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乙型肝炎病毒X蛋白截短突变体的构建及其对Wnt/13-catenin信号通路转录活性的影响

原文链接：万方

• 作者：

  谢青,陈林林,牵治,聂丹,段玉洁,权会琴,唐霓

• 摘要：

  目的:观察乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)截短突变体在细胞内的定位及其对Wnt/βcatenin信号通路转录活性的影响.方法:采用PCR克隆全长野生型HBx基因,在此基础上,分别构建融合增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因和缺失HBx基因C端49-154aft,、C端85-154aa、N端1-57aa+C端141~154aa、N端1-57aa或N端1-84aa截短突变体的表达载体;激光共聚焦显微镜下观察HBx截短突变体在HEK293细胞中的定位;采用萤光素酶报告系统检测HBx截短突变体对Wnt/[3-catenin信号通路转录活性的影响.结果:(1)成功构建了HBx截短突变体与EGFP基因融合的表达载体.(2)野生型HBx及截短突变体在HEK293细胞中具有不同的定位,其中N端缺失突变体主要定位于细胞核周胞质;c端缺失突变体在胞质胞核中呈均匀分布;N端+C端缺失突变体的定位类似于野生型HBx,主要定位于胞质,呈不均一的粗大颗粒,胞核中也有少量表达.(3)与野生型HBx相比,HBxc端49~154aa、C端85-154Off,、N端1-57aa+c端141~154aa、N端1-57aa和N端1-84aa缺失突变体在Huh7细胞中均使Wnt/β-catenin信号通路的转录活性明显下降,分别下降了78.7%、84.7%、75.7%、93.8%和95,5%.结论:HBx不同截短突变体的细胞定位及对Wnt/β-catenin信号通路转录活性不同,提示HBx的不同功能区对Wnt信号的转录激活发挥着不同的作用.

• 关键词：

  乙型肝炎病毒x蛋白 截短突变体 细胞内定位 转录活性

• 作者单位：

  重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室,重庆400016

• 基金项目：

  国家自然科学基金资助项目(No.31171307,NO.81371827)%"十二五"传染病国家科技重大专项(No.2012ZXl0002005-003-002,NO.2013ZXl0002002-005-003)

• 来源期刊：

  中国病理生理杂志

• 年，卷(期)：

  201430001