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针对MAG,OMgp,NogoA基因的scFv(OMgp)-9R-siRNA复合物的制备和鉴定

原文链接：万方

• 作者：

  马建国,严望军,刘铁龙,肖建如,周许辉,贾连顺

• 摘要：

  目的 运用抗体靶向技术联合siRNA形成双特异性复合物scFv-9R-siRNA的高效递送系统,该系统通过抗OMgp的scFv把MAG,OMgp和Nogo A的特异性siRNA特异性运输至受损神经细胞,从而抑制这三种轴突抑制物的表达,改善脊髓损伤后的局部微环境,阻断这些髓磷脂相关抑制物对轴突再生的抑制作用,为后续的大鼠模型试验奠定基础.方法 (1)根据基因重组技术,利用制备好的高效抗OMgp单克隆抗体构建单链抗体scFv(OMgp),并在此基础上非共价合成针对MAG,OMgp,NogoA基因的scFv (OMgp)-9R-siRNA复合物;(2)体外鉴定scFv (OMgp)-9R-siRNA复合物效果:鉴定MAG,OMgp,NogoA三种抑制物的mRNA和蛋白表达水平,同时与非神经细胞对比,研究引入scFv后所产生的靶细胞特异性.结果 (1)成功制备抗大鼠OMgp单克隆抗体E811,并通过ELISA和Western blot对已制备的抗大鼠OMgp单克隆抗体E811进行了特异性和敏感性鉴定,在此基础上成功获得scFv (OMgp)-9R-siRNA复合物;(2)体外实验证实:scFv (OMgp)-9R-siRNA复合物同时特异性下调MAG,OMgp和Nogo A基因表达.结论 单链抗体技术(scFv)解决了siRNA的特异性导入受损神经元问题,为体内应用siRNA技术治疗脊髓损伤奠定了基础.

• 关键词：

  单克隆抗体 单链抗体 RNA干扰技术 Monoclonal antibodies Single chain antibody RNA interference

• 作者单位：

  中国人民解放军第425医院脊柱外科,三亚572000%第二军医大学附属长征医院骨科,上海200003

• DOI：

  10.3969/j.issn.1674-5817.2012.04.012

• 来源期刊：

  实验动物与比较医学

• 年，卷(期)：

  201232004