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锌指蛋白ZBTB20基因重组腺病毒表达载体的构建和鉴定
目的:构建含锌指蛋白ZBTB20基因的重组腺病毒载体,以研究锌指蛋白ZBTB20的生物学功能.方法:将带有FLAG标签的ZBTB20 cDNA片段(ZBTB20-FLAG)克隆至pAdTrack-CMV载体,将该载体与pAdEasy质粒进行细菌内同源重组从而获得重组腺病毒载体pAd-ZBTB20,之后在293细胞中进行包装以及扩增,并对病毒滴度进行检测;采用肝脏组织特异性ZBTB20基因敲除小鼠的原代肝细胞和肝脏组织模型,分别于离体和在体水平鉴定所制备的重组腺病毒Ad-ZBTB20介导的ZBTB20蛋白表达情况;并采用报告基因技术检测过表达的ZBTB20蛋白的功能活性.结果:成功制备了锌指蛋白ZBTB20重组腺病毒,该重组腺病毒感染原代肝细胞和小鼠肝脏组织能过表达ZBTB20蛋白,并且此ZBTB20蛋白能抑制其下游靶基因甲胎蛋白的转录.结论:所构建的ZBTB20重组腺病毒可以介导ZBTB20的过表达并具备转录调节活性,为今后研究ZBTB20的相关生物学功能奠定了基础.朱晓彤,杨瑞,周露婷,张晔,李玲,章卫平,施广霞,陈玉霞 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
重组腺相关病毒-多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子对氧诱导视网膜新生血管形成的抑制作用
目的 观察重组腺相关病毒(rAAV)-多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子(PSF)对氧诱导视网膜新生血管的抑制作用.方法 7日龄C57BL/6J小鼠18只,随机分为正常组、rAAV-PSF注射组、rAAV注射组,各组均6只.蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠视网膜组织中PSF的表达.7日龄C57BL/6J小鼠48只随机分为正常组、氧诱导视网膜病变(OIR)模型组、OIR rAAV-PSF治疗组、OIR rAAV治疗组,各组均为12只.除正常组外,其余各组小鼠与哺乳母鼠共同置于氧浓度为(75±2)%的氧箱内饲养5d后转移至正常环境中饲养5d,建立OIR模型.12日龄时,OIR rAAV-PSF治疗组小鼠玻璃体腔注射病毒滴度为5×1013pfu/ml的rAAV-PSF重组载体2μI; OIR rAAV治疗组小鼠玻璃体腔注射相同病毒滴度的单纯rAAV载体2μl.OIR模型组小鼠出氧箱后不作任何处理.石蜡切片苏木精-伊红染色并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核;Western blot检测视网膜中VEGF蛋白表达含量.结果 正常组小鼠视网膜PSF蛋白表达与rAAV-PSF注射组比较,差异有统计学意义(F=16.05,P=0.001),与rAAV注射组比较,差异无统计学意义(F=16.05,P=0.890).正常组、OIR模型组、OIR rAAV-PSF治疗组、OIR rAAV治疗组突破内界膜的视网膜新生血管内皮细胞核数比较,正常组与OIR模型组差异有统计学意义(F=101.00,P=0.007);rAAV-PSF治疗组与OIR模型组差异有统计学意义(F=101.00,P=0.002);OIR rAAV治疗组与OIR模型组差异无统计学意义(F=101.00,P=0.550).各组视网膜VEGF蛋白表达比较,正常组与OIR模型组差异有统计学意义(F=13.20,P=0.005),OIR模型组与OIR rAAV-PSF治疗组差异有统计学意义(F=13.20,P=0.001);OIR模型组与OIR rAAV组差异无统计学意义(F=13.20,P=0.071).结论 rAAV-PSF玻璃体腔注射可以抑制OIR小鼠视网膜VEGF表达,从而抑制其新生血管生成.田芳,东莉洁,周玉,王飞,张晓敏,李筱荣 - 中华眼底病杂志文章来源： 万方数据 -
转录因子 ZFP580在缺氧预处理抗大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用
目的:通过观察缺氧预处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及锌指核转录因子ZFP580表达的改变,探讨ZFP580的作用及机制。方法:培养大鼠H9c2心肌细胞,分为3组:(1)缺氧/复氧(H/R)组:H9c2心肌细胞换用模拟缺血溶液(pH=6.2)缺氧(95%N2+5%CO2)培养3 h,复氧培养2 h;(2)缺氧预适应(HPC)组:H9c2心肌细胞经3个循环的短暂缺氧(10 min)/复氧(20 min)处理后,进行同上H/R实验;(3)对照(C)组:正常培养的H9c2心肌细胞。通过MTT染色及LDH水平判定HPC的作用。 Western blotting方法观察心肌细胞中转录因子ZFP580表达及ERK1/2磷酸化情况,以及ERK1/2磷酸化抑制剂PD98059对ZFP580表达的影响。分别构建高/低表达ZFP580的慢病毒载体并转染H9c2心肌细胞,经H/R实验后利用Annexin V-PE/7-AAD染色及流式细胞术检测H9c2细胞凋亡情况,Western bloting方法观察caspase-3活化情况。结果: HPC能显著改善H/R处理后H9c2心肌细胞存活率降低和LDH漏出的现象。 Western blotting 结果显示,HPC组心肌细胞中ZFP580表达及ERK1/2磷酸化程度较H/R处理组明显上升,且PD98059预处理明显抑制HPC诱导的ZFP580的表达上调。慢病毒介导的基因转染实验发现,ZFP580高表达的H9c2心肌细胞在H/R损伤后凋亡率降低且细胞中活化caspase-3表达下降。结论:HPC可引起心肌细胞中转录因子ZFP580表达上调,ZFP580作为ERK1/2通路的下游靶分子发挥抗心肌细胞凋亡的作用。 ZFP580表达上调可能作为内源性保护机制之一介导了HPC的细胞保护作用。孟祥艳,于海龙,买霞,张文成,徐瑞成 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
STAT5a在乳腺癌组织中的低表达与患者不良预后相关
目的:检测信号转导和转录活化蛋白5a(signal transducer and activator of transcription 5a,STAT5a)在浸润性乳腺癌组织中的表达情况,探索STAT5a在乳腺癌患者中潜在的临床意义.方法:采用免疫组织化学染色的方法检测100例浸润性乳腺癌组织及10例正常乳腺组织标本中STAT5a的表达情况;收集入组乳腺癌患者的临床病理资料,并对所有入组乳腺癌患者进行至少5年的随访;分析STAT5a表达情况与乳腺癌患者临床病理特征、预后的关系.结果:(1)100例浸润性乳腺癌中STAT5a的阳性表达率为46%,显著高于正常乳腺组织(P<0.05),乳腺癌中STAT5a的表达与肿瘤分级、激素受体状况显著相关(P<0.05).(2)生存分析显示,STAT5a阳性组乳腺癌患者5年生存率较STAT5a阴性组高,2组比较差异有统计学意义(P<0.05).(3)单因素分析发现临床分期、淋巴结转移情况、STAT5a与患者5年生存率之间存在关联,并有统计学意义(P<0.05).(4)Cox回归模型显示:STAT5a、淋巴结转移情况及临床分期是影响乳腺癌患者生存的独立预后因素.结论:高分化、激素受体阳性乳腺癌组织高表达STAT5a.STAT5a阴性表达的乳腺癌患者预后较差,STAT5a可作为判断乳腺癌患者预后的指标.刘威,龙梅珺,吴珏堃,李玺,邱万寿 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
日本藏南宋遗民诗人严子安"和唐诗"辑考
据日本国会图书馆藏万里集九《晓风集》抄卷,参照内阁文库本《三体幻云抄》,可辑得严予安"和《三体唐诗》绝句"一百六十一首,比照相关文献可考知严子安可能是南宋遗民诗人,其身份近似汪元量.他以和唐诗的方式表达了亡国之痛故国之思.这些诗在传世文献中多已散佚,长期不为人知.从新辑出的诗作看,流行于日本江户时代的各类"三体唐诗"抄卷的文献价值值得关注.自宋以来就有"和唐"之事,但和写整部唐诗选本是《三体唐诗》一书流传之后的事.这既证明《三体唐诗》一书影响甚大,也反映出"和唐""拟唐"在元已成一时风气.这是当时习诗者的一种学习方式,也是一种解诗方式与抒情方式.这一风气推动了以选本为中心的唐诗经典系列的形成,强化了人们关于唐诗的经典意识.查屏球 - 学术界文章来源： 万方数据 -
论利得和损失有关的会计问题和建议
文章先对利得和损失的概念及其与收入和费用的关系进行讨论,然后从利得和损失的两种分类对其会计核算进行了探讨,最后又提出了几个相关的问题和建议.吕坤艳,文义 - 财会研究文章来源： 万方数据 -
婴儿黄斑区视网膜发育变化的动态观察
目的 观察婴儿视网膜黄斑区形态及视网膜各层厚度变化.方法 随机选取新生儿重症监护病房中的婴儿58例86只眼纳入研究.根据不同矫正胎龄对婴儿进行分组.其中,矫正胎龄<32周组10例14只眼;33~36周组26例39只眼;37~41周组12例18只眼;≥42周组10例15只眼.随机选择无器质性眼病的成人12名22只眼作为成人组.所有婴儿及成人均行便携式光相干断层扫描(OCT)检查.着重观察婴儿黄斑区形态.同时,测量婴儿及成人黄斑中心凹及距中心凹750、1500 μm处旁中心凹的神经上皮层、内层视网膜、外层视网膜、神经纤维层、节细胞层、内丛状层、内核层、外丛状层、外核层厚度.分析视网膜各层厚度与矫正胎龄的相关性.结果 婴儿早期的黄斑中心凹凹陷浅,随着矫正胎龄增长凹陷逐渐加深并接近成人形态.婴儿外层视网膜结构较内层完善,随着矫正胎龄的增长逐渐出现外界膜、光感受器内外节连接(IS/OS)、光感受器外节/视网膜色素上皮(OS/RPE)层.外界膜、IS/OS、OS/RPE层最早出现时间分别为矫正胎龄32+6、35、47+6周.RPE层、脉络膜血管层厚度均随矫正胎龄增长逐渐增厚.婴儿组、成人组之间距中心凹750μm处内层视网膜、1500μm处神经纤维层和中心凹及距中心凹750、1500 μm处节细胞层厚度比较,差异无统计学意义(P>0.01).其他视网膜各层厚度在婴儿组及成人组间,以及在不同矫正胎龄组组内间差异均有统计学意义(P<0.01).相关性分析发现,除节细胞层外,其他视网膜各层厚度均与矫正胎龄有相关性(P<0.05).结论 婴儿早期的黄斑中心凹凹陷浅,随着矫正胎龄增长凹陷逐渐加深并接近成人形态.婴儿早期黄斑区外层视网膜逐渐增厚,其中以内外核层增减变化最为明显.视网膜各层随着矫正胎龄增长逐渐增厚,但发育速度并不完全一致.高云霞,胡艳玲,吕淑媛,万兴丽,彭希,陆方 - 中华眼底病杂志文章来源： 万方数据 -
共调节因子在乳腺癌ER信号转导通路中的作用
ER属于配体依赖的转录因子亚家族成员.雌激素可通过特异性结合并激活其受体传递信号,广泛调控机体的各种功能,如生殖功能、骨骼及其他组织的分化和维持等[1].ER介导的信号转导通路失调,可导致相关基因表达异常或改变细胞质内某些蛋白的功能,促使乳腺细胞增殖或抑制其凋亡,从而导致乳腺癌的发生;另外一些特殊的机制可促使乳腺癌由雌激素依赖型向雌激素非依赖型转化并造成治疗抵抗[2].在乳腺癌发张燕,耿翠芝 - 中华乳腺病杂志(电子版)文章来源： 万方数据 -
MicroRNA-3666调节白血病细胞 PTEN 基因的表达
目的:探讨白血病细胞中microRNA-3666( miR-3666)对第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因( PTEN)表达的调控作用。方法:qRT-PCR检测miR-3666在正常人外周血单个核细胞、不同类型白血病细胞系以及临床初诊未治的不同类型白血病细胞中的表达差异,利用TargetScan在线分析软件预测miR-3666潜在靶基因PTEN后,构建含有靶基因野生型3’端非翻译区域(3’UTR)及突变型3’UTR(缺失了整段预测的miR-3666结合序列)的双萤光素酶报告基因质粒,采用脂质体Lipofectamine 2000包裹双萤光素酶重组质粒及miR-3666模拟体或阴性对照,共转染HEK293T细胞,应用双萤光素酶检测试剂盒测定萤光素酶活性。 FAM标记的miR-3666抑制体和阴性对照分别核转染至K562细胞,FACS检测转染效率,并采用 Western blotting 检测PTEN蛋白的表达。结果:miR-3666在人白血病细胞系及原代白血病细胞中的表达明显高于正常人外周血单个核细胞,尤其高表达于K562细胞系及原代慢性粒细胞白血病细胞中;双萤光素酶报告基因测定系统验证PTEN是miR-3666的潜在靶基因;K562细胞中下调miR-3666后,Western blotting检测结果显示PTEN蛋白显著上调。结论:白血病细胞中miR-3666的表达上调,下调miR-3666后可以促进靶基因PTEN的表达,miR-3666有可能成为白血病治疗的新靶点。倪芳,张玉侠,汪心怡,赵华,汪思应 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
论先秦音乐中"和"的意义及影响
"和"在先秦音乐中具有奠基意义和创作上的理论指导意义,诸子百家对"和"虽有不同解释,但却无一不把"和"的理念作为音乐理论的基础.在音乐中,"和"既有类似于西方音乐中"和声"的技术层面意义,更包含有丰富的哲学思想和音乐理念.先秦时期大多政治家和思想家们,把音乐中"和"的思想与治理国家联系起来,认为治理国家时不仅可以直接发挥音乐强大的教化作用,"移风易俗"、"调和人心"、还可以将音乐中"和"的理念借鉴到管理等其它领域.因此,先秦音乐中"和"的思想具有中国古代哲学思想和音乐理念的基本精神,是中国古代文化的重要特征之一.杨桦 - 音乐创作文章来源： 万方数据
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