HE染色、抗酸染色及荧光定量PCR石蜡组织结核分枝杆菌DNA检测.通过对其石蜡组织少修片、混合多个蜡块、选择干酪样坏死及肉芽肿病变较多的蜡块以及适量增加模板量的多种方法,对比其在荧光定量PCR法中的检出率.结果 各实验组Ct值减小,扩增曲线均有不同程度的升高.结论 改进操作措施后可以提高蜡块中结核分支杆菌检测的敏感度.