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靶向 caspase-8小发夹 RNA 减轻去血清/缺氧诱导的人骨髓间充质干细胞凋亡

原文链接：万方

• 作者：

  袁伟伟,林秋雄,朱杰宁,李晓红,符永恒,刘晓颖,谭虹虹,邓春玉,单志新

• 摘要：

  目的:研究caspase-8小发夹RNA(Cap8 shRNA)对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)凋亡的调控作用。方法:构建2个靶向人caspase-8基因的穿梭质粒pAd-Cap8 shRNA,并鉴定可有效抑制人HEK293细胞中caspase-8表达的pAd-Cap8 shRNA质粒。构建表达Cap8 shRNA的重组腺病毒质粒,并在HEK293细胞中包装、扩增重组腺病毒rAd-Cap8 shRNA。检测rAd-Cap8 shRNA感染的hMSCs中caspase-8 mRNA和蛋白表达。利用anne-xin V/PI双染色法和caspase-8活性检测分析去血清/缺氧诱导的hMSCs凋亡变化,利用荧光定量PCR检测hMSCs中VEGF、肝细胞生长因子1(HGF)、胰岛素样生长因子(IGF-1)、Bcl-2和Bcl-xL mRNA表达。结果:通过定量PCR筛选到可有效抑制caspase-8表达的pAd-Cap8 shRNA质粒。成功构建Cap8 shRNA的重组腺病毒质粒,并包装、扩增重组腺病毒rAd-Cap8 shRNA。荧光定量PCR和Western blotting结果证实rAd-Cap8 shRNA可有效抑制hMSCs中caspase-8表达。 rAd-Cap8 shRNA能有效抑制去血清/缺氧诱导的hMSCs凋亡,降低caspase-8活性,增强hMSCs中HGF、IGF-1和Bcl-2表达。结论:Caspase-8 shRNA可以抑制去血清/缺氧诱导的hMSCs凋亡。

• 关键词：

  骨髓间充质干细胞 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8 细胞凋亡 小发夹RNA

• 作者单位：

  广东省人民医院,广东省医学科学院,广东省心血管病研究所,广东广州510080

• 基金项目：

  国家自然科学基金资助项目(No．30672077； No．81070102； No．81270222)；广东省自然科学基金资助项目(S2011020005911；S2012010009453)

• 来源期刊：

  中国病理生理杂志

• 年，卷(期)：

  2014007