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目的 探讨外周血淋巴细胞计数、淋巴细胞比例在非感染性全身炎症反应综合征(SIRS)、脓毒症及严重脓毒症患者中的变化及意义.方法 回顾分析201 1年1月至2013年9月入住北京大学第三医院急诊科重症监护病房(ICU)423例患者的临床资料,其中非感染性SIRS患者54例,脓毒症患者177例,严重脓毒症患者192例;死亡150例,存活273例.入院时检测外周血白细胞计数(WBC)、中性粒细胞比例(N)、淋巴细胞计数、淋巴细胞比例、乳酸、血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)和降钙素原(PCT)水平,并计算急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分.根据患者诊断和预后分组,比较各指标,并采用Spearman相关分析评价淋巴细胞与各指标的相关性.结果 年龄越大,病情越重.在SIRS组、脓毒症组及严重脓毒症组,随病情加重,APACHEⅡ评分(分:7.78±3.72、13.85±7.22、24.00±9.79)、住院时间[d:6.0(1.0,9.0)、12.0(8.0,22.0)、19.5(7.0,29.0)]、病死率(0、10.2%、52.6%)、WBC(×109/L:7.59±3.27、8.94±3.95、10.32±5.50)、N(0.685±0.132、0.778±0.135、0.831±0.086)、hs-CRP[mg/L:4.60(2.80,7.52)、23.58(13.49,49.22)、59.77(19.36,110.62)和PCT[μg/L:0.05(0.05,0.05)、0.09(0.05,0.61)、0.63(0.10,5.25)]呈升高趋势(均P=0.000),淋巴细胞计数[×109/L:1.53 (0.89,1.88)、0.90 (0.65,1.42)、0.80 (0.50,1.12)]、淋巴细胞比例(0.225±0.122、0.138±0.097、0.106±0.070)呈降低趋势(P<0.05和P<0.01);3组乳酸水平比较差异有统计学意义[分别为2.40(1.30,5.10)、1.10(0.80,2.00)、1.40(1.00,2.50)mmol/L,P=0.000].与存活组比较,死亡组年龄(岁:76.71±12.21比73.21±14.49)、APACHEⅡ评分(分:24.69±9.58比13.91±8.41)、住院时间[d:12.0(4.0,28.0)比11.0(8.0,22.0)]、WBC(×109/L:10.29±5.82比8.89±3.98)、N(0.809±0.130比0.776±0.120)、乳酸[mmol/L:1.80(1.10,2.90)比1.30(0.90,2.49)]、hs-CRP[mg/L:50.94(19.21,97.13)比21.71 (6.39,54.40)和PCT[μg/L:0.74 (0.13,5.83)比0.08(0.05,0.59)]明显升高(P<0.05或P<0.01),淋巴细胞计数[×109/L:0.90(0.50,1.29)比1.05 (0.70,1.54)]、淋巴细胞比例(0.123±0.098比0.143±0.097)明显降低((P<0.01和P<0.05).淋巴细胞计数与N(r=-0.597,P=0.000)、hs-CRP(r=-0.298,P=0.000)、PCT(r=-0.304,P=0.000)和APACHEⅡ评分(r=-0.214,P=0.000)呈明显负相关,与淋巴细胞比例呈明显正相关(r=0.691,P=0.000),与WBC(r=0.082,P=0.0910),乳酸(r=0.073,P=0.132)无相关性.结论 淋巴细胞水平与脓毒症的严重程度相关,监测其水平变化可作为脓毒症患者病情评估及治疗效果的辅助指标之一.

目的:探讨存活蛋白2B ( survivin-2B)在诱导肿瘤细胞凋亡中的分子机制。方法:将survivin-2B基因插入真核表达载体pCDNA3.1,得到重组载体pCDNA3.1-survivin-2B。将空载体pCDNA3.1及重组载体pCD-NA3.1-survivin-2B分别转染人乳腺癌细胞株MCF7,转染后48 h,用annexin V/7-AAD染色法分析细胞凋亡情况,利用碘化丙啶染色法分析转染对细胞周期的影响;同时提取总RNA并反转录成cDNA,进行多重聚合酶链反应。利用GeXP多基因表达分析系统检测21个与肿瘤相关基因的表达情况。结果:过表达survivin-2B基因导致MCF7细胞凋亡与细胞周期阻滞,并引起8个基因表达上调,2个基因表达下调。变化最大的为醛脱氢酶4家族成员A1(ALDH4A1),表达下降48%;变化最小的为胞质分裂调控蛋白1(PRC1),上调1.08倍。结论: Survivin-2B能够诱导细胞凋亡与细胞周期G2/M期阻滞,并引起部分肿瘤相关基因的表达变化。

急性髓细胞白血病(AML)的治疗需要应用对正常细胞和肿瘤细胞都有毒性的药物,而复发性急性髓样白血病对随后的化疗也有抵抗性.因此,需要用对细胞毒性最小的剂量选择性杀死白血病细胞.美国科学家发现,AML依赖于DDX5,抑制DDX5的表达可减缓AML细胞在体外的扩增及体内病情的进展,而对正常的骨髓细胞没有毒性.抑制AML细胞的DDX5表

目的:研究传统中药提取物nodosin对体外培养的人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用,并探讨其对Bcl-2和Bax表达的影响.方法:将不同浓度组(1.25、2.5、5、10和20μmol/L)nodosin预作用于HepG2细胞24 h,用倒置显微镜观察nodosin对细胞形态学的影响,采用MTT法检测细胞生长抑制率,用流式细胞术检测细胞凋亡率和Bcl-2、Bax的表达.结果:形态学结果显示,随着nodosin剂量的增加,细胞皱缩和漂浮细胞数量增加,流式细胞术检测结果显示随着nodosin药物浓度的增加,HepG2细胞凋亡率增加.Bax的表达随着nodosin剂量的增加逐渐增加,Bcl-2的表达逐渐减少.结论:Nodosin能抑制HepG2细胞株的增殖,呈明显的剂量依赖性,对HepG2细胞的抑制作用是通过增加Bax的表达以及降低Bcl-2的表达诱导细胞凋亡实现的.

为明确加州新小绥螨Neoseiulus californicus(McGregor)国内种群对朱砂叶螨Tetranychus cinnabarinus(Boisduval)的控制潜力,应用功能反应、数值反应及实验种群生命表参数评价了该捕食螨对朱砂叶螨的控制能力.加州新小绥螨对朱砂叶螨的功能反应能很好地拟合HollingⅡ方程.在25℃,加州新小绥螨雌成螨对朱砂叶螨卵、幼螨、若螨和成螨的功能反应参数a/Th值分别为42.4195、81.6275、54.3044和17.9399,对朱砂叶螨幼螨、若螨和卵的控制力高于成螨.在19~31℃,加州新小绥螨对朱砂叶螨雌成螨日均捕食量和对猎物的控制能力a/Th随温度升高而增大,在31℃时达最大值,分别为10.80头和29.5364.在28℃时,加州新小绥螨的净增殖率和内禀增长率分别为26.1522和0.2213.表明加州新小绥螨国内种群表现出重要的生物防治潜能.

采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法,分析家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2体外生长增殖与凋亡的影响,用倒置光学显微镜检测defensin对人肝癌细胞HepG2和人正常心肌细胞H9C2生长增殖情况的影响,并采用流式细胞术检测defensin对人肝癌细胞HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响.结果显示,家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2的生长有抑制作用,对人正常心肌细胞H9C2无抑制作用.通过显微镜观察HepG2细胞凋亡的形态变化,MTT检测发现defensin对肿瘤细胞的增殖抑制率呈剂量反应关系和时间反应关系.defensin能诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡,并且影响人肝癌细胞HepG2的细胞周期.家蝇抗菌肽defensin对人肝癌细胞HepG2具有增殖抑制作用及凋亡作用,对正常人心肌细胞H9C2基本无抑制作用.

目的:探讨西兰花多肽组分II诱导胶质瘤细胞凋亡的作用及机制.方法:培养人神经胶质瘤SHG-44细胞,将其分为对照组以及3、10、30和100 mg/L西兰花多肽组分II组,MTT法检测西兰花多肽组分II作用后细胞活力的变化;Annexin V/PI检测细胞的凋亡率;倒置显微镜观察西兰花多肽组分II诱导细胞凋亡的形态学变化;免疫细胞化学和Western blotting法检测西兰花多肽组分II作用后Bax、Bcl-2蛋白表达,Western blotting法检测caspase-3蛋白表达.结果:西兰花多肽组分II作用SHG-44细胞24 h、48 h和72 h时均可以降低细胞活力,作用呈时间-剂量依赖性.Annexin V/PI检测细胞凋亡率发现,各用药组细胞凋亡率随着药物剂量的增加而显著升高.倒置显微镜下观察,西兰花多肽组分II作用SHG-44细胞72 h后,各用药组细胞的密度随药物浓度升高而明显降低,并可见到明显的凋亡小体.细胞免疫组织化学和Western blotting结果显示,药物作用SHG-44细胞72 h后,与对照组比较,细胞Bax蛋白表达呈上升趋势,Bcl-2蛋白表达呈下降趋势,各用药组Bax/Bcl-2比值均明显增加(P<0.05或P<0.01);Western blotting检测caspase-3蛋白发现,各药物组caspase-3蛋白表达量均增加,与空白对照组比较,30和100 mg/L西兰花多肽组分II组差异有统计学意义(P<0.01).结论:西兰花多肽组分II可提高神经胶质瘤细胞中Bax/Bcl-2蛋白的比值,促进caspase-3蛋白活化,从而诱导肿瘤细胞凋亡.

以Fe(CO)5为前体采用超声法合成纳米Fe胶体粒子,通过Fe胶体与PdCl2发生金属置换反应制备出活性炭负载Pd-Fe双金属催化剂.研究了表面活性剂聚乙烯吡咯烷酮对制备负载型催化剂的影响.采用XRD、H2程序升温还原(H2-TPR)、TEM、EDX等表征手段对催化剂进行表征,以苯乙炔加氢反应为探针反应考察了Fe含量对于催化剂催化性能的影响.结果表明加氢催化活性较差的金属组分Fe在合适的比例下可以促进Pd基催化剂的加氢催化活性和选择性,然而,过多的Fe也会降低其催化活性.

目的:探讨小檗碱对胰岛β细胞的保护作用及可能机制。方法:采用四氧嘧啶( Axn)诱导INS-1胰岛β细胞损伤模型,并以不同浓度的硫酸小檗碱进行干预。将细胞分为对照组( Con组)、损伤组( Axn组)、低剂量小檗碱组( LBer组,小檗碱浓度为15μmol/L)、中剂量小檗碱组( MBer组,小檗碱浓度为45μmol/L)及高剂量小檗碱组( HBer组,小檗碱浓度为100μmol/L)。流式细胞术观察各组细胞凋亡情况,Western blotting免疫印迹法分别观察各组PTEN/PI3K/Akt信号通路、HNF-1α/PDX-1信号通路活化情况以及激活型caspase-3的水平;酶联免疫吸附法(ELISA)观察各组基础胰岛素释放及葡萄糖刺激后胰岛素的释放水平。结果:与Con组相比,Axn组凋亡率显著升高,但小檗碱干预后凋亡水平显著降低,且呈浓度依赖性。与Con组相比,Axn组PTEN表达水平明显升高,而PI3K/Akt活性被抑制,激活型caspase-3水平显著升高;而小檗碱处理则能逆转上述PTEN通路的促凋亡作用,且显示出浓度依赖性;与Con组相比,Axn组HNF-1α/PDX-1信号通路活性显著下降,但小檗碱处理则能提高该通路活性,表现出浓度依赖性。与Con组相比,Axn组基础及葡萄糖刺激下胰岛素释放水平均显著降低,而小檗碱处理则能显著恢复上述胰岛素释放水平,呈浓度依赖性。结论:小檗碱对四氧嘧啶损伤的INS-1胰岛β细胞具有保护作用,表现为对其凋亡的抑制与胰岛素分泌功能的恢复,分别与影响细胞内PTEN/PI3 K/Akt及HNF-1α/PDX-1信号通路有关。

目的:探讨过度内质网应激在慢性环孢素A( CsA)肾毒性细胞凋亡中的作用机制。方法:将Spra-gue-Dawley大鼠分为正常对照组和慢性CsA肾毒性组,分别给予皮下注射橄榄油(1 mg · kg-1· d-1)和CsA (15 mg· kg-1· d-1)1周或4周后处死大鼠。三色染色和TUNEL染色观察肾小管间质纤维化和细胞凋亡;免疫组织化学染色和免疫印迹检测免疫球蛋白结合蛋白( BiP)、磷酸化的真核细胞翻译起始因子2α( eIF2α)、生长阻滞及DNA损伤诱导蛋白153(GADD153)、caspase-12和caspase-3蛋白表达。结果: CsA注射1周观察不到肾小管间质纤维化和TUNEL阳性细胞,而给予CsA注射4周大鼠表现为明显的肾小管间质纤维化[(38.9±3.3)%vs (0.0±0.0)%, P<0.01]和大量TUNEL阳性细胞[(89±9)% vs (7±2)%, P<0.01]。与对照组比较,CsA组BiP和caspase-12蛋白的表达于1周达到高峰,4周后降至正常水平;反之,eIF2α和caspase-3蛋白表达呈时间依赖性增加。结论:在慢性CsA肾毒性中,过度的内质网应激耗尽分子伴侣,激活凋亡途径,从而导致肾小管上皮细胞凋亡和肾小管间质损伤。