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p16基因表达与基底细胞样三阴乳腺癌关系
基底细胞样乳腺癌(basallikebreastcarcinoma,BLBC)占全部乳腺癌的7.5%~36.7%,由于表达基底细胞标志的肿瘤具有更加侵袭的临床行为,近年来受到广泛关注.BLBC的免疫表型为ER、PR、Her-2(-)、CK5/6(+)和(或)EGFR(+).然而,目前对于该疾病的分子机制仍不清楚,尚缺乏有效的治疗策略.p16基因是直接作用于细胞周期,诱导G1-S期停滞,抑制细胞分裂的抑癌基因,陈瑚,余英豪 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
p16^INK4a胁对抗功能失调端粒诱发的ATR依赖型DNA损伤反应
功能失调的端粒通过激活p53-p21和p16INK4a-Rb依赖的DNA损伤反应(DNAdamageresponses,DDRs)而限制细胞增殖能力.作为细胞衰老的一个生物标志物,p16^INK4a肿瘤抑制蛋白在老化组织中的积累,并限制体内干细胞的功能.尽管已有研究在人类细胞和小鼠模型中证实功能失调端粒能够激活p53依赖的DDR,p16ⅢKh对端粒功能障碍的作用仍不清楚.Wang等制造了端粒1b受保护的p16-/- 小鼠(Pot1b;p16-/-),研究在体内端粒功能障碍情况下p16^INK4a的功能.他们发现p16^INK4a缺失会加速器官损伤,并观察到高增殖器官(包括造血系统、小肠和睾丸)功能缺陷.在Pot1b△/△;p16-/-造血细胞中还可以看到端粒丢失增多、染色体融合增强和端粒复制缺陷.p16^INK4a缺失增强了p16^INK4a造血细胞中ATR(ataxia.telangieetasia.muta.tedandRad3-relatedprotein)依赖型DDR的活化,从而导致p53蛋白稳定性增强、p21依赖型细胞周期停滞增多和p53依赖性细胞凋亡增加.与p16^INK4a缺失的作用相反,p21缺失并没有激活ATR,反而缓解了Pot1b讹造血细胞的增殖缺陷,并显著延长机体寿命.该研究证实了p16^INK4a对携带功能失调端粒的增殖细胞具有保护作用.- 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
细胞块p16联合高危型HPV检测在ASCUS患者分流管理中的作用
目的 探讨细胞块p16联合高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus,HR-HPV)检测在未明确意义的非典型鳞状上皮(atypical squamous cell of undetermined significance,ASCUS)患者分流管理中的作用.方法 选取108例子宫颈液基细胞学诊断为ASCUS的病例,同时行HR-HPV杂交捕获法Ⅱ(hybrid capture 2,HC2)检测及免疫组化p16染色,均行阴道镜下活检.结果 (1)p16表达率和HR-HPV检出率在炎症组、湿疣/CIN1、CIN2、CIN3组中分别为12.5% (6/48)和31.25%(15/48)、60.53% (23/38)和84.21% (21/38),84.62% (11/13)和92.31%(12/13)、100% (9/9)和100% (9/9),组间差异有统计学意义(P<0.001);湿疣/CIN1组与CIN2/3组间p16表达率分别为60.53% (23/38)、90.91% (20/22),差异有统计学意义(P<0.0125).(2)p16联合HR-HPV检测、单纯行p16和HR-HPV检测在ASCUS中分流子宫颈病变的敏感性和阴性预测值分别为98.33% (59/60)、71.67% (43/60)、88.33% (53/60),97.06% (33/34)、71.19% (42/59)、82.5% (33/40),差异均有统计学意义(P<0.05).p16 +/HC2+者高级别病变检出率(44.19%,19/43)与p16-/HC2+者(8%,2/25)比较差异有统计学意义(P <0.001).结论 p16蛋白可以作为一种辅助诊断CIN的免疫组化标志物.细胞块p16联合HR-HPV检测可以有效分流ASCUS中的子宫颈病变患者.戈文舜,任丽芳,李美平,蔡红光,杨惠英,张鹏,鲁波,包磊 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
p16及HPV分型检测在子宫颈黏液腺癌伴双侧卵巢转移中的诊断价值
目的 探讨联合使用免疫组化标记p16及HPV分型检测在诊断和鉴别诊断子宫颈黏液腺癌伴双侧卵巢转移中的诊断价值.方法 分析3例子宫颈黏液腺癌伴双侧卵巢转移的临床病理学特征,对子宫颈及卵巢的癌灶进行含p16在内的多个免疫组化标志物染色及HPV分型检测.结果 3例患者的子宫颈均有不同程度的肥大、糜烂及肿块,双侧卵巢增大,切面有黏液感伴出血、坏死;镜下可见子宫颈腺癌周围有不典型增生的子宫颈管腺上皮,与腺癌移行过渡,可见癌栓,腺癌几乎侵及子宫颈全层;双侧卵巢纤维增生明显,腺癌穿插其中.颈体交界、子宫内膜、输卵管黏膜、阴道手术切缘等查见癌累及.3例子宫颈及卵巢癌灶的免疫表型基本一致,均强阳性表达p16、CK7和Ki-67,HPV亚型分型检测阳性结果如下.子宫颈/卵巢:例1,16、18/16、18、58;例2,16、18/18;例3,16/18.根据p16的表达及HPV分型检测结果,提示3例均为子宫颈黏液腺癌伴双侧卵巢转移.结论 子宫颈黏液腺癌伴双侧卵巢转移属于晚期子宫颈癌.借助p16的表达及HPV亚型的分型检测结果可诊断及鉴别诊断肿瘤的原发部位,有利于肿瘤的后期治疗.沈扬眉,何英,徐炼,魏晓霞,赵霞 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
IPO8基因启动子区rs35100176位点变异对基因表达的影响
目的:研究人importin 8( IPO8)基因启动子区rs35100176多态性位点CCT插入/缺失对基因表达的影响。方法:PCR扩增IPO8基因启动子区包含rs35100176多态位点的342 bp序列,通过测序获得了49例DNA样本的基因多态性分布。以CCT/CCT插入纯合子或-/-缺失纯合子DNA样本为模板,扩增含有不同插入/缺失序列的IPO8基因启动子片段,插入萤光素酶报告质粒pGL3-Basic,构建pGL3-3N Insertion和pGL3-3N Deletion重组表达载体。重组质粒经Fugene 6.0转染入细胞,采用双萤光素酶报告系统,检测携带不同多态性序列的重组质粒中报告基因的表达活性;real-time PCR 检测各不同基因型细胞中 IPO8 mRNA 表达。结果:通过测序发现rs35100176多态位点存在 CCT/CCT、CCT/-和-/-3种表型,其基因分布频率分别为18.37%、55.10%和26.53%。成功构建pGL3-3N Insertion和pGL3-3N Deletion重组表达载体。双萤光素酶报告基因活性检测结果显示,pGL3-3N Insertion启动下游报告基因表达的相对活性与pGL3-3N Deletion 相比显著减弱,两者存在显著差异(P<0.05);real-time PCR结果显示,CCT纯合插入的HEK293细胞中IPO8 mRNA的表达显著低于CCT纯合缺失的Saos-2细胞。结论:IPO8基因启动子区rs35100176位点的CCT碱基插入变异能显著抑制启动子活性,从而影响IPO8基因的转录。熊建军,江和,许晓源,周小鸥,王庭,李卫东 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
人类mtDNA D-Loop区位点变异对基因表达的影响
Case-Control研究表明,人线粒体基因(mtDNA) D-Loop区mt235、mt514-515、mt16183、mt16290和mt16319多态位点与有氧运动能力有关.拟从下游基因表达做进一步的研究,以探讨上述多态位点的分子调控机理.方法:采用全基因组合成法合成包含上述多态位点的DNA序列,分别连接到pGL3-promoter载体构建重组质粒,将重组质粒转染至293T细胞,观察携带5对mtDNA质粒对下游双荧光素酶报告基因的表达及荧光素酶mR-NA表达的影响.结果:携带mt235A、mt514-515CA、mt16183A和mt16319G的载体转染细胞的双荧光素酶基因表达量显著高于mt235G、mt514-515Del、mt16183C和mt16319A(P<0.01);携带mt16290两种基因型的质粒转染细胞报告基因表达没有明显差异.与pGL3-promoter载体相比,携带mt16319A的质粒转染细胞荧光素酶mRNA极显著下降(P<0.01),携带mt16290位点的两种质粒对报告基因mRNA的影响没有差异.结论:mt235、mt514-515、mt16183和mt16319多态位点影响荧光素酶基因表达,mt235A、mt514-515CA和mt16183A上调基因转录和翻译,mt16319A下调基因转录.这些基因表达上的差异可能是影响人有氧运动能力的重要调控因素.龚丽景,胡扬,李燕春,梅涛 - 体育科学文章来源： 万方数据 -
外阴基底细胞癌:高危型人乳头瘤病毒DNA检测、p16和BerEP4表达
外阴恶性肿瘤中基底细胞样鳞状细胞癌(SCC)占绝大部分,基底细胞样SCC与高危型HPV感染有关.外阴基底细胞癌(BCC)少见,目前BCCs的HPV状态尚未明确.由于外阴BCC组织学特征与基底细胞样SCC具有部分重叠,如巢状分布、一致性基底细胞样细胞和鳞化区域,因此二者易混淆.由于两种肿瘤手术范围和预后不同,其鉴别非常重要.本组对13例外阴BCC进行p16和BerEP4免疫组化表Elwood H,Kim J,Yemelyanova A,李慧明,余英豪 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
p110δ突变失活的 ApcMin/+结直肠癌癌前病变小鼠模型的建立
目的:建立p110δ突变失活的ApcMin/+结直肠癌癌前病变小鼠模型,为研究p110δ在小鼠结直肠癌癌前病变中的作用提供实验模型。方法:将C57BL/6J背景的ApcMin/+结直肠癌癌前病变小鼠与p110δ突变失活小鼠(p110δD910A/D910A)进行杂交建系,通过PCR技术鉴定子代小鼠基因型,获得p110δ突变失活的ApcMin/+小鼠。对适龄小鼠进行肠道取材,亚甲蓝染色后,观察肠道结构,对腺瘤和微腺瘤进行统计。肠道组织进行石蜡包埋、切片,做HE染色进行进一步观察。结果:获得p110δ突变失活的ApcMin/+杂交鼠( ApcMin/+;p110δD910A/D910A )并得以稳定传代。 ApcMin/+;p110δD910A/D910A杂交小鼠的肠道组织中,腺瘤数目和体积比ApcMin/+结直肠癌癌前病变小鼠均有减少。结论:成功建立p110δ突变失活的ApcMin/+结直肠癌癌前病变小鼠模型,并得到小鼠肠道肿瘤的初步表型,为进一步研究p110δ在肠道肿瘤发生发展中的作用提供重要的工具动物。胡曦文,章倩倩,雷岩,刘红英,周大磊,陈佳园,王丽京 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
绵羊肺炎支原体标准株Y98外膜蛋白MOP30基因真核表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达
以绵羊肺炎支原体(Mycoplasma oumvipneoniae,MO)标准株Y98基因组为模板,设计1对特异引物,PCR扩增得到798bp的P30目的基因(MOP30),将其定向克隆到pMD19-T Simple载体中进行测序分析.重组质粒进行XbaⅠ/BamHⅠ双酶切并回收目的片段,将目的基因亚克隆入黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,YFP)表达载体pCAMBIA1300-YFP中构建重组融合表达质粒pCAMBIA1300-MOP30-YFP.双酶切验证后的融合表达质粒转化农杆菌(Agrobacterium)感受态细胞,侵染烟草(tobacco)叶片.通过激光共聚焦成像显微镜(cofocal imagingmicroscope)观察到融合表达的黄色荧光蛋白,Western-blotting试验得到57 000的特异条带,RT-PCR检测到MOP30基因在烟草叶片中转录.MOP30-YFP融合蛋白在烟草中的成功表达,为转基因植物疫苗防治绵羊支原体肺炎奠定了基础.张亚宁,赵利峰,张乐祎,赵宝华 - 中国兽医学报文章来源： 万方数据 -
恙虫病东方体合肥分离株截短56 kDa蛋白抗原表达及活性分析
本文获得恙虫病东方体合肥分离株截短56 kDa外膜蛋白基因工程纯化抗原,并鉴定其免疫学活性,为进一步研制广谱诊断试剂、疫苗以及分析其在东方体致病的分子机制奠定基础.我们通过DNAStar和Mega等软件对含有440个氨基酸的合肥株56 kDa蛋白序列进行抗原性分析;将合肥株56 kDa截短蛋白基因克隆至原核表达载体pET28a获重组质粒,转入大肠杆菌E.coli BL21感受态中,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳分析检测蛋白表达;采用亲和层析法纯化目的蛋白,Western-blot及ELISA法鉴定其免疫学活性.序列分析发现合肥分离株56 kDa蛋白可分为4个保守区和3个可变区,抗原性分析结果显示,其保守区的亲水性和抗原性均有很高峰值.SDS-PAGE电泳显示约56 kDa的目的重组蛋白表达条带,Western-blot分析显示该重组蛋白可与恙虫病病人血清反应,阴性血清则未出现相应印迹,ELISA分析结果显示该蛋白最低浓度为80 ng/μL时仍可检出阳性血清;5μg/mL蛋白可检测阳性血清滴度高达1∶12 800,证实其具有较强反应原性.本实验获得恙虫病东方体合肥株56 kDa截短外膜蛋白基因工程抗原具有良好的抗原活性,有望进一步应用于恙虫病的诊断、疫苗研制及致病机制分析.耿美玲,郑峰,吕恒,朱进,胡丹,郝丽娜,张凤玉,龚秀芳,李丙军 - 寄生虫与医学昆虫学报文章来源： 万方数据
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