科创中国

检测伪狂犬病毒gB基因荧光定量PCR方法的建立

原文链接：万方

• 作者：

  朱淑芬,朱瑞良,乔彩霞,高志强,张利峰,张鹤晓,吴亚琼,王慧珊

• 摘要：

  利用DNAMAN软件对GenBank登录的伪狂犬病病毒(PRV)各毒株gB基因序列进行比对分析,选择其保守区域设计合成特异性的引物和TaqMan探针,同时利用普通PCR技术扩增获得全长的伪狂犬病毒gB基因,并克隆到pMD20-T载体上作为阳性标准品.通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了一种快速检测伪狂犬病病毒的荧光定量PCR技术.该检测技术具有较高的灵敏性、特异性和可靠性.对制备的pMD-gB阳性标准品的检测结果表明,所建立的伪狂犬病毒TaqMan荧光定量PCR最低检测极限可达1.50*102拷贝/反应;同时相比于普通PCR方法其灵敏度高100~1 000倍以上,并且重复性好.在对60份临床样品的检测中,荧光定量PCR不仅检出了普通PCR检测为阳性的样品,且检出了2份普通PCR未检出的样品,进一步证实了该方法快速、灵敏性好,可用于PRV感染的早期快速定量检测和肉类食品进出口检疫.

• 关键词：

  伪狂犬病毒 gB基因 荧光定量PCR 检测

• 作者单位：

  山东农业大学动物科技学院%北京出入境检验检疫局%青岛农业大学

• 基金项目：

  国家科技基础性工作专项"重大动物疫病病原及相关制品标准物质研究"资助项目(2008FY130100)

• 来源期刊：

  中国兽医学报

• 年，卷(期)：

  2012010