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丹参果糖磷酸酶基因的克隆和功能研究

丹参是著名的药用植物,在中国、日本、美国和欧洲国家被广泛地用于心脑血管系统疾病的治疗.笔者首次从丹参中克隆出了一个新的果糖磷酸酶基因,并将其命名为SmFBA,GenBank编号为FJ540907.SmFBA的cDNA全长含有1 390个核苷酸,包含一个完整的1 065 bp的开放阅读框,编码355个氨基酸残基.SmFBA基因全长含有3个外显子和2个内含子.生物信息学分析显示SmFBA蛋白预测的等电点为5.60,预测的分子量为37.78 ku,和其他植物物种中果糖磷酸酶具有很高的序列同源性.用Southern杂交技术显示SmFBA在丹参基因组中呈低拷贝.该基因在丹参根、茎、叶等器官都表达,根中表达量最高.体外重组表达的SmFBA在大肠杆菌中具有酶活性,并且能够提高大肠杆菌的耐盐性.这项研究进一步拓展了人们对高等植物糖酵解途径的认识.

谭何新,刘颖,张磊 - 药学实践杂志

文章来源：万方数据

钙调神经磷酸酶在cTnI基因Asp128Tyr突变致心肌肥大中的作用

目的:探讨钙调神经磷酸酶(CaN)在心肌钙蛋白I(cTnI)基因第128位天冬氨酸→酪氨酸(Asp128Tyr)突变致心肌肥大中的作用.方法:乳鼠心肌细胞,以心钠素(ANF)、脑钠肽(BNP)mRNA表达作为心肌肥大指标,观察含cTnI Asp128Tyr突变基因的腺病毒转染对心肌细胞的作用,并观察CaN抑制剂环孢菌素A(CsA)或FK506对突变基因转染的影响.Real-time PCR检测ANF、BNP和CaN mRNA表达变化,同时行CaN活性测定.结果:转染含cTnI Asp128Tyr突变基因腺病毒的心肌细胞增大,胞内ANF和BNP的mRNA表达较空白对照组、不含任何目的基因的阴性对照腺病毒转染组和转染含野生型cTnI基因的腺病毒组增高(P<0.05).与含野生型cTnI基因的腺病毒组相比,转染含cTnI Asp128Tyr突变基因的腺病毒组在ANF和BNP mRNA表达升高的同时存在CaN活性升高和CaN mRNA表达上调(P<0.05).转染含cTnI Asp128Tyr突变基因的腺病毒并用CsA或FK506干预后,心肌细胞缩小,胞内ANF和BNP mRNA表达量较单纯转染含cTnI Asp128Tyr突变基因的腺病毒组降低(P<0.05),同时心肌细胞内CaN活性显著下降(P<0.05),CaN mRNA表达下调(P<0.05).结论:cTnI Asp128Tyr突变可引起心肌细胞肥大;CaN信号通路参与了cTnI Asp128Tyr突变致心肌肥大过程的调控.

周琴,姚健,朱健华,于小红,盛红专 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

选择性磷酸酶抑制剂Salubrinal对急性百草枯中毒大鼠肺组织细胞自噬和凋亡的影响

目的观察选择性磷酸酶抑制剂Salubrinal治疗对急性百草枯(PQ)中毒大鼠肺组织细胞自噬和凋亡的影响,并探讨其治疗机制.方法将200只Wistar大鼠按计算机生成的随机排列表分为4组,每组50只.一次性灌胃40 mg/kg PQ溶液1 mL制备PQ染毒模型,之后每日1次腹腔注射1 mL生理盐水(NS);对照组一次性给予1 mL NS灌胃,之后每日2次腹腔注射1 mL NS;Sal 0.5和Sal 1.0组分别于PQ染毒后1、3、5d腹腔注射0.5 mg/kg或1.0 mg/kg Salubrinal 1 mL,每日1次.染毒后7d取肺组织,苏木素-伊红(HE)染色后观察肺组织形态学改变;免疫组化染色观察肺组织自噬相关蛋白LC3-Ⅱ阳性表达;蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肺组织LC3-Ⅱ和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表达.结果 HE染色结果显示:PQ染毒组肺组织结构部分破坏,肺泡壁塌陷,肺泡腔扩大,局部炎性细胞浸润,肺泡隔显著增厚,局部明显出血;Sal 0.5组和Sal 1.0组肺组织病理改变较PQ染毒组明显减轻.免疫组化染色显示:与对照组比较,PQ染毒组、Sal 0.5组和Sal 1.0组肺组织LC3-Ⅱ阳性表达均明显降低(A值:78.34±10.71、76.52±8.21、77.48±9.11比117.58±15.26,均P<0.05);而后3组间两两比较差异无统计学意义(均P>0.05).Western Blot结果显示,与对照组比较,PQ染毒组肺组织LC3-Ⅱ、caspase-3蛋白表达均明显升高[LC3-Ⅱ(A值):0.22±0.05比0.14±0.03,caspase-3(A值):0.115 ±0.013比0.023±0.006,均P<0.05].与PQ染毒组比较,Sal 0.5组和Sal 1.0组肺组织LC3-Ⅱ、caspase-3蛋白表达均明显降低[LC3-Ⅱ(A值):0.19±0.05、0.18±0.04比0.22±0.05,caspase-3(A值):0.078±0.012、0.076±0.010比0.115±0.013,均P<0.05].结论急性PQ中毒大鼠肺组织发生了内质网应激-自噬;Salubrinal可降低急性PQ中毒大鼠肺组织发生细胞自噬,抗细胞凋亡,从而起到治疗作用.

李海峰,邢宝鹏,权玉兰,孙明莉 - 中华危重病急救医学

文章来源：万方数据

MicroRNA-3666调节白血病细胞 PTEN 基因的表达

目的:探讨白血病细胞中microRNA-3666( miR-3666)对第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因( PTEN)表达的调控作用。方法:qRT-PCR检测miR-3666在正常人外周血单个核细胞、不同类型白血病细胞系以及临床初诊未治的不同类型白血病细胞中的表达差异,利用TargetScan在线分析软件预测miR-3666潜在靶基因PTEN后,构建含有靶基因野生型3’端非翻译区域(3’UTR)及突变型3’UTR(缺失了整段预测的miR-3666结合序列)的双萤光素酶报告基因质粒,采用脂质体Lipofectamine 2000包裹双萤光素酶重组质粒及miR-3666模拟体或阴性对照,共转染HEK293T细胞,应用双萤光素酶检测试剂盒测定萤光素酶活性。 FAM标记的miR-3666抑制体和阴性对照分别核转染至K562细胞,FACS检测转染效率,并采用 Western blotting 检测PTEN蛋白的表达。结果:miR-3666在人白血病细胞系及原代白血病细胞中的表达明显高于正常人外周血单个核细胞,尤其高表达于K562细胞系及原代慢性粒细胞白血病细胞中;双萤光素酶报告基因测定系统验证PTEN是miR-3666的潜在靶基因;K562细胞中下调miR-3666后,Western blotting检测结果显示PTEN蛋白显著上调。结论:白血病细胞中miR-3666的表达上调,下调miR-3666后可以促进靶基因PTEN的表达,miR-3666有可能成为白血病治疗的新靶点。

倪芳,张玉侠,汪心怡,赵华,汪思应 - 中国病理生理杂志

文章来源：万方数据

受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O基因甲基化与乳腺癌细胞株化疗敏感性的关系

目的探讨受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O( PTPRO)基因不同甲基化状态的乳腺癌细胞株对紫杉醇的敏感性。方法应用甲基化特异性PCR,检测MCF-7、MDA-MB-231和Hs578t乳腺癌细胞株中PTPRO基因启动子CpG岛甲基化状态,并用 RT-PCR法检测 PTPRO mRNA 表达。采用 MTT 法检测MCF-7、MDA-MB-231和Hs578t乳腺癌细胞株对0.0006、0.0030、0.0150、0.0750、0.3750、1.8750、9.3500、46.7500、234.0000 mmol/L紫杉醇的敏感性,以及对细胞株进行去甲基化实验后紫杉醇抑制率的改变。两组间均数比较采用配对t检验;在检验方差齐性的前提下,多组间均数比较用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD检验。结果乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞株中PTPRO基因甲基化,而乳腺癌Hs578t细胞株中PTPRO基因无甲基化。用紫杉醇处理细胞株后再检测PTPRO启动子甲基化情况,结果显示MCF-7、MDA-MB-231细胞株PTPRO基因甲基化率明显降低[(0.861±0.109)比(0.037±0.019),t=23.326,P=0.000;(0.758±0.114)比(0.086±0.010),t=16.109,P=0.000]。并且,MCF-7、MDA-MB-231细胞株经5-杂氮脱氧胞嘧啶( DAC)处理后,PTPRO mRNA表达水平明显高于DAC处理前[(0.033±0.006)比(0.166±0.016),t=28.338, P=0.000;(0.052±0.006)比(0.587±0.087),t=17.257, P=0.000],其表达水平与启动子CpG 岛甲基化状态有关。紫杉醇对MDA-MB-231、MCF-7及Hs578t细胞株的半数抑制浓度(IC50)分别为8.52、5.87和4.52 mmol/L。不同浓度紫杉醇对Hs578t细胞株的抑制率均比 MCF-7和 MDA-MB-231细胞株高( F=129.93、182.40、46.26、49.26、33.60、80.31、160.05、69.96、79.98,P均=0.000)。去甲基化实验显示:DAC处理MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞株后,不同浓度紫杉醇对细胞株的抑制率与处理前相比,差异均有统计学意义( MCF-7:t=14.195、8.328、7.042、6.385、5.450、8.557、4.788、13.351、11.887, P 均<0.050; MDA-MB-231:t=16.324、30.443、9.177、12.694、9.528、11.912、10.260、18.109、3.754, P均<0.050)。结论 PTPRO基因甲基化是乳腺癌发生、发展过程中的常见现象;紫杉醇可影响PTPRO基因启动子CpG岛的甲基化状态,并且对无PTPRO基因甲基化的乳腺癌细胞株杀伤率更高;PTPRO基因甲基化状态的改变影响乳腺癌细胞株对紫杉醇的敏感性。

李少英,吴华聪,王辉林,王维,陈静 - 中华乳腺病杂志(电子版)

文章来源：万方数据

果糖二磷酸钠联合环磷腺苷治疗轮状病毒致小儿心肌损害的疗效

目的:探讨果糖二磷酸钠注射液联合环磷腺苷注射液治疗轮状病毒致小儿心肌损害的临床疗效.方法:选择轮状病毒肠炎合并心肌损害患儿153例,随机分为A、B、c三组,每组51例.在常规治疗基础上A组予以果糖二磷酸钠注射液静脉滴注,B组予以环磷腺苷静脉注射液滴注,c组予以二者联合用药,治疗7d后根据治疗前后心肌酶谱结果对比观察三组治疗效果.结果:A、B、C三组治疗后心肌酶谱主要指标CK-MB、cTnI均有明显下降,而c组的CK.MB、crrnI较A组、B组下降更明显,差异有统计学意义(P〈0.05).结论:果糖二磷酸钠注射液联合环磷腺苷注射液治疗轮状病毒致小儿心肌损害效果明显,值得临床推广应用.

李智,周云,舒洪娟 - 儿科药学杂志

文章来源：万方数据

玉米DDGS替代豆粕对草鱼生长性能血清化指标和免疫指标的影响

试验旨在研究玉米DDGS替代豆粕对草鱼(ctenopharvngodon idellus)幼鱼生长性能、血清生化指标和免疫指标的影响,选用360尾初重为(5.52±0.09)g的草鱼苗,随机分为6个处理组,分别设为D0、Dl、D2、D3、D4、D5组,每个处理组设3个重复,每个重复20尾,分别投喂用0、10%、20%、30%、40%、50%玉米DDGS替代豆粕的6种等氮饲料,饲养3周:结果表明:玉米DDGS添加量在30%以下时对草鱼生长性能没有显著影响(P>0.05);添加量在40%~50%时草鱼生长性能显著下降(P<0.05),与对照组比较各试验组血清生化指标无显著差异(P>0.05);免疫指标试验组一氧化氮、超氧化物歧化酶与对照组相比无显著差异(P>0.05);总抗氧化能力50%组显著高于0、10%和30%组(P<0.05);20%组丙二醛含量显著低于对照组(P<0.05);试验组碱性磷酸酶活性与对照组相比有显著差异(P

黄文庆,王国霞,罗志锋,林佳男,李国立,黄燕华 - 饲料工业

文章来源：万方数据

蛋白磷酸酶2A可用于预测脓毒症

单核细胞受到内毒素刺激后,蛋白磷酸酶2A(PP2A)会下调c-Jun氨基末端激酶(JNK)的表达,然而,目前尚不清楚脓毒症患者是否也会发生类似变化.最近,浙江大学医学院研究人员进行了相关研究,以了解PP2A/JNK通路是否参与调节脓毒症的发生发展以及PP2A是否可作为脓毒症的生物标志物.

孟祥熙,罗红敏 - 中华危重病急救医学

文章来源：万方数据

磷酸肌酸钠对小儿EB病毒感染后心肌的保护作用

目的:观察磷酸肌酸钠对小儿EB病毒感染后心肌的保护作用.方法:EB病毒感染后心肌磷酸肌酸激酶同工酶(CK-MB)及肌钙蛋白T(c Tn T)异常患儿80例,随机分为对照组(40例)和治疗组(40例).对照组给予常规抗病毒及对症支持治疗,治疗组在对照组治疗基础上加用磷酸肌酸钠,比较两组患儿治疗前后心肌CK-MB、c Tn T及心电图的变化.结果:治疗前治疗组CK-MB为(50.48±16.43)μg/L、c Tn T为(0.070±0.026)ng/m L,对照组CK-MB为(49.96±17.09)μg/L、c Tn T为(0.068±0.031)ng/m L,治疗后治疗组CK-MB为(20.79±7.14)μg/L、c Tn T为(0.008±0.001)ng/m L,对照组CK-MB为(38.48±11.61)μg/L、c Tn T为(0.012±0.002)ng/m L,治疗组治疗后与治疗前比较及治疗后两组间比较差异均有统计学意义(P<0.01).治疗前治疗组心电图异常21例,对照组心电图异常19例,治疗后治疗组心电图异常5例,对照组异常12例,治疗组治疗后与治疗前比较(P<0.01)及治疗后两组间比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:磷酸肌酸钠可使小儿EB病毒感染后血清CK-MB、c Tn T及心电图更好的得到恢复,使心肌细胞得到更好的保护.

温晓滨,袁程远,何亚薇,李磊,冯斌 - 儿科药学杂志

文章来源：万方数据

氨基多糖对RANKL诱导的RAW264.7向破骨细胞样细胞分化的抑制作用观察

目的探讨氨基多糖(GAGs)对核因子KB受体活化因子配体(RANKL)诱导的RAW264.7向破骨细胞分化的影响.方法采用RANKL单独诱导RAW264.7细胞(对照组),分别采用不同浓度肝素、高分子量透明质酸(HA)、硫酸软骨素(CS)C联合RANKL诱导RAW264.7分化(分别为肝素组、HA组、CSC组).细胞培养第3、5、7、8天采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色法(TRAP)检测破骨细胞样细胞并计数;ELISA法检测第8天各组培养液上清中抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAP5b)含量.结果与对照组比较,诱导第3、5、7、8天,破骨样细胞数均明显减少(P<0.05);其中肝素组随浓度的增大而减少(P<0.05).第8天培养液中TRAP5b含量与细胞计数结果相符.结论氨基多糖对RANKL诱导下RAW264.7向破骨细胞样细胞的分化具有抑制作用;肝素的作用具有剂量依赖性.

梁素霞, von den Hoff JW, 陈卓, 许庆安 - 山东医药

文章来源：万方数据