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硫代磷酸化修饰的反义 TGF-β1寡核苷酸抑制血管损伤后内膜增殖
目的:探讨反义转化生长因子β1(TGF-β1)寡核苷酸对血管损伤后血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转变的影响及对内膜增殖的作用。方法:在跨过TGF-β1 cDNA序列的起始密码区ATG范围内,设计含15个碱基、无修饰或硫代磷酸化修饰的反义TGF-β1寡核苷酸( AS TGF-β1)及对照的正义(与反义寡核苷酸互补)寡核苷酸( S TGF-β1)。球囊导管损伤SD大鼠颈总动脉,术后7 d取出正常或损伤的血管进行VSMCs的培养, RT-PCR及蛋白印迹分别检测VSMCs生物学标志平滑肌22α蛋白( SM22α)、基质Gla蛋白和骨桥蛋白,以及TGF-β1和纤维连结蛋白(fibronectin,FN)mRNA和蛋白质的表达。采用ALZET 泵皮下注射硫代磷酸化修饰AS TGF-β1及S TGF-β1(90μg· kg-1· d-1),连续给药28 d后测定血管内膜与中膜的面积比(I/M)。结果:(1)AS TGF-β1对血管损伤后VSMCs TGF-β1 mRNA表达并无明显作用,但呈浓度依赖性抑制TGF-β1蛋白质的表达,而S TGF-β1不影响TGF-β1mRNA和蛋白质的表达。(2)AS TGF-β1呈浓度依赖性抑制血管损伤后VSMCs DNA的合成,而不管是AS TGF-β1还是S TGF-β1对正常VSMCs DNA的合成均无明显的量效作用;同时AS TGF-β1显著抑制了血管损伤后VSMCs FN的合成。(3)AS TGF-β1显著促进了VSMCs SM22αmRNA的表达,但抑制了基质Gla蛋白和骨桥蛋白mRNA的表达,这种相反的作用在0.01及0.1μmol/L的水平最为明显。(4)硫代磷酸化修饰的AS TGF-β1治疗28 d后,显著抑制了颈动脉损伤后新生内膜的增殖,I/M比对照组下降了68%。结论:AS TGF-β1特异性抑制了VSMCs TGF-β1蛋白的表达,抑制血管损伤后VSMCs增殖及合成、分泌FN,减轻血管损伤后新生内膜的增殖。上述作用可能与逆转血管损伤后VSMCs的表型转变有关。林志鸿,谢良地,吴可贵,李庚山,蔺佩鸿 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
m iR-155种子序列的反义寡核苷酸对抗多发性骨髓瘤的作用
目的:探讨针对miR-155种子序列的微小反义核酸(tinyantimiR-155,t-antimiR-155)对多发性骨髓瘤细胞的抑制效应。方法:化学合成t-anti miR-155,通过脂质体转染多发性骨髓瘤RPMI-8266细胞株;实验分为t-antimiR-155组、随机对照组( SCR)和空白对照组;通过MTT法检测细胞增殖抑制率;使用细胞集落形成实验观察集落形成情况;流式细胞术(Annexin V/PI双染法)检测细胞凋亡率。结果:(1)MTT筛选t-antimiR-155显著抑制RPMI-8266细胞生长的浓度,t-antimiR-155的最佳浓度是0.4μmol/L,最佳作用时间是转染后48 h。(2)细胞集落形成实验显示,相比于SCR组,t-antimiR-155组细胞形成集落的能力减弱,集落形成率显著降低。(3)相比于SCR组,t-antimiR-155组的细胞凋亡率明显增加,差异显著。结论:t-antimiR-155可能通过干扰miR-155表达有效抑制多发性骨髓瘤细胞的进展;miR-155可能作为多发性骨髓瘤基因治疗的潜在靶点。丰茂晓,朱容萱,骆小闯,古春明,曾雪,费嘉 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
脑胶质瘤U87-EGFRvIII细胞反义寡核苷酸的188Re标记实验研究
研究放射性核素铼(188Re)标记脑胶质瘤U87-EGFRvIII(Epidermal Growth Factor Receptor Variant III)细胞反义寡核苷酸序列的制备方法,探讨其作为脑胶质瘤反义显像剂的可能性.采用细胞指数富集的配基系统进化技术(Cell-based Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,Cell-SELEX)筛选脑胶质瘤U87-EGFRvIII细胞,得到一段高亲和力的反义寡核苷酸序列U2,然后采用直接标记法进行188Re的放射性标记,按照正交实验设计进行188Re最佳标记条件的摸索,纸层析法测定标记率,通过体外稳定性实验评价188Re-U2的放化特性,测定标记物静脉注射后在大耳兔不同时相血液放射性清除曲线,应用SPECT显像观察标记物在兔体内的放射性动态分布变化.结果表明:在最佳标记条件下188Re-U2的标记率为70%±14%;经Sep-PaK C18反相柱分离纯化后,188Re-U2在生理盐水和血清中37 oC下放置24 h的放化纯度分别为70.6%和95.55%;188Re-U2在兔体内的血放射性清除迅速,主要通过肾脏排泄,其余脏器内放射性均较低.188Re直接法标记U87-EGFRvIII细胞反义寡核苷酸U2的方法简单,具有良好的标记率和体内外稳定性,并且体内分布动力学特性也比较理想.齐永帅,黄宝丹,杜丽,张辉,黄凯,李贵平 - 核技术文章来源： 万方数据 -
脑胶质瘤U87-EGFRvⅢ细胞反义寡核苷酸的188Re标记实验研究
研究放射性核素铼(188Re)标记脑胶质瘤U87-EGFRvⅢ(Epidermal Growth Factor Receptor Variant Ⅲ)细胞反义寡核苷酸序列的制备方法,探讨其作为脑胶质瘤反义显像剂的可能性.采用细胞指数富集的配基系统进化技术(Cell-based Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,Cell-SELEX)筛选脑胶质瘤U87-EGFRvⅢ细胞,得到一段高亲和力的反义寡核苷酸序列U2,然后采用直接标记法进行188Re的放射性标记,按照正交实验设计进行188Re最佳标记条件的摸索,纸层析法测定标记率,通过体外稳定性实验评价188Re-U2的放化特性,测定标记物静脉注射后在大耳兔不同时相血液放射性清除曲线,应用SPECT显像观察标记物在兔体内的放射性动态分布变化.结果表明:在最佳标记条件下188Re-U2的标记率为70%±14%;经Sep-PaK C18反相柱分离纯化后,188Re-U2在生理盐水和血清中37℃下放置24h的放化纯度分别为70.6%和95.55%;188Re-U2在兔体内的血放射性清除迅速,主要通过肾脏排泄,其余脏器内放射性均较低.188Re直接法标记U87-EGFRvⅢ细胞反义寡核苷酸U2的方法简单,具有良好的标记率和体内外稳定性,并且体内分布动力学特性也比较理想.齐永帅,黄宝丹,杜丽,张辉,黄凯,李贵平 - 核技术文章来源： 万方数据
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