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茎一环RT-PCR法定量miRNA-421的引物设计

原文链接：万方

• 作者：

  赵丽,杨洋,温传俊

• 摘要：

  本研究旨在通过茎一环RT-PCR法,建立有效定量miRNA421的PCR方法,探讨该方法在定量检测miRNA方面的应用价值.利用miRBase数据库获得miRNA-421的成熟序列.设计3条miRNA421特异性反转录引物,Q-PCR上游引物及通用下游引物.通过10倍梯度稀释RNA后特异性反转录,RT-PCR分析不同引物互相配对PCR的扩增曲线及熔融曲线,鉴定出特异性好、扩增效率高的引物.为进一步鉴定引物的有效性,过表达miRNA-d21,用鉴定的成熟引物定量扩增.利用茎一环RT-PCR法设计、鉴定出miRNA-421引物:421RT7、F19,且这对引物特异性好、扩增效率高.通过设计引物组合,茎一环RT-PCR法能够很好地用于miRNA定量分析,并具有准确、快速、节约成本的优点.

• 关键词：

  茎一环RT—PCR miRNA-421 引物设计 stem-loop RT-PCR miRNA-421 primers design

• 作者单位：

  南京师范大学生命科学学院分子细胞生物学研究所,江苏南京210046

• 基金项目：

  国家自然科学基金（81171913)%2008年江苏省教育厅重大项目（08KJA520001）.

• 来源期刊：

  南京师大学报(自然科学版)

• 年，卷(期)：

  201235002