科创中国

目的:观察HeLa细胞感染柯萨奇病毒B3 (CVB3)后Bax和Bim mRNA和蛋白的表达.方法:将HeLa细胞分为未予以CVB3感染的对照组和予以CVB3感染的病毒组,取3 h、6 h、9 h、12 h和24 h 的细胞,采用RT-PCR和Western blotting分别检测Bax和Bim mRNA和蛋白的表达.结果:Bax和Bim mRNA在对照组和病毒组HeLa细胞中均有表达,在病毒组和对照组中Bax和Bim mRNA的表达在各自组内均无显著差异(P>0 05),但在24 h Bax和Bim在病毒组mRNA的表达低于对照组(P<0 05).Bax和Bim蛋白表达在对照组中各时点均有表达,但无显著差异(P>0 05).病毒组Bax蛋白在24 h表达下降,差异有统计学意义(P<0 05),且病毒组表达明显低于对照组(P<0 05);Bim蛋白的表达随感染时间延长而下降(P<0 05),9 h、12 h和24 h表达病毒组低于对照组(P<0 05).结论:Bax和Bim在CVB3感染诱导的HeLa细胞凋亡早期发挥作用.

目的:探讨苦参碱在体外对人髓母细胞瘤D341细胞凋亡及Bax、Bcl-2、丝氨酸/苏氨酸激酶Akt和磷酸化Akt(p-Akt)表达的影响。方法:体外培养的D341细胞分为实验组(加不同浓度的苦参碱)和对照组(不加苦参碱),用CCK-8法检测苦参碱对D341细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot-ting检测苦参碱对D341细胞Bax、Bcl-2、Akt和p-Akt蛋白表达的影响。结果:苦参碱在体外能明显地抑制D341细胞的生长,作用呈量效与时效关系;随着作用药物浓度的增高和作用时间的延长,其凋亡率逐渐升高,在透射电镜下观察,细胞可见染色质趋边固缩,胞浆中空泡增多、变大,并且出现凋亡小体;Western blotting结果表明,随着药物浓度的增加,药物能使瘤细胞Bax蛋白的表达水平增强,却使Bcl-2和p-Akt蛋白的表达水平下降。结论:苦参碱可诱导D341细胞的凋亡而发挥体外抗肿瘤作用,其诱导瘤细胞的凋亡与上调Bax蛋白、下调Bcl-2及PI3K /Akt信号通路中p-Akt蛋白的表达水平有关。

目的:探讨越桔原花青素对脑胶质瘤细胞生长的影响。方法:培养脑胶质瘤C6细胞,将其分为对照组以及10、20和40μg/L越桔原花青素组,MTT法检测药物对C6细胞生长的影响,倒置显微镜观察细胞生长的变化,Annexin V/PI染色检测细胞凋亡率的变化,免疫细胞化学法检测Bcl-2与Bax蛋白表达,Western blotting 检测Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达。结果:在24、48和72 h时,10、20和40μg/L越桔原花青素均抑制C6细胞的生长,24和48 h 时40μg/L 越桔原花青素组、72 h 时20和40μg/L 越桔原花青素组细胞生长明显受抑制(均P<0.01);倒置显微镜观察发现,各药物组细胞密度随药物浓度升高而减少;Annexin V/PI分析显示,细胞的凋亡率亦随着药物浓度的增加而明显增加;细胞免疫组化结果显示,10、20和40μg/L越桔原花青素组中,C6细胞表达Bcl-2蛋白减少,表达Bax蛋白增加,但均无明显差异;Bax/Bcl-2的比值随着药物浓度升高而增加( P<0.05或P<0.01);Western blotting结果显示,10、20和40μg/L越桔原花青素组中,随着药物浓度升高,细胞表达Bcl-2蛋白减少(P<0.01)而Bax和caspase-3蛋白表达均增加,Bax/Bcl-2的比值也明显增加(P<0.01)。结论:越桔原花青素抑制脑胶质瘤C6细胞的生长,其作用机制与调控Bax蛋白增加和Bcl-2蛋白减少,使Bax/Bcl-2比值增加,从而激活caspase-3,诱导凋亡发生有关。

目的 研究线粒体膜通透性转换(MPT)与肝细胞凋亡及线粒体损伤之间的关系,初步探讨姜黄素对MPT的影响及其可能机制.方法 将15只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、脓毒症组及姜黄素组,每组5只.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型;假手术组仅开腹翻动盲肠,不进行结扎、穿孔.姜黄素组术前以100 mg·kg-1·d-1姜黄素溶于生理盐水至10 mL/kg,连续灌胃7d,其余组灌胃等量生理盐水.术后12h取肝组织,透射电镜下观察肝细胞线粒体形态学改变;采用钙离子荧光探针Fluo-3/AM检测细胞内游离Ca2+浓度;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)和B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)及其相关X蛋白(Bax)的蛋白表达;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝细胞活化caspase-3、Bcl-2、Bax的mRNA表达.结果 透射电镜下观察假手术组细胞膜完整,胞质均匀,线粒体正常、清晰;脓毒症组肝细胞线粒体明显肿胀,内膜嵴断裂或消失,双层膜结构消失;姜黄素组线粒体轻度肿胀,少数细胞出现线粒体肿胀,双侧膜结构不清.假手术组、姜黄素组、脓毒症组荧光强度指数依次增高,分别为417.33±15.88、772.95±42.37、1 560.84±160.78 (F=184.149,P=0.000).脓毒症组活化caspase-3和Bax的蛋白及mRNA表达最高,姜黄素组次之,假手术组最低[活化caspase-3蛋白(灰度值):1.698±0.061、0.694±0.045、0.246±0.027,F=1 289.667,P=0.000;活化caspase-3 mRNA(2-ΔΔα):1.031±0.135、0.578±0.144、0.183±0.036,F=66.958,P=0.000; Bax蛋白(灰度值):1.826±0.126、1.254±0.140、0.623±0.901,F=94.536,P=0.000; Bax mRNA(2-△△Ct):2.774±0.338、1.661±0.226、0.656±0.114,F=124.710,P=0.000],且各组间两两比较差异均有统计学意义(均P<0.01);而假手术组、脓毒症组、姜黄素组Bcl-2的蛋白及mRNA表达依次升高[Bcl-2蛋白(灰度值):0.716±0.091、1.328±0.147、1.656±0.104,F=84.918,P=0.000; Bcl-2 mRNA(2△△Ct):0.617±0.118、1.393±0.096、1.650±0.167,F=83.846,P=0.000].脓毒症组Bcl-2/Bax的蛋白及mRNA表达最低,假手术组次之,姜黄素组最高[Bcl-2/Bax蛋白(灰度值):0.726±0.055、1.150±0.043、1.333±0.163,F=46.265,P=0.000; Bcl-2/Bax mRNA(2-ΔΔCt):0.505±0.041、0.944±0.097、1.006±0.168,F=12.211,P=0.001].结论 MPT可导致线粒体功能损伤,并进一步引起肝细胞凋亡;姜黄素通过降低细胞内Ca+浓度、促进抗凋亡基因Bcl-2表达以及抑制caspase-3活化和Bax基因表达,从而发挥调节MPT的作用.

目的 观察热打击后人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内活性氧(ROS)爆发性增高调控Bcl-2、Bax表达对凋亡的影响,探讨重症中暑所致血管内皮损害的发病机制.方法 建立HUVEC热打击模型.将细胞分别置于39、41、43 ℃细胞培养箱中进行热打击2h,然后置于37 ℃、5% CO2细胞培养箱后继续孵育24 h;在43 ℃热打击前以10μmol/L ROS特异性清除剂MnTMPyP预处理lh进行干预.对照细胞仅置于37 ℃、5%CO2细胞培养箱中孵育.应用二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法及二氢乙啶(DHE)法检测细胞内ROS表达;使用Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Bcl-2、Bax的mRNA表达;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测Bcl-2、Bax及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表达;同时检测MnTMPyP对热打击后细胞凋亡的影响.结果 与对照组比较,39℃热打击对细胞凋亡无影响,随着热打击温度增加至41℃、43℃时,细胞存活率呈进行性下降,ROS爆发性增加,Bax的mRNA和蛋白表达以及caspase-3蛋白表达显著增加,Bcl-2的mRNA和蛋白表达显著降低,且呈温度依赖性,其变化以43℃热打击最为明显[细胞存活率:(46.00±4.00)%比(96.33±1.53)%,t=20.164,P=0.001;ROS(荧光相对值):400.67±12.10比99.33±4.04,t=32.909,P=0.001;Bax mRNA(A值):3.03±0.15比1.00±0.00,t=23.056,P=0.001;Bax蛋白(灰度值):3.97±0.21比1.00±0.00,t=24.684,P=0.001;caspase-3蛋白(灰度值):4.80±0.20比1.00±0.00,t=32.909,P=0.001;Bcl-2 mRNA(A值):0.42±0.30比1.00±0.00,t=33.072,P=0.001;Bcl-2蛋白(灰度值):0.39±0.25比1.00±0.00,t=42.212,P=0.001].MnTMPyP预处理可明显逆转43℃热打击对HUVEC的损害,可明显抑制Bax、caspase-3表达,上调Bcl-2表达[BaxmRNA(A值):2.00±0.20比3.33±0.25,t=7.184,P=0.002;Bax蛋白(灰度值):2.03±0.25比3.23±0.25,t=5.840,P=0.004;caspase-3蛋白(灰度值):2.07±0.21比5.00±0.20,t=17.600,P=0.001;Bcl-2 mRNA(A值):0.71±0.40比0.42±0.26,t=8.126,P=0.002; Bcl-2蛋白(灰度值):0.57±0.31比0.40±0.06,t=5.091,P=0.007].结论 热打击后HUVEC内ROS爆发性增高在凋亡中发挥了重要作用,其机制与调控凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达有关;血管内皮细胞凋亡可能是重症中暑的发病机制之一.

目的 检测与分析军人健康人群唾液总蛋白(TP)浓度、白蛋白(ALB)浓度、球蛋白(GLO)浓度以及白蛋白与球蛋白比值(A/G),建立我军健康人群参考标准,为后续研究军队特殊人员特殊口腔疾病特点及口腔健康状况提供参照,同时也可为临床诊断提供参考.方法 此次检测采用常规硫脲新试剂探针测定法,建立以APT为分子探针,运用固定波长同步荧光光谱分析测定唾液TP、ALB、GLO含量.结果 TP 3.00~ 5.90 g/L,平均浓度为(4.470±0.905) g/L.ALB 0.29 ~ 2.09 g/L,平均浓度为(1.517 ±0.418)g/L.GLO 0.01~4.01 g/L,平均浓度为(2.898±0.737) g/L.A/G平均比值为0.527.结论 唾液具有复杂的生化组成,口腔中的各种疾病皆可反映在唾液中,测定唾液中TP、ALB、GLO浓度以及A/G比值对某些口腔疾病的诊断参考和预后判断有一定意义.

目的:通过筛查鼻咽癌病人复发组织与鼻咽癌初发组织分子标志物表达的差异,探讨差异表达的蛋白与鼻咽癌复发的关系,为干预鼻咽癌复发提供新的靶点.方法:免疫组织化学SABC法检测Jab1、p-STAT3、CHOP和Akt1在复发和初发病人鼻咽癌组织中的表达;Western blotting法检测鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2、CNE-2R和HONE1中Jab1和Akt1蛋白的表达.结果:复发病人鼻咽癌组织Jab1和Akt1核表达水平均高于初发鼻咽癌组织(P <0.05);Jab1和Akt1在CNE-1、CNE-2R和HONE1细胞中的表达高于在CNE-2细胞中的表达,电离辐射能促进CNE-1、CNE-2、CNE-2R和HONE1细胞中Jab1蛋白的表达.结论:复发病人鼻咽癌组织或辐射抗拒鼻咽癌细胞中Jab1和Akt1核表达均高于初发鼻咽癌组织或辐射相对敏感的鼻咽癌细胞;电离辐射促进鼻咽癌细胞中Jab1过表达.

目的:探讨血清 C 反应蛋白(CRP)和心肌肌钙蛋白 T( cTnT)在诊治急性心肌梗死(AMI)患者中的临床应用价值和意义。方法选择67例 AMI 患者(观察组)、51例非心血管疾病患者(对照组)及健康体检人群56例(健康对照组),分别测定 CRP 和 cTnT 水平并进行比较。结果观察组 CRP 及 cTnT 检测阳性率分别为82%和84%,对照组分别为6%和0,健康对照组分别为5%和0,观察组与对照组和健康对照组比较有显著性差异( P 均﹤0.01),对照组与健康对照组比较无显著性差异(P ﹥0.05)。观察组 cTnT 与 CRP 水平显著正相关(r =0.982,P ﹤0.01)。观察组 CRP、cTnT 单独检测时,其敏感度、特异度分别为82%,90%和84%,100%;联合应用两者后其敏感度为88%,特异度91%。结论 cTnl 与 CRP 对 AMI的诊断及早期诊断具有重要的临床应用价值,值得临床推广应用。

目的:探讨RNA干扰沉默NANOG表达后对肝癌细胞HepG2中细胞周期素D1 (cyclin D1)表达及细胞增殖的影响.方法:将以NANOG基因为靶点的NANOG-siRNA瞬时转染肝癌细胞HepG2,real-time PCR和Western boltting检测NANOG、cyclin D1 mRNA和蛋白的表达,CCK-8和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期情况.结果:与mock组比较,转染NANOG-siRNA后,肝癌细胞HepG2中NANOG、cyclin D1mRNA和蛋白水平均下调(P<0.05),细胞增殖能力下降(P<0.05),进入G0/G1期的细胞比例增多(P<0.05).结论:沉默NANOG表达可引起肝癌细胞HepG2中cyclin D1的表达下降,导致细胞增殖能力下降.

为促进蛋白吸收率,提高饲料报酬,对15头不同产奶期奶牛进行改性蛋白饲喂,通过对比不同产奶期奶牛对改性蛋白的利用,得到改性蛋白对泌乳牛产奶量的影响.结果表明:改性蛋白对于泌乳牛产奶量影响不显著,但对于泌乳牛体况改善有显著成效,而且对于粪便质量改善较大.