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蚜虫内共生菌基因组DNA提取方法的比较和优化

原文链接：万方

• 作者：

  宋月,樊永亮,武丽娟,张战凤,刘艳红,刘同先

• 摘要：

  为探究蚜虫共生菌基因组DNA的提取方案,以桃蚜为试验材料,比较了目前较为常用的4种蚜虫基因组DNA提取方法,从DNA纯度、完整性、PCR扩增效率及稳定性等方面进行了比较和评价,并通过调整蛋白酶K用量和水浴温度及时间对STE法进行了优化.结果表明,4种方法提取的蚜虫共生菌基因组DNA均可用于共生菌的PCR扩增检测;CTAB法和SDS法提取的DNA纯度较高,条带较完整,稳定性相对较高,不易降解,而STE法和PCR缓冲液法操作简便,适于快速提取单头蚜虫共生菌的基因组DNA,但纯度相对较低;可根据试验条件和要求进行选择.STE法优化条件为:用30μL STE缓冲液将蚜虫匀浆,加入1.5μL 20 mg/m L蛋白酶K,于56℃水浴1.5 h;再加入0.1μL 10 mg/L RNA酶,于37℃培养1 h,95℃下处理5 min,5 000 r/min离心3 min,将提取到的DNA于-20℃保存或直接用于PCR扩增.优化后的STE法可作为提取蚜虫共生菌基因组DNA经济而快捷有效的方法.

• 关键词：

  蚜虫 共生菌 DNA提取

• 作者单位：

  西北农林科技大学,西北旱区作物逆境生物学国家重点实验室,农业部西北黄土高原作物有害生物综合治理重点实验室

• 基金项目：

  国家公益性行业(农业)科研专项(20133019)%西北农林科技大学2013年校级大型仪器设备新功能开发项目

• 来源期刊：

  植物保护学报

• 年，卷(期)：

  2014006