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Ag85B慢病毒抑制人支气管上皮细胞TSLP及其受体的表达

原文链接：万方

• 作者：

  房祥峰,钱江,孟锦绣,李东风,吴健

• 摘要：

  目的:研究结核分枝杆菌抗原85B(Ag85B)慢病毒对正常人支气管上皮细胞(NHBEC)表达胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和其受体TSLPR的影响,探究Ag85B抑制哮喘气道炎症的机制.方法:将Ag85B基因重组质粒转入293T细胞,构建携带Ag85B和EGFP报告基因的慢病毒载体p LVXIRES-Neo-EGFP-Ag85B(Ag85B慢病毒).用鉴定后的Ag85B慢病毒感染HEK293细胞,计算滴度并观察感染效率.利用Lipofectamine? 2000使Ag85B慢病毒感染体外培养NHBEC,设立空病毒感染和空白对照组.Real-time PCR和Western blotting检测Ag85B、TSLP和TSLPR mRNA和蛋白表达水平.结果:成功构建Ag85B慢病毒感染NHBEC体系,Ag85B慢病毒感染NHBEC 48 h后,荧光显微镜下可见强绿色荧光蛋白表达,细胞生长状态良好,病毒滴度为2*1011TU/L,感染效率达到90%以上.Real-time PCR和Western blotting结果显示Ag85B慢病毒成功感染NHBEC,可见相应Ag85B mRNA和蛋白表达.与空病毒感染和空白对照组比较,Ag85B慢病毒感染组TSLP mRNA表达有下降趋势,TSLPR mRNA与TSLP和TSLPR的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05).结论:Ag85B慢病毒感染NHBEC可以抑制NHBEC的TSLP和TSLPR的表达,提示Ag85B可能通过靶向阻滞TSLP-TSLPR途径抑制哮喘气道炎症.

• 关键词：

  胸腺基质淋巴细胞生成素 胸腺基质淋巴细胞生成素受体 慢病毒载体 抗原85B 人支气管上皮细胞

• 作者单位：

  南方医科大学研究生学院%广东省人民医院,广东省医学科学院呼吸内科%广东省人民医院,广东省医学科学院医学研究中心

• 基金项目：

  广州市科技计划(No.2014J4100040)%广东省自然科学基金资助项目(No.S2011010003664)

• 来源期刊：

  中国病理生理杂志

• 年，卷(期)：

  2014011