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慢性酒精摄入所致的肝细胞上皮一间充质转化参与小鼠肝纤维化形成
目的:探讨慢性酒精摄入对肝组织病理学改变的影响及上皮一间充质转化对肝纤维化形成的作用.方法:将30只雄性C57BL/6小鼠随机分为3组:对照组灌胃给予与酒精组等体积的蒸馏水,低剂量和高剂量酒精组分别灌胃给予2.0g·kg-1·d-1和4.0g·kg~·d.酒精5个月.肝组织病理学改变和纤维化分别用HE和Masson三染色观察;荧光标记的TUNEL法检测肝组织细胞凋亡;自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性;肝组织成纤维细胞特异性蛋白1(FSP-1)、α-平滑肌肌动蛋白(0[-SMA)和E.钙黏素表达采用免疫荧光观察;E-钙黏素、α-SMA、FSP-1、转化生长因子β,(TGF-β1)和缺氧诱导因子lα(HIF-1α)蛋白表达水平用Westernblotting检测.结果:与对照组相比,小鼠酒精灌胃5个月后,血清ALT和AST活性升高;肝组织细胞凋亡增加;低剂量酒精组呈现肝脂肪变性和轻度的肝纤维化,高剂量酒精组呈现出严重的肝纤维化;肝组织丙二醛(MDA)含量升高,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)下降;肝细胞E-钙黏素表达下降,俚.SMA表达增加;低剂量酒精组肝细胞内白蛋白和FSP-1共定位,而高剂量酒精组肝细胞内只表达FSP-1Westernblotting检测结果显示,E-钙黏素表达下降,而d-SMA、FSP-1、TGF-β1和HIF-lα蛋白表达水平升高,但是HIF.1a蛋白表达水平在高、低酒精组之间无差别.结论:慢性酒精摄人可诱导肝纤维化,部分成纤维细胞来源于肝细胞上皮一间充质转化,其机制可能与肝细胞氧化状态、TGF-β.及HIF-lα升高有关.孙玉生,林波,王思谦,刘悦,张优敬,郑乃芮,皇甫超申 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
新生大鼠心肌成纤维细胞培养方法的比较
目的:建立并比较新生大鼠心肌成纤维细胞的培养方法.方法:分别通过胶原酶+胰酶消化法和胰酶消化法对新生大鼠心肌组织进行消化,利用贴壁时间差分离心肌细胞和心肌成纤维细胞,然后对收集的心肌成纤维细胞进行形态、纯度及对药物反应方面的检测.结果:在细胞形态和纯度方面,2种方法收集的心肌成纤维细胞没有明显差异,但用胶原酶+胰酶消化法可以获得更多数量的心肌细胞;在药物反应方面,采用胰酶消化法获得的心肌成纤维细胞比胶原酶+胰酶消化法具有更强的增殖能力.结论:采用胶原酶+胰酶消化法和胰酶消化法可以获得相同形态和纯度的心肌成纤维细胞,但是采用胰酶消化法获得的心肌成纤维细胞对药物具有更强的增殖反应能力.孙刚,薛睿聪,刘晨,董吁钢 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
肠肌成纤维细胞与IBD相关肠纤维化
肠纤维化是炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)的并发症,其主要病理表现为以胶原为主的细胞外间质(extracellular matrix,ECM)在肠组织的过度合成和异常沉积.其中,溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)以直肠和结肠的浅表性炎症病变为主,其肠纤维化一般只限于粘膜下层;而克罗恩病(Crohn disease,CD)则是以全肠道均可受累的透宋佳,张晓岚 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
真核表达载体pIRES2-ZsGreenl-opLA的构建及其在猪成纤维细胞的表达
α-乳清蛋白(α-lactalbumin,α-LA)是哺乳动物乳汁中一种重要的蛋白质,富含机体必需氨基酸和支链氨基酸,其极佳的氨基酸比例、易吸收性以及功能特异性,使得α-LA在婴幼儿个体正常生长中具有重要的意义.本实验旨在构建人α-乳清蛋白真核表达载体pIRES2-ZsGreenl-opLA,将其转染至猪(Sus scrofa)的成纤维细胞,获得稳定表达人仪一LA的细胞.根据猪基因密码子偏爱性优化并合成人α-乳清蛋白基因mRNA序列opLA,并将其定向克隆入pIRES2一ZsGreenl真核表达载体,双酶切及测序方法鉴定重组载体;脂质体介导的方法将载体转染入培养的猪成纤维细胞,荧光显微镜下观察转染效果,G418抗性筛选重组细胞;RT-PCR方法检测目的基因的表达.结果表明,通过酶切以及测序鉴定得到的重组载体pIRES2一ZsGreenl-opLA构建成功;荧光显微镜下观察,转染了plRES2-ZsGreenl-opLA和pIRES2一ZsGreenl空载体的细胞均发出绿色荧光,且荧光多集中于细胞核;筛选重组细胞的最小G418浓度为400ng/μL;RT-PCR法检测到与目的基因大小一致的片段,而未转染组和转染空载体组均未检测到.本实验成功构建真核表达载体pIRES2-ZsGreenl-opLA,并获得稳定表达目的基因的猪成纤维细胞,该细胞可作为进一步研究转基因克隆猪的供体细胞.李艳玲,王颖,党文庆,郝柱,徐宁迎,张金枝 - 农业生物技术学报文章来源： 万方数据 -
盐酸米诺环素对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β mRNA表达的影响
目的 研究盐酸米诺环素对内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)mRNA表达的影响.方法 培养人牙周膜成纤维细胞,实验分为5组:对照组(未加药品)、模型组(加入10 μg/mL LPS)、低剂量干预组(加入10 μg/mL LPS和50 μg/mL盐酸米诺环素)、中剂量干预组(加入10 μg/mL LPS和100μg/mL盐酸米诺环素)、高剂量干预组(加入10 μg/mL LPS和200 μg/mL盐酸米诺环素).实时荧光定量PCR检测盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1β mRNA表达的影响.结果 IL-1β mRNA相对表达量:模型组高于对照组,对照组高于3个剂量干预组,其差异均有统计学意义(P<0.01);但高剂量干预组、中剂量干预组、低剂量干预组3组间的相对表达量,组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 盐酸米诺环素能够降低LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1β mRNA的表达,这可能是盐酸米诺环素治疗牙周炎的作用机制之一;本研究未发现盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的干预作用与药物剂量之间存在正相关关系.邱枫,段昌华,冷颖,赵旭东,朱志平 - 广东牙病防治文章来源： 万方数据 -
胎盘组织HMGB1免疫组化染色条件的优化
研究显示,HMGB1作为晚期炎症介质,在感染性早产孕妇的血清、胎盘等中的表达明显升高[1].胎盘组织内细胞丰富,尤其是红细胞、炎细胞等,对HMGB1的免疫组化染色干扰较大.本文旨在从抗原修复、消除非特异性染色方面优化HMGB1的免疫组化染色.1材料与方法1.1材料与试剂选取江苏大学附属医院2012~2013年因慢性绒毛炎早产的胎盘10例;HMGB1(1︰1 000,宜百康公司);柠檬酸缓冲液(p H 6.0)、EDTA缓冲液(p H 9.0)、EnVision显色系统及2.5 L高压锅均购于福州迈新公司.李梅,孙亚军,赵小辉,吴建农 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
程序性坏死特异性抑制剂-1对创伤失血性休克大鼠肝脏保护作用的研究
目的 探讨程序性坏死特异性抑制剂-1(Nec-1)对创伤失血性休克大鼠的肝脏保护作用.方法 采用左下肢股骨、胫骨骨折及腹部软组织损伤并失血/再灌注的方法制备大鼠创伤失血性休克模型.选择雄性SD大鼠,22只按随机数字表法分为模型组和Nec-1组,每组11只,观察72 h死亡率.72只同法随机分为假手术组、模型组、Nec-1组,每组24只.假手术组仅麻醉和分离、结扎血管,不进行创伤、失血、再灌注;Nec-1组于再灌注前5 min经股静脉给予1 mg/kg Nec-1;模型组给予等体积溶剂.于再灌注后2、4、8h采集各组血清和肝组织,用全自动生化仪检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)的水平;光镜下观察肝组织病理学改变;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA表达;蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肝组织受体相互作用蛋白酶-1/3(RIP1/RIP3)的蛋白表达.结果 Nec-1组大鼠72 h死亡率较模型组明显降低[18.18%(2/11)比63.64%(7/11),P=0.040].模型组2h血清ALT、AST即较假手术组明显升高[ALT(U/L):110.21 ±22.32比80.98±19.94,AST (U/L):364.29±64.83比279.76±70.64,均P<0.05],8h达高峰[ALT(U/L):387.41±47.11比82.76±22.44,AST(U/L):973.35±77.51比261.49±52.03,均P<0.01].Nec-1组血清ALT、AST水平较模型组明显降低[ALT(U/L)4 h:144.64±33.79比213.96±36.21,8 h:159.48±43.57比387.41 ±47.11;AST(U/L)4 h:398.78±59.48比630.61±59.93,8 h:427.38±80.75比973.35±77.51,均P<0.01].光镜下模型组大鼠肝窦扩张、淤血,肝细胞变性、坏死,大量炎性细胞浸润;Nec-1组肝组织损伤程度明显减轻.模型组肝组织TNF-α、IL-1β的mRNA表达和RIP1、RIP3的蛋白表达随时间延长呈逐渐升高趋势;给予Nec-1后各时间点TNF-α、IL-1β的mRNA表达均较模型组明显降低,以8h最为明显(TNF-α mRNA:1.457±0.081比2.317-0.062,IL-1β mRNA:0.690-0.087比1.812±0.112,均P<0.01),而肝组织RIP1、RIP3的蛋白表达与模型组相比差异无统计学意义(RIP1蛋白8 h:0.561±0.033比0.587±0.036,RIP3蛋白8 h:0.976±0.040比1.044±0.115,均P>0.05).结论 Nec-1对创伤失血性休克大鼠肝脏具有明显的保护作用,具体机制需进一步深入研究.张立亚,崔尧丽,王兵,于金宝,王林林,王玉亮,王勇强 - 中华危重病急救医学文章来源： 万方数据 -
血浆碱性成纤维细胞生长因子预测TACE治疗肝细胞癌的疗效
目的 探讨血浆碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在肝细胞癌(HCC)患者TACE术后的变化,评价这种趋势与疗效的关系.方法 对49例HCC行TACE,于术前及术后4周进行血浆bFGF、肝功能及CT检查.将术后4周血浆bFGF下降≥TACE术前bFGF的20%者纳入下降组,否则纳入未下降组.将TACE术后4周CT示肿瘤坏死区域面积≥肿瘤总面积的50%定义为肿瘤缓解.结果 术前肿瘤直径≥5 cm或合并乙型肝炎者bFGF较高.术后4周血浆bFGF下降组共16例,其肿瘤缓解率高于未下降组(P<0.05).结论 HCC患者的血浆bFGF可能是预测TACE疗效的指标之一.TACE术后血浆bFGF下降的HCC患者更易发生肿瘤缓解,且其生存期明显延长.禹娴怡,陆骊工,李勇,胡宝山,邵培坚 - 中国医学影像技术文章来源： 万方数据 -
扶肾降浊方含药血清对肾小管间质损害大鼠成纤维细胞TGF-β1/Smads信号转导通路的影响
目的:探讨扶肾降浊方对系膜增生性肾小球肾炎(Ms PGN)大鼠肾小管间质损害的疗效机制.方法:采用扶肾降浊方水溶液灌胃干预Wistar大鼠常规制备含药血清;在Ms PGN动物模型基础上,延长造模时间至20周,使其自然发展为肾小管间质损害模型,体外培养12、16和20周模型大鼠间质成纤维细胞;采用real-time PCR和Western blotting法检测扶肾降浊方含药血清对病理状态间质成纤维细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3和Smad7 mRNA及蛋白表达的影响.结果:Ms PGN大鼠间质成纤维细胞TGF-β1和Smad3 mRNA和蛋白表达上调,Smad7 mRNA和蛋白表达下调.扶肾降浊方含药血清随着给药周期的延长可部分逆转Ms PGN间质损害造成的上述mRNA和蛋白表达异常.结论:扶肾降浊方含药血清对Ms PGN大鼠间质成纤维细胞保护作用可能与调节TGF-β1/Smads信号转导通路有关.李春雨,苏玮莲,魏晓露,李国霞 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
MicroRNA-16对类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞增殖、侵袭及细胞因子分泌的影响
目的:研究microRNA-16(miR-16)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者滑膜成纤维细胞(rheumatoid arthritis synovial fibroblasts,RASFs)增殖、侵袭及细胞因子分泌的影响.方法:体外分离培养RASFs,脂质体转染化学合成的miR-16 mimic或miR-16抑制剂,分别采用MTT法、Transwell小室法和流式细胞术检测其对RASFs增殖、侵袭及凋亡的影响;RT-PCR和Western blotting检测miR-16对RASFs基质金属蛋白酶3/13(matrix metalloproteinase 3/13,MMP3/13)及白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)表达的影响.结果:增殖实验结果表明miR-16可显著抑制RASFs的增殖;细胞侵袭结果表明miR-16可显著抑制RASFs的侵袭;流式细胞术检测发现miR-16对RASFs凋亡无显著影响;miR-16可下调MMP3/13及IL-1β的表达水平.结论:miR-16在RA的发生中起着重要作用,它可能通过下调MMP3/13及IL-1β的表达抑制RASFs增殖和侵袭.这为进一步研究miR-16在RA中的作用机制奠定了基础.史栋梁,史桂荣 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据
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