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靶向ER-α36的vshRNA真核表达慢病毒载体的构建、鉴定及其对胃癌细胞增殖的影响

目的:针对雌激素受体( ER)-α36基因的特异性靶序列,构建并鉴定靶向ER-α36基因RNAi慢病毒载体,研究ER-α36沉默后对胃癌细胞增殖的影响。方法:筛选确定的ER-α36基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,与慢病毒载体(GV307)连接,测序鉴定。转染293T细胞,包装产生慢病毒,感染胃癌SGC7901细胞株。荧光显微镜下观察SGC7901感染后荧光表达情况,real-time PCR和Western blotting方法检测ER-α36的表达变化。用1×10-10 mol/L的17β-雌二醇处理沉默ER-α36的SGC7901细胞,用细胞计数法观察细胞增殖能力的变化及检测相关下游信号通路分子Src、ERK1/2、cyclin D1表达的变化。结果:阳性克隆PCR及测序证明成功构建慢病毒载体LV-ER-α36-RNAi,倒置显微镜下观察LV-ER-α36-RNAi慢病毒载体感染率达80%以上。 Real-time PCR和Western blotting方法证实四环素( TeT)诱导下LV-ER-α36-RNAi明显抑制SGC7901细胞内ER-α36 mRNA和蛋白质的表达。与对照组相比,沉默ER-α36的SGC7901细胞增殖能力减弱,Src、ERK1/2、cyclin D1蛋白表达明显降低,Src蛋白活化能力减弱( P<0.05)。结论:我们构建的TeT诱导靶向ER-α36的vshRNA慢病毒载体LV-ER-α36-RNAi,可明显沉默ER-α36的表达,为研究ER-α36蛋白的作用机理提供实验依据,ER-α36与胃癌细胞等肿瘤细胞的增殖有关。

王绪明,黄萱,付政祺,邹丰,张尚昆,王兆一,刘丽江 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

转录因子 CDX2过表达对人胃癌 SGC-7901细胞增殖和细胞周期的影响

目的:探索CDX2过表达对人胃癌SGC-7901细胞增殖、生长和细胞周期的影响及其分子机制。方法:采用携带CDX2基因的重组慢病毒颗粒( LV-CDX2-GFP)感染SGC-7901细胞,作为实验组( LV-CDX2-GFP组);以对照慢病毒颗粒( LV-GFP)感染SGC-7901细胞,作为阴性对照组( LV-GFP组);空白对照组常规培养,不做任何处理。分别采用CCK-8法检测细胞的增殖活力,流式细胞术检测各组细胞周期的分布,半定量逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)和Western blotting 技术检测细胞中CDX2、Bax、Bcl-2、cyclin D1和survivin mRNA和蛋白的表达。结果:与LV-GFP组和空白对照组比较,LV-CDX2-GFP组细胞增殖活力明显降低(P<0.05),G0/G1期所占比例上升(P<0.05),Bcl-2、cyclin D1和survivin mRNA和蛋白的表达降低(P<0.05),Bax mRNA和蛋白的表达上调(P<0.05),而LV-GFP组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:慢病毒介导的CDX2过表达抑制胃癌细胞增殖和生长,使细胞周期停滞在G0/G1期,其机制可能与CDX2过表达使胃癌细胞Bcl-2、cyclin D1、survivin表达下调和Bax表达上调有关。

曹稳珑,韦尉元,张笑石,罗文,严林海,谢玉波,肖强 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

慢病毒介导的GOLPH3基因沉默对人胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的:通过体外实验探讨沉默高尔基体磷蛋白3(Golgi phosphoprotein 3,GOLPH3)基因对胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响.方法:将携带GOLPH3 shRNA的慢病毒载体转染SGC-7901细胞,建立稳定沉默GOLPH3的细胞株LV-GOLPH3-RNAi,分别用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测GOLPH3 mRNA和蛋白的表达.MTT法检测细胞增殖力,Transwell迁移和侵袭实验分别检测细胞的迁移力和侵袭力.结果:稳定沉默GOLPH3的细胞株构建成功;GOLPH3 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05).与scrambled组和空白对照组相比,转染后LV-GOLPH3-RNAi组细胞的增殖力受到抑制(P<0.05),迁移力(56.7±1.5vs186.0±3.4、183.3 ±4.2,P<0.05)和侵袭力(33.5 ±3.0vs85.0±3.9、83.1 ±4.4,P<0.05)也明显受到抑制.结论:沉默GOLPH3基因的表达可抑制人胃癌SGC-7901细胞的增殖力、迁移力和侵袭力,提示GOLPH3有可能成为潜在的肿瘤标志物和独立的预后因子.

苏婷,赖铭裕,农云翠 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

79例毛细胞肿瘤的组织学分类及临床病理分析

目的观察中间型毛细胞黏液样肿瘤(intermediate pilomyxoid tumor,IPMT)、毛细胞黏液样星形细胞瘤(pilomyxoid astrocytoma,PMA)和毛细胞星形细胞瘤(pilocytic astrocytoma,PA)的临床病理学特征.方法回顾性分析79例毛细胞肿瘤,按照WHO(2007)中枢神经系统肿瘤分类标准重新诊断,结合其临床病理学特征进行对比分析.结果 67例为典型PA,1例为典型PMA,11例为IPMT.男性患者均多于女性,IPMT患者平均年龄大于PMA,明显小于PA,三者病变部位相似.镜检:PMA由形态单一的双极梭形细胞以血管为中心生长,间质内见大量黏液,未见Rosenthal纤维或嗜酸性颗粒小体;PA均可见Rosenthal纤维和嗜酸性颗粒小体;IPMT则具有PMA的大量黏液,形态单一的双极小肿瘤细胞且呈假菊形团样生长,具有PA的Rosenthal纤维和嗜酸性颗粒小体特征,可见多量微囊.三者均可复发.结论 IPMT确实存在且数量不少,PA、PMA和IPMT在组织学上有联系.

马小梅,余宏宇,刘惠敏,夏春燕,黄佳,何金,杨慧玲,刘胜楠 - 临床与实验病理学杂志

文章来源：万方数据

膜联蛋白A2对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的:研究膜联蛋白A2(annexin A2,ANXA2)对人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响.方法:以HeLa细胞为研究对象,构建过表达载体以及ANXA2-siRNA,转染入细胞.将细胞分为正常对照组、scrambled组、ANXA2过表达组及ANXA2-siRNA组.应用real-time PCR法检测ANXA2 mRNA表达水平及Western blotting检测ANXA2蛋白表达水平.分别采用MTT法、Boyden小室法和流式细胞术观察ANXA2对HeLa细胞增殖、迁移及凋亡能力的影响.结果:ANXA2过表达组可以显著促进HeLa细胞的增殖和迁移;ANXA2-siRNA组明显抑制HeLa细胞的增殖和迁移;ANXA2对HeLa细胞凋亡几乎无影响.结论:沉默ANXA2对人宫颈癌细胞的凋亡无显著影响,但可显著抑制其增殖能力和迁移能力.ANXA2可能在宫颈癌的发生发展中具有十分重要的作用,提示它有可能成为宫颈癌治疗的分子靶点.

魏建勋,马文君,李红梅 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

原发性肝细胞癌中干细胞标志物的表达与上皮细胞-间质转化的关系

目的探讨原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中肝干细胞标志物的表达及其与上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系.方法采用免疫组化法检测72例HCC中肝干细胞标志物CK19、EpCAM、CD133、CD90的表达及其与EMT相关蛋白E-cadherin、vimentin和Snail的关系.结果 HCC组织中CK19、EpCAM、CD133、CD90阳性率分别为31.9%(23/72)、40.3% (29/72)、51.4% (37/72)、41.7%(30/72),有镜下癌栓和门静脉癌栓组中CK19、EpCAM、CD133、CD90阳性率均高于无镜下癌栓和无门静脉癌栓组,Ⅲ+Ⅳ期、肿瘤数目多发的HCC中EpCAM、CD133、CD90阳性率高于Ⅰ+Ⅱ期和单发的HCC;<46岁、组织学Ⅲ+Ⅳ级、血清AFP≥350 ng/ml的HCC中CK19阳性率高于其相应对照组.E-cadherin与其余两种EMT标志物均呈负相关(vimentin:r=-0.572,P=0.004;Snail:r=-0.597,P=0.003),CK19、Ep-CAM、CD90阳性HCC组中vimentin阳性强度均高于阴性组,CD133阳性HCC组中E-cadherin阳性强度低于CD133阴性组,vimentin、Snail阳性强度均高于CD133阴性组.结论与CK19、EpCAM、CD90相比,CD133阳性的肝癌干细胞与EMT的关系更加密切,CD133可作为同时针对HCC肝干细胞和EMT的治疗靶点.

徐军,胡勇,王健,王星星,程兰兰,余宏宇 - 临床与实验病理学杂志

文章来源：万方数据

积雪草免疫抑制活性成分的分离纯化及效应研究

目的:对积雪草的免疫抑制活性成分进行分离、纯化及鉴定,并观察其对小鼠脾淋巴细胞增殖和凋亡的影响,探讨其免疫调节机制。方法:利用半制备型液相色谱对积雪草提取物进一步分离和纯化。运用流式细胞术观察积雪草活性成分对脾淋巴细胞凋亡和线粒体膜电位的影响。利用紫外光谱、电喷雾电离负离子模式质谱、[1 H ]核磁共振( NMR)、[13 C] NMR等数据鉴定所得活性成分结构。结果:(1)所得积雪草活性成分化合物Ⅰ、Ⅱ的分子量分别为302和286。(2)积雪草中化合物Ⅰ、Ⅱ能显著抑制小鼠脾淋巴细胞增殖。(3)积雪草中化合物Ⅰ、Ⅱ能促进小鼠脾淋巴细胞凋亡,降低线粒体膜电位。(4)[1H] NMR和[13C] NMR鉴定化合物Ⅰ、Ⅱ分别为槲皮素和山奈酚。结论:从积雪草中提取获得的黄酮化合物Ⅰ、Ⅱ分别为槲皮素及山奈酚,具有抑制小鼠脾淋巴细胞增殖的效应,其作用途径可能是促进脾淋巴细胞凋亡并降低线粒体膜电位。

- 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

胰岛素抗性对肝癌HepG2细胞生物学功能及顺铂敏感性的影响

目的:研究胰岛素抗性在原发性肝癌细胞中的生物学功能及对顺铂抗癌药物的抗药敏感性的影响。方法:利用高浓度的胰岛素连续培养HepG2细胞72 h获得抗胰岛素的HepG2细胞( HepG2/IR),检测HepG2/IR细胞的黏附、迁移和侵袭的能力改变以及对顺铂的敏感性;同时利用流式细胞术测定HepG2和HepG2/IR中胰岛素受体和葡萄糖转运蛋白2的表达情况。结果:胰岛素抗性HepG2/IR细胞中葡萄糖消耗量显著降低;胰岛素受体和葡萄糖转运蛋白2表达下调;而HepG2/IR细胞的黏附、迁移和侵袭能力明显增强;同时HepG2/IR细胞对顺铂的敏感性降低;但用吡格列酮处理HepG2/IR细胞后其黏附、迁移和侵袭能力显著减弱。结论:胰岛素抗性与HepG2细胞的耐药性、细胞黏附、迁移和侵袭能力密切相关。这有助于解释具有胰岛素抗性的癌症患者对化疗失敏的临床现象。

刘鹏,黄美松,胡阳黔 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

白藜芦醇对视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对视网膜色素上皮细胞增殖的影响,并初步探讨其作用机制.方法:用0、50、100、150、200和300μmol/L Res作用于ARPE-19细胞24、48和72 h后,CCK-8法检测Res对ARPE-19细胞增殖的影响,0、100、150和200μmol/L Res作用ARPE-19细胞48 h,PI单染流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光化学法检测PCNA蛋白表达,实时荧光定量PCR(real-time PCR)法检测PCNA、P21和P27的mRNA表达水平.结果:CCK-8结果显示,Res抑制ARPE-19细胞增殖,呈时间和剂量依赖性;流式细胞术显示,Res使S期细胞百分比显著上升且各组凋亡率没有区别;免疫荧光显示,Res抑制PCNA蛋白表达,荧光减弱;real-time PCR显示,Res浓度依赖性地抑制PCNA的mRNA表达,而诱导表达P21和P27的mRNA.结论:Res能抑制ARPE-19细胞的增殖,使细胞阻滞在S期,其机制可能与白藜芦醇诱导P21与P27的mRNA表达、抑制PCNA的mRNA表达有关.

王雯婕,陈剑,刘小勇,曲艺欣,周清,袁晟辰,郝晓宁 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

碲化镉量子点对 A549细胞的毒性研究

目的:探讨碲化镉(CdTe)量子点的生物安全性。方法以水热法制备的、巯基丁二酸(MSA)包被的 CdTe 量子点为研究对象,作用于体外培养的 A549细胞。实验设立对照组和不同浓度 CdTe 量子点作用组。CdTe 量子点作用于细胞后,采用倒置荧光显微镜观察量子点作用下的细胞形态;使用 alamar Blue 检测 CdTe 量子点对细胞存活率的影响;使用Hoechst 33342单染法观察 CdTe 量子点对 A549细胞核形态的影响;使用 Annexin V - FITC 单染法检测 CdTe 量子点对 A549细胞凋亡的影响。结果 CdTe 量子点作用后,低浓度(2.5,5,10 mg / L)实验组细胞变化不明显,高浓度实验组(25,50 mg / L)中的细胞肿胀变圆,细胞数量减少;存活率显著下降;在染色下可见明显的细胞凋亡。结论 MSA 包被的 CdTe 量子点在达到一定浓度后对 A549细胞有较强的毒性。这可能与量子点的纳米特性、CdTe 的金属化合物毒性有关。

- 现代中西医结合杂志

文章来源：万方数据