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TMEM16A钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞的表达及其电生理特性研究

原文链接：万方

• 作者：

  郝峰,白雪松,鞠晓红,方芳,藏雨轩,朱杭飞,向国艳,张雲乔,袁忠海

• 摘要：

  目的:探讨跨膜蛋白16A(TMEM16A)钙激活氯离子通道在Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮(FRT)细胞的表达及其电生理特性。方法:构建pUB6/V5-TMEM16A真核表达载体。脂质体方法转染TMEM16A至FRT细胞,同时优化脂质体和载体的量和比例,获得最佳转染效率和表达效果,杀稻瘟菌素( blasticidin )进行抗生素筛选,获取稳定表达TMEM16A的FRT细胞株。 RT-PCR和免疫荧光检测TMEM16A于FRT细胞的表达情况;倒置荧光显微镜下观察TMEM16A在FRT细胞中的表达和定位;应用全细胞膜片钳技术和卤族元素敏感的荧光蛋白YFP-H148Q/I152L检测TMEM16A钙激活氯离子通道的功能。结果:BamHⅠ和XbaⅠ双酶切的琼脂糖凝胶电泳和测序结果表明目的基因TMEM16A成功克隆到真核表达载体pUB6/V5中;RT-PCR和免疫荧光实验结果表明经杀稻瘟菌素筛选后的FRT细胞在mRNA和蛋白水平表达TMEM16A,倒置显微镜下观察结果表明TMEM16A在FRT细胞膜上有表达;应用全细胞膜片钳技术和卤族元素敏感的荧光蛋白YFP-H148Q/I152L证实稳定表达于FRT细胞的TMEM16A具有经典的钙激活氯离子通道特性。结论:FRT细胞可高效表达TMEM16A。 TMEM16A是钙激活氯离子通道的分子基础。

• 关键词：

  跨膜蛋白16A 钙激活氯离子通道 膜片钳术 Fisher大鼠甲状腺滤泡上皮细胞

• 作者单位：

  吉林医药学院 生物化学检验教研室%吉林医药学院 营养教研室%吉林医药学院 病原教研室,吉林吉林,132013

• 基金项目：

  国家自然科学基金资助项目(No．81202031)；吉林省教育厅基金资助课题(No．2013-351；No．2009-510)；吉林省大学生创新创业训练计划856；吉林医药学院大学生科研基金资助课题(吉医学科字[2012]第12号)

• 来源期刊：

  中国病理生理杂志

• 年，卷(期)：

  2014009