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基于荧光显色的IBV LAMP检测方法研究

原文链接：万方

• 作者：

  张琳,马利,丁雅苓,逯茂洋,胡北侠,杨少华,张秀美

• 摘要：

  【目的】建立基于荧光显色的可视化禽传染性支气管炎病毒（IBV）环介导等温扩增（LAMP）检测体系，为IBV的快速临床检测提供有力的技术支持。【方法】根据NCBI中收录的IBV 5a＋5b基因的8个区域设计了3对LAMP引物，通过对反应体系各组分和条件的优化，建立IBV LAMP检测方法，并对该方法的特异性和敏感性进行验证。分别用SYBR Green I和一定浓度比的钙黄绿素/锰离子混合物作为显色剂，对IBV LAMP检测结果进行可视化判定。应用该检测体系和PCR方法对临床送检的60份样品同时进行检测，比较2种方法的阳性检出率。【结果】成功建立了IBV LAMP检测方法，该方法能够在等温（63 ℃）条件下1 h内完成反应，具有良好的敏感性和特异性，最低可以检出1拷贝/μL的阳性重组质粒，比普通PCR方法敏感100倍，而对其他病毒检测结果均为阴性。应用SYBR Green I和钙黄绿素/锰离子显色时，阴阳性样品均有强烈的颜色对比，其中0.05 mmol/L钙黄绿素与0.6 mmol/L锰离子混合液可以用于LAMP扩增产物的判断，其结果与琼脂糖凝胶电泳结果一致。在对60份临床样本的检测中，LAMP和PCR方法检测出的阳性样本数量分别为49份和42份。【结论】建立了基于荧光显色的IBV LAMP检测方法，该方法具有在科研机构、基层实验室特别是检测现场推广和应用的潜力。

• 关键词：

  传染性支气管炎病毒 环介导等温扩增 荧光显色 钙黄绿素

• 作者单位：

  山东省农业科学院畜牧兽医研究所%山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室%山东农业大学动物科技学院%齐鲁制药有限公司%中国农业大学动物医学院

• 基金项目：

  现代农业产业技术体系建设专项

• 来源期刊：

  西北农林科技大学学报(自然科学版)

• 年，卷(期)：

  2012010