科创中国

目的:探讨不同剂量地塞米松(DEX)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)大鼠的肺保护作用。方法按照随机数字表法将36只健康雄性SD大鼠分为对照组、模型组、常规剂量DEX干预组和大剂量DEX干预组4组,每组9只。经尾静脉注射LPS 8 mg/kg制备ALI模型,对照组给予等量生理盐水;常规剂量和大剂量DEX干预组于制模后分别腹腔注射DEX 1 mg/kg及8 mg/kg。制模后4 h,光镜下观察肺组织病理学改变并进行组织学评分,计算肺湿/干质量(W/D)比值,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量以及肺组织Na+-K+-ATP酶活性。结果模型组肺泡内可见纤维蛋白渗出和大量中性粒细胞浸润、肺泡间隔增宽、气道上皮细胞脱落及肺血管充血;给予常规剂量和大剂量DEX干预后肺组织病理学改变均较模型组明显改善,且病理评分明显降低(分:10.15±1.06、11.42±1.53比12.39±1.47,均P<0.05),但不同剂量DEX干预组间无差异。与对照组比较,模型组肺W/D比值、BALF蛋白含量明显增高〔肺W/D比值:4.98±0.28比4.32±0.54,蛋白含量(g/L):0.61±0.12比0.24±0.07,均P<0.01〕,肺组织Na+-K+-ATP酶活性明显降低(μmol·mg-1·h-1:4.24±0.55比6.09±0.52,P<0.01)。与模型组比较,常规剂量及大剂量DEX干预组肺W/D比值、BALF蛋白含量均明显下降〔肺W/D比值:4.35±0.27、4.59±0.39比4.98±0.28,蛋白含量(g/L):0.34±0.12、0.45±0.11比0.61±0.12,均P<0.05〕,肺组织Na+-K+-ATP酶活性明显升高(μmol·mg-1·h-1:5.19±0.54、4.87±0.45比4.24±0.55,均P<0.05),但常规剂量与大剂量DEX干预组之间均无明显差异。结论 DEX可以明显改善LPS诱导的ALI模型大鼠肺损伤程度,但大剂量DEX对肺保护作用未显示出优势。

目的:观察早期应用肝素对脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)大鼠的保护作用.方法健康清洁级SD大鼠40只,按照随机数字表法分为对照组、模型组和大、小剂量肝素组,每组10只.采用尾静脉注射大肠杆菌LPS 5 mg/kg制备ALI动物模型.大、小剂量肝素组分别在给予LPS后1 min静脉注射1000 U/kg、250 U/kg肝素;对照组则给予等量生理盐水.各组分别于注射LPS后4 h经右颈静脉取血检测凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)及纤维蛋白原(FIB)水平;经右股动脉采血进行血气分析.取血后6 h,测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定肺组织Toll样受体4(TLR4)mRNA表达.结果与对照组比较,模型组PT、TT明显缩短〔PT(s):4.45±1.17比6.58±0.59,t=2.237,P=0.045;TT(s):13.29±1.15比15.17±1.08,t=2.765,P=0.019〕,FIB明显下降(g/L:1.80±0.12比4.60±0.57,t=2.813,P=0.032);与模型组比较,大、小剂量肝素组PT、APTT均明显延长〔PT(s):12.98±1.25、9.88±0.72比4.45±1.17,APTT(s):46.60±2.01、44.08±1.46比39.53±2.89,P<0.05或P<0.01〕,FIB显著降低(g/L:2.10±0.43、2.50±0.57比1.80±0.12,P<0.01和P<0.05);而不同剂量肝素组间凝血指标比较差异无统计学意义.模型组血气分析指标较对照组均明显下降;小剂量肝素组PaO2较模型组明显改善〔mmHg(1 mmHg=0.133 kPa):80.87±11.65比65.37±3.58,t=2.903,P=0.017〕,而大剂量肝素组与模型组相比氧合改善无统计学差异.模型组BALF中TNF-α及肺组织TLR4 mRNA表达均较对照组明显升高〔TNF-α(ng/L):534.36±65.33比125.13±11.61,t=4.932,P=0.000;TLR4 mRNA(灰度值):2.451±0.028比0.998±0.021,t=4.687,P=0.001〕;不同剂量肝素组BALF中TNF-α及肺组织TLR4 mRNA?

抗胆碱能药(山莨菪碱、长托宁等)能与M、N胆碱受体结合,对抗乙酰胆碱和其他拟胆碱药物的毒蕈碱样及烟碱样作用.近年来,随着细胞学和分子学的发展,研究证实抗胆碱药能有效抑制中性粒细胞(PMN)等效应细胞的活化,减少炎性因子(IL-1等)的释放,减轻多种原因引起的急性肺损伤.本文主要就抗胆碱能药在治疗急性肺损伤中的研究进展做一综述.

扩张型心肌病(DCM)是以心脏扩大、心力衰竭、和附壁血栓为基本特征,并伴有不同程度的心肌肥厚、心室收缩功能减退的心脏疾患.本病病死率较高,通常其症状出现后5年的存活率在40%左右[1].近期我院成功救治1例扩张型心肌病行外科手术期间发生急性肺损伤的患者,现报道如下:1病例介绍患者,女性,24岁,体重45kg,ASAⅢ级.因扩张型心肌病、盆腔包块于2011年12月28日在静吸复合

目的 探讨生长抑素(SST)对内毒素致急性肺损伤(ALI)小鼠炎症反应的影响及其机制.方法 将72只SPF级雄性ICR小鼠按随机数字表法分为对照组、SST对照组、模型组和SST干预组,每组18只.采用腹腔注射内毒素40 mL/kg制备ALI模型,对照组则给予等量生理盐水;SST干预组于制模后0.5、2、6、12h皮下注射SST(20 μg,20 mL/kg).各组于首次给药后3、8、16h分别取6只小鼠取血后活杀,用烘干法测定肺组织湿/干质量(W/D)比值;光镜下观察肺组织病理学改变;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清SST、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、IL-10)的含量;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质免疫印迹试验(Westem Blot)检测肺组织Toll样受体4(TLR4)和核转录因子-κBp65(NF-κBp65)的mRNA及蛋白表达.结果 对照组与SST对照组小鼠各指标比较差异均无统计学意义.与对照组比较,模型组肺组织W/D比值,血清SST、TNF-α、IL-6、IL-10水平,肺组织TLR4、NF-κBp65的mRNA及蛋白表达均明显升高,其中W/D比值、IL-6、IL-10及TLR4的mRNA和蛋白表达均于16h达峰值[W/D比值:6.32±0.18比4.14±0.14,IL-6(ng/L):673.78±56.13比50.17±7.06,IL-10(ng/L):481.13±40.78比61.71±10.05,TLR4 mRNA:0.740±0.099比0.183±0.021,TLR4蛋白:0.935±0.067比0.222±0.019,均P< 0.05],SST、TNF-α及NF-κBp65的mRNA和蛋白表达均于8h达峰值[SST(ng/L):254.97±38.75比95.87±13.95,TNF-α(ng/L):139.69±19.06比21.90±4.52,NF-κBp65 mRNA:0.753±0.065比0.208±0.029,NF-κBp65蛋白:1.214±0.079比0.303±0.067,均P<0.05].与模型组比较,SST干预组小鼠肺组织损伤程度明显减轻,除血清SST呈持续增加趋势外,其余指标均明显降低[16 h W/D比值:5.21±0.14比6.32±0.18,8 h TNF-α(ng/L):80.48±8.52比139.69±19.06,16 h IL-6(ng/L):394.99±37.17比673.78 ±56.13,16 h IL-10(ng/L):326.95±36.41比481.13±40.78,16 hTLR4 mRNA:0.240±0.028比0.740±0.099,16 h TLR4蛋白:0.618±0.066比0.935±0.067,8 h NF-κBp65mRNA:0.240±0.045比0.753±0.065,8 h NF-κBp65蛋白:0.784±0.041比1.214±0.079,均P<0.05].结论 SST干预后对内毒素诱导的ALI小鼠炎症因子释放及组织因子基因、蛋白表达均起到明显的抑制作用;其机制可能是通过阻断TLR4-NF-κB信号通路,从而减轻肺组织炎症反应.

目的:观察经尾静脉输注骨髓间充质干细胞培养上清液(MSCs CdM)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤的治疗作用及其机制.方法:采用全骨髓培养法分离纯化骨髓间充质干细胞,传至第3代时观察细胞形态,流式细胞术检测细胞表面标志,并且收集上清液用超滤离心管进行离心.30只BALB/c小鼠随机分为对照组、LPS模型组和MSCs CdM治疗组.对照组腹腔内注射生理盐水(0.01 mL/g),LPS组和MSCs CdM治疗组腹腔内注射LPS(5 mg/kg,0.01 mL/g)制备急性肺损伤模型.造模1h后经尾静脉输注MSCs CdM(MSCs CdM治疗组)或生理盐水(LPS组或对照组)300 μL.6h后处死小鼠,留取标本检测肺组织病理形态学、肺组织湿干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量、血清及BALF中细胞因子水平和肺组织中髓过氧化物酶(MPO)的活性.结果:与对照组比较,LPS处理后肺组织病理损伤严重,BALF中蛋白、血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)含量、肺组织中MPO活性及肺组织湿干重比均显著升高.与LPS组比较,MSCs CdM治疗组肺组织病理损伤程度减轻,BALF中蛋白、血清TNF-α和IL-6含量、肺组织中MPO活性及肺组织湿干重比均显著降低,而BALF中白细胞介素10 (IL-10)和角质细胞生长因子(KGF)水平显著高于LPS组和对照组.结论:骨髓间充质干细胞培养上清液可有效减轻LPS诱导的急性肺损伤,其作用机制可能与其调节肺部TNF-α、IL-6、IL-10和KGF的水平有关.

目的 动态观察部分液体通气(PLV)对内毒素诱导急性肺损伤(ALI)幼猪促炎/抗炎因子的影响.方法 选择12头上海小白猪,按随机数字表法分为单纯机械通气(MV)组和PLV组,每组6头.静脉输注内毒素60 μg·kg-1·h-1静脉维持2h诱导ALI模型.PLV组在MV基础上气管内注入全氟萘烷(PFC) 10 mL/kg.两组分别于基础状态下和ALI模型制备成功后0、1、2、4h时监测血流动力学、呼吸力学、动脉血气分析等参数,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)动态检测血清白细胞介素(IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;光镜下观察肺组织病理学改变,并进行病理学评分.结果 PLV组给药后通气和氧合功能逐渐改善,气道阻力下降,在成模4h时各指标与MV组比较差异均有统计学意义[心率(HR,次/min):144±6比179 ±9,呼吸频率(RR,次/min):58±4比77±6,平均动脉压(MAP,mmHg,1 mmHg=0.133 kPa):99±7比75±29,肺顺应性(Cdyn,mL·cmH2O-1·kg-1):1.9±0.3比1.2±0.4,潮气量(VT,mL/kg):7.8 ±0.4比5.8±0.9,平均气道阻力(Raw,cmH2O·L-1·s-1):20.5±6.6比35.2±4.0,平均气道压(Paw,cmH2O,1 cmH2O =0.098 kPa):1.0±0.5比3.0±0.9,通气效率指标(VEI):0.18±0.02比0.08±0.02,pH值:7.386±0.143比7.148 ±0.165,动脉血氧分压(PaO2,mmHg):121.8±12.5比73.6±10.9,动脉血二氧化碳分压(PaCO2,mmHg):39.6±20.3比66.8±23.5,氧合指数(PaO2/FiO2,mmHg):311±35比184±27,P<0.05或P<0.01].两组成模时血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10均较基础状态时明显升高,且随时间延长逐渐上升,成模后各时间点PLV组促炎因子明显低于MV组,以4h时最为明显[TNF-α(ng/L):98.4±21.1比178.0±55.0,IL-1β(ng/L):142.0±38.0比226.0±55.0,IL-6(ng/L):763.0±282.0比1 303.0±260.0,IL-8(ng/L):1 183.0±403.0比1 876.0±232.0,P<0.05或P<0.01],而两组间抗炎因子IL-10差异无统计学意义(ng/L:292.0±40.0比208.0±82.0,P>0.05);PLV组TNF-α/IL-10比值于成模2h即显著低于MV组(0.58±0.13比1.13±0.54,P<0.05),而IL-6/IL-10比值在成模4h显著低于MV组(2.72±1.27比7.17±3.08,P<0.01).光镜下观察PLV组肺内炎性细胞浸润、肺充血及间质水肿均较MV组明显改善.PLV组肺损伤评分明显低于MV组(非重力依赖区:9.8±0.8比11.8±1.0,t=3.956,P=0.003;重力依赖区:5.0±0.6比14.7±2.3,t=10.127,P=0.000).结论 PLV可显著降低ALI幼猪促炎因子水平,且在维持促炎/抗炎因子平衡方面效果更明显,这可能是PLV改善肺损伤的机制之一.

目的:构建含NADPH氧化酶1(NOX1)近端启动子区的pGL3萤光素酶报告基因载体及缺失NF-κB结合元件的相应载体,分别测定其相应活性,探讨NF-κB结合元件缺失对NOX1启动子区转录活性的影响.方法:采用PCR法克隆NOX1启动子区序列(1 415 bp),将目的片段与pGL3萤光素酶载体分别双酶切、纯化后进行连接(pGL3-NOX1-1415),测序鉴定;应用Alibaba 2.1软件分析NOX1近端启动子区,获取NF-κB结合元件;重叠PCR法将含该元件的启动子区域(88 bp)缺失,并构建相应载体(pGL3-NOX1-1327).将两载体分别与pRL-TK内参质粒瞬时转染进入A549细胞,采用TNF-α(10μg/L)刺激细胞24 h,萤光酶标仪检测A549细胞的萤光素酶活性.结果:测序鉴定结果提示pGL3-NOX1-1415及NF-κB结合元件缺失的pGL3-NOX1-1327载体构建成功;细胞实验显示,TNF-α刺激后,转染pGL3-NOX1-1415的A549细胞萤光素酶活性明显强于对照组(P<0.05),而转染NF-κB结合元件缺失的pGL3-NOX1-1327的细胞萤光素酶活性明显低于转染pGL3-NOX1-1415组(P<0.05).结论:TNF-α诱导A549细胞NOX1基因活化与NF-κB密切相关,NF-κB参与了TNF-α诱导的NOX1基因启动子的转录调控.

Notch信号通路在进化上非常保守,主要由Notch受体、配体及核内效应分子组成,其广泛参与调控细胞的增殖、分化及凋亡过程.近年研究表明,Notch信号通路参与急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(acute lung injury/acute respiratory distress syndrome,ALI/ARDS)的发生、发展,特异性阻断或激活这一途径可以影响ALI/ARDS的进展,该文就Notch 信号通路在ALI/ARDS中作用的研究进展做一综述.

目的:研究大麻素CB2受体激动剂JWH133对百草枯中毒致急性肺损伤大鼠的保护作用。方法:72只SD雄性大鼠随机平均分成4组。百草枯中毒组:按照20 mg/kg剂量腹腔注射;低剂量JWH133预处理组:在给予百草枯腹腔注射前1 h腹腔注射5 mg/kg JWH133;高剂量JWH133预处理组:在给予百草枯腹腔注射前1 h腹腔注射20 mg/kg JWH133;正常对照组:1 mL生理盐水腹腔注射。在注射百草枯后8 h、1 d和3 d时,收集动脉血、肺泡灌洗液和肺组织标本。采用血气分析仪测定动脉血氧分压( PaO2),采用ELISA方法检测支气管肺泡灌洗液中IL-1β和TNF-α含量,行组织切片HE染色进行肺损伤评分,利用Western blotting方法检测肺组织中NF-κB和AP-1蛋白表达水平。结果:与正常对照组相比,百草枯中毒组大鼠的动脉血PaO2明显下降,肺组织结构破坏,肺泡间质水肿,肺损伤指数增加,支气管肺泡灌洗液中炎性细胞因子IL-1β和TNF-α含量明显增加。 JWH133预处理,尤其是高剂量JWH133可以减轻肺组织损伤程度,降低支气管肺泡灌洗液中IL-1β和TNF-α含量,减少肺组织中NF-κB和AP-1蛋白的表达。结论:应用CB2受体激动剂JWH133可以抑制百草枯中毒大鼠肺组织中NF-κB和AP-1蛋白的表达,减少炎性细胞因子IL-1β和TNF-α的分泌,减轻百草枯中毒导致的急性肺损伤。