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胃腺癌中确认具有ROS1基因重排
目前涉及受体酪氨酸激酶(RTKs)的染色体重排已在上皮恶性肿瘤中描述,包括非小细胞肺癌、结直肠癌和乳腺癌.一种受体酪氨酸激酶c-ros原癌基因1受体酪氨酸激酶已经被确认为非小细胞肺癌的驱动基因,因为其能被克唑替尼(一种间变性淋巴瘤受体酪氨酸激酶ALK/肝细胞生长因子受体c-Met/ROS1抑制剂)作用后可使肿瘤明显缩小.最近研究表明对进展期胃癌,目前只有人表皮生长因子受体2(HER-2)基因阳性的患者可以通过化疗联合靶向治疗延长其生存期.但进展期胃癌患者中,HER-2阳性率不足1/4,我国患者的比例可能更低.因此,有必要进一步探索胃癌新Lee J,Lee S E,Kang S Y,许春伟,张立英 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O基因甲基化与乳腺癌细胞株化疗敏感性的关系
目的探讨受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O( PTPRO)基因不同甲基化状态的乳腺癌细胞株对紫杉醇的敏感性。方法应用甲基化特异性PCR,检测MCF-7、MDA-MB-231和Hs578t乳腺癌细胞株中PTPRO基因启动子CpG岛甲基化状态,并用 RT-PCR法检测 PTPRO mRNA 表达。采用 MTT 法检测MCF-7、MDA-MB-231和Hs578t乳腺癌细胞株对0.0006、0.0030、0.0150、0.0750、0.3750、1.8750、9.3500、46.7500、234.0000 mmol/L紫杉醇的敏感性,以及对细胞株进行去甲基化实验后紫杉醇抑制率的改变。两组间均数比较采用配对t检验;在检验方差齐性的前提下,多组间均数比较用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD检验。结果乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞株中PTPRO基因甲基化,而乳腺癌Hs578t细胞株中PTPRO基因无甲基化。用紫杉醇处理细胞株后再检测PTPRO启动子甲基化情况,结果显示MCF-7、MDA-MB-231细胞株PTPRO基因甲基化率明显降低[(0.861±0.109)比(0.037±0.019),t=23.326,P=0.000;(0.758±0.114)比(0.086±0.010),t=16.109,P=0.000]。并且,MCF-7、MDA-MB-231细胞株经5-杂氮脱氧胞嘧啶( DAC)处理后,PTPRO mRNA表达水平明显高于DAC处理前[(0.033±0.006)比(0.166±0.016),t=28.338, P=0.000;(0.052±0.006)比(0.587±0.087),t=17.257, P=0.000],其表达水平与启动子CpG 岛甲基化状态有关。紫杉醇对MDA-MB-231、MCF-7及Hs578t细胞株的半数抑制浓度(IC50)分别为8.52、5.87和4.52 mmol/L。不同浓度紫杉醇对Hs578t细胞株的抑制率均比 MCF-7和 MDA-MB-231细胞株高( F=129.93、182.40、46.26、49.26、33.60、80.31、160.05、69.96、79.98,P均=0.000)。去甲基化实验显示:DAC处理MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞株后,不同浓度紫杉醇对细胞株的抑制率与处理前相比,差异均有统计学意义( MCF-7:t=14.195、8.328、7.042、6.385、5.450、8.557、4.788、13.351、11.887, P 均<0.050; MDA-MB-231:t=16.324、30.443、9.177、12.694、9.528、11.912、10.260、18.109、3.754, P均<0.050)。结论 PTPRO基因甲基化是乳腺癌发生、发展过程中的常见现象;紫杉醇可影响PTPRO基因启动子CpG岛的甲基化状态,并且对无PTPRO基因甲基化的乳腺癌细胞株杀伤率更高;PTPRO基因甲基化状态的改变影响乳腺癌细胞株对紫杉醇的敏感性。李少英,吴华聪,王辉林,王维,陈静 - 中华乳腺病杂志(电子版)文章来源： 万方数据 -
苦参碱对人髓母细胞瘤 D341细胞凋亡及相关蛋白表达的影响
目的:探讨苦参碱在体外对人髓母细胞瘤D341细胞凋亡及Bax、Bcl-2、丝氨酸/苏氨酸激酶Akt和磷酸化Akt(p-Akt)表达的影响。方法:体外培养的D341细胞分为实验组(加不同浓度的苦参碱)和对照组(不加苦参碱),用CCK-8法检测苦参碱对D341细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot-ting检测苦参碱对D341细胞Bax、Bcl-2、Akt和p-Akt蛋白表达的影响。结果:苦参碱在体外能明显地抑制D341细胞的生长,作用呈量效与时效关系;随着作用药物浓度的增高和作用时间的延长,其凋亡率逐渐升高,在透射电镜下观察,细胞可见染色质趋边固缩,胞浆中空泡增多、变大,并且出现凋亡小体;Western blotting结果表明,随着药物浓度的增加,药物能使瘤细胞Bax蛋白的表达水平增强,却使Bcl-2和p-Akt蛋白的表达水平下降。结论:苦参碱可诱导D341细胞的凋亡而发挥体外抗肿瘤作用,其诱导瘤细胞的凋亡与上调Bax蛋白、下调Bcl-2及PI3K /Akt信号通路中p-Akt蛋白的表达水平有关。周开宇,毛天明,陈茜,罗永康 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
不同低氧暴露时间对小鼠骨骼肌ERα/PDK4调节的影响
目的:研究不同低氧暴露时间对小鼠骨骼肌雌激素受体相关受体(estrogen receptor related receptors α,ERRα)与丙酮酸脱氢酶激酶4(PαK4)DNA结合活性及PDK4基因表达的影响,以探讨低氧条件下影响糖代谢及其信号分子之间的相互调节可能的机制.方法:野生小鼠随机分为常氧组、低氧组(氧浓度11.25%左右,模拟海拔高度4500m),而后又进一步分为0天、7天、14天、28天组,每组10只.低氧暴露时间为每天8h.同天数的小鼠常氧组与低氧组脱颈处死.染色质免疫共沉淀法(Chip)测定ERRα/PDK4结合活性,Real-TimePCR测定骨骼肌PDK4mRNA含量.结果:1)随着天数增加,低氧组ERRα/PDK4的结合活性有增加的趋势,但没有显著性差异;2)随着天数增加,低氧28天组PDK4mRNA相对表达量与0天组相比显著性升高(P〈0.05),且与28天常氧组相比也有显著性增加(P〈0.05).结论:低氧28天小鼠骨骼肌PDK4mRNA相对表达量显著增加,但其ERRα/PDK4的结合活性并没有显著性变化,推测低氧下蛾并不是促进PDK4mRNA表达的主要转录因子.何诗依,陈婷,孙海洋,张缨 - 体育科学文章来源： 万方数据 -
雌激素及雌激素受体α减轻谷氨酸对神经细胞的损伤
目的:建立谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型,观察雌激素及雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)对谷氨酸诱导的神经细胞损伤的作用.方法:原代培养小鼠大脑皮层神经细胞,神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)免疫组化染色鉴定神经元的纯度.建立谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型.用前期实验中已构建成功的ERα重组慢病毒(V-ERα-RFP-flag)感染经谷氨酸诱导的神经细胞.实时荧光定量PCR和Western blotting检测ERα mRNA和蛋白表达水平.实验分为3组:(1)对照组:用空慢病毒(V-RFP-flag)感染经谷氨酸诱导的神经细胞;(2)雌激素组:用雌激素干预经谷氨酸诱导的神经细胞;(3)慢病毒组:用V-ERα-RFP-flag感染经谷氨酸诱导的神经细胞.流式细胞术检测各组神经细胞凋亡率;实时荧光定量PCR及免疫荧光染色检测各组神经细胞中N-甲基-D-天冬氨酸受体1(N-methyl-D-aspartate receptor 1,NMDAR1)及囊泡膜谷氨酸转运体蛋白1(vesicular glutamate transporter protein 1,VGLUT1)的变化.结果:成功原代培养神经细胞,经NSE免疫组化方法鉴定神经元纯度大于90%.成功建立经谷氨酸诱导的神经细胞损伤模型.MOI=7的V-ERα-RFP-flag感染神经细胞72 h后,在荧光显微镜观察下可见到红色荧光表达,与对照病毒相比,能增加神经细胞中ERα mRNA和蛋白表达水平(P<0.01).与对照组相比,雌激素组和慢病毒组细胞凋亡率降低(P<0.05),且实时荧光定量PCR结果显示,雌激素组和慢病毒组的NMDAR1和VGLUT1 mRNA表达降低(P<0.05),免疫荧光实验结果提示NMDAR1和VGLUT1阳性的细胞数减少(P<0.01).结论:雌激素和ERα能减轻谷氨酸对神经细胞的损伤效应,该保护作用可能通过抑制NMDAR1和VGLUT1的表达来实现.朱加应,张广云,王建怡,袁平,胡晓 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
GRK5对大鼠星形胶质细胞活化的作用及其机制研究
目的:探讨培养新生大鼠皮层星形胶质细胞G蛋白偶联受体激酶5( GRK5)基因沉默后核因子κB ( NF-κB)表达的变化及其与胶质细胞活化、炎症反应和氧化应激的关系。方法:采用分别或联合RNA干扰沉默GRK5基因表达与NF-κB抑制剂N-乙酰半胱氨酸干预进行实验分组。利用免疫荧光、实时定量PCR和Western blotting观察GFAP与活性caspase-3表达,细胞分泌TNF-α与NO的浓度, p65、TNF-α、IL-1β和iNOS的表达情况等。结果:GRK5 siRNA刺激星形胶质细胞活化,并检测到NF-κB表达增多(P<0.01),TNF-α、IL-1β和iNOS mR-NA表达水平增高(P<0.01),细胞分泌TNF-α和NO增多(P<0.01),活性caspase-3表达增多(P<0.01)。采用GRK5 siRNA+NF-κB抑制剂联合干预可部分逆转GRK5 siRNA引起的上述变化( P<0.05)。结论:GRK5基因沉默可能通过刺激NF-κB表达增多引起星形胶质细胞活化。GRK5的正常表达可能具有抑制星形胶质细胞活化相关炎症反应及氧化应激的作用。张运,王莉莉,赵茜,马士程,贺茂林 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
结肠癌组织中干细胞分子标志物LGR5的检测
目的 探讨富含亮氨酸重复单位的G蛋白耦联受体5(LGR5)在人结肠癌中的表达情况及其与临床病理参数的关系.方法 利用自主研发的一次成型组织芯片制作技术制作结肠癌组织芯片,用免疫组织化学染色(免疫组化)法检测246例结肠癌组织LGR5的表达,分析其与临床病理因素及预后的相关性.结果 LGR5在结肠癌远端正常对照组织、癌旁组织和癌灶组织中的表达率分别为8.7%、45.5%和44.7%(x2=183.1,P<0.01);LGR5的阳性表达与组织分化程度相关(P <0.01);67例已死亡病例中LGR5表达阳性和阴性患者生存期分析无显著性差异(x2=0.785,p>0.05).结论 LGR5与结肠癌的组织分化程度相关,可能作为结肠癌早期筛查和后期靶向治疗的分子标志物.包卫光,陈瑜 - 临床检验杂志文章来源： 万方数据 -
微小RNA-146a调控肺泡巨噬细胞中白细胞介素-1受体相关激酶1和肿瘤坏死因子受体相关因子6的表达
目的 观察转染微小RNR-146a(miR-146a)对肺泡巨噬细胞中白细胞介素-1受体相关激酶1(IRAK-1)和肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF-6)表达的影响,为探讨miR-146a对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控机制奠定基础.方法 将体外培养大鼠肺泡巨噬细胞NR8383分为miR-146a模拟物(mimic)组和阴性对照组,分别加入50 nmol/L Pre-miR miR-146a前体和Cy3标记的Pre-miR阴性对照进行转染,转染24 h后收集细胞,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-146a、IRAK-1 mRNA、TRAF-6mRNA的表达,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测细胞中IRAK-1和TRAF-6的蛋白表达.结果 miR-146amimic组miR-146a表达较阴性对照组上调了(24.55±6.14)倍(t=-6.643,P=0.003).细胞中IRAK-1和TRAF-6的mRNA表达分别为阴性对照组的(1.16±0.10)倍(t=2.701,P=0.054)和(1.19±0.16)倍(t=2.032,P=0.112).而IRAK-1和TRAF-6的蛋白表达分别为阴性对照组的73.0%(t=-9.353,P=0.001)和64.1%(t=-6.839,P=0.002).结论 miR-146a mimic能成功转染肺泡巨噬细胞NR8383; miR-146a过表达后,能有效下调肺泡巨噬细胞中IRAK-1和TRAF-6的表达,其机制可能是在蛋白翻译水平的抑制.黄萍,刘芬,曾振国,黄彩雪,邵强,夏亮,揭克敏,钱克俭 - 中华危重病急救医学文章来源： 万方数据 -
AT1受体自身抗体对糖尿病肾病大鼠肾脏细胞凋亡及JNK表达的作用
目的:探讨血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体(angiotensinⅡtype 1 receptor autoantibody,AT1-AA)对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾脏细胞凋亡及内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)相关的JNK表达的作用.方法:高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射制备DN大鼠模型,采用ELISA法检测大鼠AT1-AA阳性率,根据检测结果随机选择AT1-AA阳性和AT1-AA阴性大鼠共12只纳入DN组,同时选择6只正常大鼠纳入NC组;TUNEL法检测肾脏细胞凋亡;Western blotting技术测定肾组织ERS标志蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及凋亡蛋白p-JNK的表达水平.结果:DN组大鼠肾脏细胞凋亡率较NC组显著升高,且AT1-AA阳性大鼠凋亡率明显高于AT1-AA阴性大鼠(P<0.01).Western blotting结果显示,GRP78和p-JNK蛋白在DN组大鼠肾组织中的水平较NC组显著升高,AT1-AA阳性DN大鼠肾组织中,前述蛋白的改变较AT1-AA阴性DN大鼠更为明显(P<0.05).结论:AT1-AA可诱导DN大鼠肾脏ERS反应,并通过ERS相关的JNK凋亡途径介导肾脏细胞凋亡,损害肾脏功能.徐春艳,赵林双 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
急性呼吸窘迫综合征呼吸机捆绑式治疗及其与炎症生物标志物的关系
目的 通过观察血中可溶性尿激酶型纤溶酶原激活物受体(suPAR)、高级糖基化终产物受体(RAGE)、降钙素原(PCT)及C-反应蛋白(CRP)水平变化,探讨呼吸机捆绑式治疗对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患者预后的影响.方法 采用前瞻性对照研究方法,选择兰州大学第二医院重症医学科2013年1月至12月接受有创机械通气治疗的ARDS患者共54例,给予呼吸机捆绑式治疗措施,依据实施的依从性分为完全依从组(VB组,29例)和非完全依从组(NVB组,25例).比较两组患者机械通气时间、重症监护病房(ICU)住院时间、呼吸机相关性肺炎(VAP)及相关并发症的发生率以及28 d病死率;检测患者治疗前后血中suPAR、RAGE、PCT、CRP水平;对氧合指数(PaO2/FiO2)与其他变量的相关性进行Pearson相关分析和多元线性回归分析.结果 ①两组患者性别、年龄、急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分及PaO2/FiO2等基础状态无明显差异.②两组患者治疗前suPAR、RAGE、PCT、CRP水平无明显差异;治疗后上述标志物水平均明显下降,其中VB组suPAR及RAGE水平较NVB组下降显著[suPAR (ng/L):189.87(135.57)比309.38(278.00),RAGE(μg/L):2.17(0.75)比3.17(2.64),均P<0.01].③与NVB组比较,VB组机械通气时间、ICU住院时间、VAP发生率明显降低[机械通气时间(h):131.52±44.94比166.28±38.09,t=-3.039,P=0.004;ICU住院时间(h):171.14±74.25比210.92±54.89,t=-2.208,P=0.032;VAP发生率:17.24%比44.00%,x2=4.611,P=0.041],而VB组和NVB组28 d病死率(27.59%比36.00%,x2=0.441,P=0.566)及其他相关并发症发生率均无明显差异.④Pearson相关分析显示,PaO2/FiO2与年龄(r=-0.290,P=0.033)、suPAR(r=-0.898,P=0.000)、RAGE(r=-0.898,P=0.000)、PCT(r=-0.486,P=0.000)及CRP(r=-0.280,P=0.040)均呈负相关.⑤多元线性回归分析显示,PaO2/FiO2与suPAR(t=2.645,P=0.011)、RAGE(t=-2.885,P=0.006)、PCT(t=2.649,P=0.011)显著相关.结论 血中suPAR、RAGE、PCT、CRP水平与ARDS患者病情严重程度相关.呼吸机捆绑式治疗实施的依从性能够影响ARDS患者预后,完全依从者上述炎症标志物水平显著降低,且能缩短机械通气及ICU住院时间,降低VAP发生率,改善患者预后.杨静,董晨明,李俊艳,张红松,张虹,宋瑞霞,杨朝辉,冯芳,齐艳 - 中华危重病急救医学文章来源： 万方数据
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