-
CUL4B基因在结肠癌组织上调并促进HCT116细胞的增殖
目的观察CUL4B基因在结肠癌组织中的表达,以及对人结肠癌细胞株HCT116增殖能力的影响.方法运用实时定量荧光PCR(Real-time PCR)技术检测40例结肠癌及配对正常结肠黏膜中CUL4B mRNA的表达量,比较两者表达差异.构建pEGFP-N1-CUL4B真核表达载体,并通过脂质体质粒转染HCT116细胞,运用体外细胞毒性试验(MTT)法研究CUL4B对结肠癌HCT116细胞增殖功能的影响.结果 40例结肠癌组织中CUL4B mRNA表达水平ΔCt为13.21±1.33,对应正常组织表达水平ΔCt为18.61±1.86,结肠癌组织中CUL4B基因表达量明显高于配对正常结肠黏膜组织(P<0.05).MTT实验结果显示CUL4B可显著促进结肠癌HCT116细胞的增殖,HCT116-GFP-RKO组与阴性对照组、亲本细胞组对比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 UL4B在结肠癌组织中异常高表达,并且可促进结肠癌HCT116细胞株的增殖功能,可能在结肠癌发生发展中起重要作用.张顺霞,马丽园,姜韬 - 宁夏医学杂志文章来源： 万方数据 -
脂多糖对2型糖尿病肾病患者单核细胞TLR4水平及NF-κB,Notchl表达的影响
目的:探讨2型糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)患者外周血单核细胞Toll样受体4(toll-likereceptor,TLR4)的表达及脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)对其的影响,以了解炎症性免疫反应在DN中的可能作用机制.方法:收集30例2型DN尿毒症患者,10例早期2型DN患者和20例健康志愿者.采用外周血流式细胞术检测单核细胞TLR4的表达,并分离其外周血单个核细胞(PBMC),用LPS干预24h,收集PBMC和上清液.分别采用Western印迹检测PBMC内TLR4,NF-κBp65和Notchl蛋白表达;免疫荧光检测NF-κBp65蛋白表达.ELISA法检测外周血血清及LPS干预后细胞上清液IL-6浓度.免疫比浊法检测血清CRP水平.结果:2型DN患者外周血单核细胞的TLR4荧光强度值、IL-6和CRP水平均高于正常对照组[TLR4荧光强度值:2型DN尿毒症患者2.8±0.9、早期2型DN患者3.4±0.7、正常对照组1.6±0.7;IL-6:2型DN尿毒症患者(84.8±20.7)pg/mL、早期2型DN患者(63.20±14.4)pg/mL、正常对照组(11.0±2.0)pg/mL;CRP:2型DN尿毒症患者(5.4±2.8)mg/L;早期2型DN患者(3.7±1.7)mg/L、正常对照组(1.7±-0.7)mg/L,均P〈0.01],LPS干预后2型DN患者PBMC的TLR4,NF-κBP65蛋白表达和IL-6水平明显高于正常对照组(P〈0.05),早期2型DN患者PBMC以上指标水平均高于DN尿毒症患者,且2型DN患者NF-κBp65的表达存在核转移现象,但与正常对照组比较Notchl蛋白表达水平差异无统计学意义(P〉0.05).结论:DN患者体内可能存在单核细胞功能紊乱,这种功能紊乱可能与TLR4/NF-κB信号通路的激活有关,与Notchl信号通路无关.杨孟雪,甘华,沈清 - 中南大学学报(医学版)文章来源： 万方数据 -
激活 PPARα表达对 AngⅡ诱导的心肌细胞肥大及NFATc4与 p65-NFκB 相互作用的影响
目的:研究PPARα激动剂非诺贝特( fenofibrate )对血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的影响及机制。方法:在AngⅡ诱导的心肌细胞肥大模型中加入非诺贝特(10μmol/L)预处理1 h后,采用real-time PCR检测肥大标志物ANF、BNP和β-MHC mRNA水平变化,Western blotting检测NFATc4和p65-NFκB核转位的变化,免疫共沉淀检测心肌细胞核内p65-NFκB与NFATc4之间的相互作用, EMSA检测NFATc4在BNP启动子上DNA结合活性的变化。结果:非诺贝特可显著抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。非诺贝特可抑制AngⅡ诱导的NFATc4和p65-NFκB的入核,以及两者在核内的相互作用。非诺贝特可抑制AngⅡ诱导的NFATc4在BNP启动子上DNA结合活性的增加。结论:非诺贝特可增强心肌细胞核内PPARα与NFATc4之间的相互作用,并减弱p65-NFκB与NFATc4之间的相互结合,进而降低NFATc4在BNP启动子上的DNA结合活性,这可能是其抑制AngⅡ诱导的心肌肥大的重要机制。- 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
生长抑素对内毒素致小鼠急性肺损伤中炎症反应的影响和机制
目的 探讨生长抑素(SST)对内毒素致急性肺损伤(ALI)小鼠炎症反应的影响及其机制.方法 将72只SPF级雄性ICR小鼠按随机数字表法分为对照组、SST对照组、模型组和SST干预组,每组18只.采用腹腔注射内毒素40 mL/kg制备ALI模型,对照组则给予等量生理盐水;SST干预组于制模后0.5、2、6、12h皮下注射SST(20 μg,20 mL/kg).各组于首次给药后3、8、16h分别取6只小鼠取血后活杀,用烘干法测定肺组织湿/干质量(W/D)比值;光镜下观察肺组织病理学改变;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清SST、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、IL-10)的含量;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质免疫印迹试验(Westem Blot)检测肺组织Toll样受体4(TLR4)和核转录因子-κBp65(NF-κBp65)的mRNA及蛋白表达.结果 对照组与SST对照组小鼠各指标比较差异均无统计学意义.与对照组比较,模型组肺组织W/D比值,血清SST、TNF-α、IL-6、IL-10水平,肺组织TLR4、NF-κBp65的mRNA及蛋白表达均明显升高,其中W/D比值、IL-6、IL-10及TLR4的mRNA和蛋白表达均于16h达峰值[W/D比值:6.32±0.18比4.14±0.14,IL-6(ng/L):673.78±56.13比50.17±7.06,IL-10(ng/L):481.13±40.78比61.71±10.05,TLR4 mRNA:0.740±0.099比0.183±0.021,TLR4蛋白:0.935±0.067比0.222±0.019,均P< 0.05],SST、TNF-α及NF-κBp65的mRNA和蛋白表达均于8h达峰值[SST(ng/L):254.97±38.75比95.87±13.95,TNF-α(ng/L):139.69±19.06比21.90±4.52,NF-κBp65 mRNA:0.753±0.065比0.208±0.029,NF-κBp65蛋白:1.214±0.079比0.303±0.067,均P<0.05].与模型组比较,SST干预组小鼠肺组织损伤程度明显减轻,除血清SST呈持续增加趋势外,其余指标均明显降低[16 h W/D比值:5.21±0.14比6.32±0.18,8 h TNF-α(ng/L):80.48±8.52比139.69±19.06,16 h IL-6(ng/L):394.99±37.17比673.78 ±56.13,16 h IL-10(ng/L):326.95±36.41比481.13±40.78,16 hTLR4 mRNA:0.240±0.028比0.740±0.099,16 h TLR4蛋白:0.618±0.066比0.935±0.067,8 h NF-κBp65mRNA:0.240±0.045比0.753±0.065,8 h NF-κBp65蛋白:0.784±0.041比1.214±0.079,均P<0.05].结论 SST干预后对内毒素诱导的ALI小鼠炎症因子释放及组织因子基因、蛋白表达均起到明显的抑制作用;其机制可能是通过阻断TLR4-NF-κB信号通路,从而减轻肺组织炎症反应.徐丽艳,刘瑶,韩文文,南超,李冬,洪广亮,赵光举,卢中秋 - 中华危重病急救医学文章来源： 万方数据 -
LASS2/TMSG-1基因沉默对人前列腺癌细胞生物学功能的影响及其机制
目的 探讨LASS2/TMSG-1基因沉默对PC-3M-2B4细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制.方法 将实验分为3组:空白对照组(仅转染PBS的PC-3M-2B4细胞)、无关阴性对照siRNA组及LASS2/TMSG-1 siRNA转染组.首先针对LASS2/TMSG-1基因,设计并合成siRNA;在脂质体介导下瞬时转染人前列腺癌PC-3M-2B4细胞24h后分别采用Western blot 和RT-PCR技术检测细胞内LASS2/TMSG-1蛋白及ATP6L mRNA表达水平;使用BCECF AM H+敏感荧光探针检测转染24、36、48、96 h后3组细胞的细胞内H+浓度;用MTT法检测细胞增殖;划痕修复实验和Transwell体外侵袭实验分别检测PC-3M-2B4细胞的迁移和侵袭能力.结果 转染LASS2/TMSG-1 siRNA 24 h后,LASS2/TMSG-1 siRNA组LASS2/TMSG-1蛋白表达与对照组相比下降65%,ATP6L mRNA表达水平与对照组比较提高75%.通过BCECF AM荧光探针检测LASS2/TMSG-1 siR-NA转染组细胞内H+浓度明显下降,且与空白对照组及无关阴性对照siRNA组相比,差异有统计学意义(P<0.05).MTT法检测显示,PC-3M-2B4细胞在转染24、48 h后,3组细胞生长速度无明显差异(P>0.05);转染72 h后LASS2/TMSG-1 siRNA转染组细胞生长速度明显升高,与空白对照组、无关阴性对照siRNA组比较,差异均有统计学意义(P均<0.05).划痕修复试验和Transwell体外侵袭实验显示,转染LASS2/TMSG-1 siRNA 24 h后,与空白对照组及无关阴性对照siRNA组相比,能显著促进细胞迁移和侵袭能力(P<0.05).结论 体外合成的siRNA能有效沉默LASS2/TMSG-1基因表达,同时上调V-ATPase质子泵中关键性亚基—ATP6L mRNA的表达水平,且基因沉默后其细胞内H+浓度下降,提示LASS2/TMSG-1基因可能与ATP6L相互作用、共同参与对细胞内pH值的影响,导致肿瘤细胞内外微环境的改变并影响肿瘤细胞的生物学行为,如增殖、迁移及侵袭能力.徐晓艳 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
猪甲状腺激素应答基因SPOTl4(THRSP)的原核表达及其融合蛋白的亲和纯化
甲状腺激素应答基因(thyroid hormone responsive SPOTl4,THR5P)是受甲状腺激素诱导表达的核内基因,参与脂肪合成代谢途径限速酶的转录调控,对动物脂肪生成具有重要的调控作用.为进一步研究猪SPOTl4基因所编码蛋白质的生物学功能,本实验将猪SPOTl4(GenBank登录号:JF951726)的ORF片段与表达载体pET一280ff+)进行重组,获得的重组子pET一280ff+).S14,转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)感受态细胞,重组菌经IPTG诱导,通过SDS.PAGE分析显示,目的蛋白分子量约为20.91kD,且主要以包涵体形式存在,最佳诱导条件是37℃1mmol/LIPTG诱导5h.将获得的包涵体用6xHisNi-NTA纯化柱纯化后,采用Westemblot进一步检测到了21kD目的蛋白的表达.重组质粒pET.280L(+)一S14在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地得到了表达,不仅为SPOTl4基因生物学功能的研究,而且为进一步研究S14蛋白功能,了解脂肪代谢调控机制提供了基础资料.王丛梅,郭豫杰,李宏基,韩立强,李奎,杨国宇 - 农业生物技术学报文章来源： 万方数据 -
介质阻挡等离子体放电辅助CuO/CeO2-TiO2/γ-Al2O3催化剂脱除NO的研究
在介质阻挡等离子体放电(DBD)辅助催化剂(6%CuO/15%TiO2/γ-Al2O3,6%CuO/5%CeO2/15%TiO2/γ-Al2O3)反应装置上,研究了4种不同反应条件下(NO+CH4,NO+CH4+O2,NO+CH4+NTP,NO+CH4+O2+NTP)NO和CH4反应,采用BET、XRD、H2-TPR和XPS等手段对催化剂进行了表征.结果表明在上述4种反应条件下,对于NO+CH4的反应,O2的存在有利于NO脱除,在等离子体条件下,O2的加入对NO的转化有所抑制;而等离子体的活化极大增强了NO的低温脱除活性.在等离子体存在条件下,6%CuO/5%CeO2/15%TiO2/γ-Al2O3(6Cu5Ce15TA)对NO的转化率都优于6%CuO/15%TiO2/γ-Al2O3(6Cu15TA).BET结果显示添加TiO2和CeO2于γ-Al2O3表面后,比表面积都有少量降低;而各载体负载6%CuO后比表面积也有所下降.XRD结果表明6Cu15TA和6Cu5Ce15TA催化剂由锐钛矿相TiO2组成,CuO在各催化剂表面呈现高度分散.H2-TPR数据和XPS实验结果显示负载CuO后,催化剂表面的铜物种由高度分散的CuO和嵌入到CeO2或TiO2晶格中Cu2+所组成.6Cu5Ce15TA表面含有较6Cu15TA多的Cu+,从而增强了NO的脱除活性.李惠娟,蒋晓原,郑小明 - 分子催化文章来源： 万方数据 -
胃癌中S100A4蛋白过表达的临床病理学意义
目的 分析胃癌中S100A4蛋白的表达及其与临床病理因素和预后的关系,探讨其在胃癌侵袭转移过程中的作用及判断预后的价值.方法 收集31例癌旁组织、38例鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma, SCC)和77例腺癌,应用组织芯片和免疫组化法检测S100A4蛋白在上述组织中的表达.结果 S100A4蛋白在28例癌旁组织中呈阴性,个别组织中基底部呈弱阳性,而在胃SCC和腺癌中高表达,阳性率分别为81.6%(31/38)和58.4%(45/77),S100A4蛋白表达与胃SCC和腺癌显著相关(P〈0.01).同时,胃癌中S100A4蛋白表达与TNM分期显著相关(P〈0.05).S100A4蛋白高表达明显影响胃癌患者的预后,且S100A4高表达胃癌患者的预后明显差于S100A4低表达胃癌患者.结论 S100A4蛋白在胃SCC和腺癌中高表达,可作为其早期诊断和预后评判的指标.续云洁,朴俊杰,林贞花,刘双萍 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
Sombati细胞模型中Toll样受体4的表达及意义
目的:研究Sombati细胞模型中神经元Toll样受体4(TLR4)表达变化,探讨TLR4在Sombati癫痫细胞发病过程中的意义.方法:将新生SD乳鼠海马神经元进行体外培养至第9天,随机分为对照组和Sombati细胞模型组,分别检测TLR4蛋白及TLR4mRNA的表达.结果:免疫组化结果显示Sombati细胞TLR4蛋白表达增强,荧光定量PCR显示Sombati细胞组TLR4 mRNA表达增加(P<0.05),且随时间的延长而增强.结论:Sombati细胞模型中TLR4mRNA与蛋白表达均增加,可能与癫痫的发病有关.李偲俊,吴原,黄金山,叶洁梅,韦兴,刘夕霞 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
孟鲁司特对毛细支气管炎患儿血清白三烯D4和尿白三烯E4水平的影响
目的:探讨孟鲁司特对毛细支气管炎患儿血清白三烯D4和尿白三烯E4水平的影响.方法:选择毛细支气管炎患儿72例,随机分为实验组和对照组各36例.两组患儿均予以止咳化痰、解痉平喘和抗病毒等常规治疗,实验组在此基础上加用孟鲁司特咀嚼片2.5 mg,每天1次,连用7 d,比较两组患儿治疗前后血清白三烯D4和尿白三烯E4水平的变化,并进行临床疗效及安全性分析.结果:治疗7 d后,两组患儿血清白三烯D4和尿白三烯E4水平均较治疗前均明显下降(P<0.05或P<0.01),且实验组下降比对照组更明显,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);实验组患儿临床总有效率94.44%,明显高于对照组的75.00%(χ2=5.26,P<0.05);对照组和实验组患儿治疗期间分别出现不良反应2例和4例(χ2=0.18,P>0.05),症状较轻,未出现严重药物不良反应.结论:孟鲁司特治疗婴幼儿毛细支气管炎疗效确切,安全性较佳,作用机制与降低血清白三烯D4和尿白三烯E4水平,减少白三烯的释放密切相关.张慧君,杨海龙 - 儿科药学杂志文章来源： 万方数据
科创中国
