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急性缺氧肺动脉平滑肌细胞线粒体活性氧变化的观察

原文链接：万方

• 作者：

  杨朝,耑冰,张丽萍,赵霞,张建银,葛利军,吴昌归

• 摘要：

  目的:观察急性缺氧时大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)线粒体活性氧(ROS)的变化.方法:分离并培养大鼠PASMCs,常氧(35℃、5%CO2、21%O2、74%N2)和急性缺氧(35℃、5%CO2、1%O2、94%N2)条件下,利用分子探针chloromethyl dichlorodihydrofluorescein diacetate(CM-H2DCF/DA)和Redox Sensor Red CC-1通过激光共聚焦显微镜来检测细胞内ROS的生成量;直接分离线粒体,用线粒体电子传递链(ETC)复合物抑制剂通过荧光分光光度计检测线粒体ROS及其生成的具体位点.结果:急性缺氧细胞内ROS生成明显增加,其中缺氧组H2O2较常氧组增加3.35倍(P<0.01),而H2O2及O-·2较常氧组增加1.61倍(P<0.01).与缺氧组比,用线粒体ETC复合物I抑制剂MPP、复合物II抑制剂NPA和TTFA及复合物III前泛半醌位点抑制剂myxothiazol都能显著降低缺氧时PASMCs胞内ROS的生成量(分别降低60%、73%、75%和61%,P<0.01);而复合物III后泛半醌位点抑制剂antimycin A及复合物IV抑制剂Na N3对ROS的生成无明显影响(升高13%和9.1%,P>0.05).直接检测线粒体ROS与测定细胞内ROS结果一致.结论:急性缺氧PASMCs线粒体ROS(主要是H2O2)的生成量明显增加;其生成位点主要是线粒体ETC复合物Ⅰ、Ⅱ及III前泛半醌位点,而与复合物III后泛半醌位点和IV位点无明显关系.

• 关键词：

  活性氧 缺氧 线粒体 肺动脉平滑肌细胞 缺氧肺血管收缩

• 作者单位：

  宁夏人民医院总院呼吸内科%宁夏人民医院心血管内科%第四军医大学西京医院呼吸内科

• 基金项目：

  国家自然科学基金资助项目(No.81160011)%宁夏回族自治区科技攻关资助项目(宁陕合作)(No.2012ZYH225)

• 来源期刊：

  中国病理生理杂志

• 年，卷(期)：

  2014011