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NF-κB结合元件缺失对NOX1启动子转录活性的影响

原文链接：万方

• 作者：

  吴炜景,李理,徐采云,黄文杰

• 摘要：

  目的:构建含NADPH氧化酶1(NOX1)近端启动子区的pGL3萤光素酶报告基因载体及缺失NF-κB结合元件的相应载体,分别测定其相应活性,探讨NF-κB结合元件缺失对NOX1启动子区转录活性的影响.方法:采用PCR法克隆NOX1启动子区序列(1 415 bp),将目的片段与pGL3萤光素酶载体分别双酶切、纯化后进行连接(pGL3-NOX1-1415),测序鉴定;应用Alibaba 2.1软件分析NOX1近端启动子区,获取NF-κB结合元件;重叠PCR法将含该元件的启动子区域(88 bp)缺失,并构建相应载体(pGL3-NOX1-1327).将两载体分别与pRL-TK内参质粒瞬时转染进入A549细胞,采用TNF-α(10μg/L)刺激细胞24 h,萤光酶标仪检测A549细胞的萤光素酶活性.结果:测序鉴定结果提示pGL3-NOX1-1415及NF-κB结合元件缺失的pGL3-NOX1-1327载体构建成功;细胞实验显示,TNF-α刺激后,转染pGL3-NOX1-1415的A549细胞萤光素酶活性明显强于对照组(P<0.05),而转染NF-κB结合元件缺失的pGL3-NOX1-1327的细胞萤光素酶活性明显低于转染pGL3-NOX1-1415组(P<0.05).结论:TNF-α诱导A549细胞NOX1基因活化与NF-κB密切相关,NF-κB参与了TNF-α诱导的NOX1基因启动子的转录调控.

• 关键词：

  NADPH氧化酶1 NF-κB 急性肺损伤 启动子 转录因子

• 作者单位：

  福建医科大学附属第二医院呼吸内科%广州军区广州总医院呼吸内科

• 基金项目：

  国家自然科学基金资助项目(No.81070003,NO.81370173)%国家自然青年科学基金资助项目(No.81200002)%福建省卫生厅青年科研课题资助项目(No.2013-2-51)%福建省中青年教师教育科研项目(No.JB13085)

• 来源期刊：

  中国病理生理杂志

• 年，卷(期)：

  2014010