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急性缺氧肺动脉平滑肌细胞线粒体活性氧变化的观察
目的:观察急性缺氧时大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)线粒体活性氧(ROS)的变化.方法:分离并培养大鼠PASMCs,常氧(35℃、5%CO2、21%O2、74%N2)和急性缺氧(35℃、5%CO2、1%O2、94%N2)条件下,利用分子探针chloromethyl dichlorodihydrofluorescein diacetate(CM-H2DCF/DA)和Redox Sensor Red CC-1通过激光共聚焦显微镜来检测细胞内ROS的生成量;直接分离线粒体,用线粒体电子传递链(ETC)复合物抑制剂通过荧光分光光度计检测线粒体ROS及其生成的具体位点.结果:急性缺氧细胞内ROS生成明显增加,其中缺氧组H2O2较常氧组增加3.35倍(P<0.01),而H2O2及O-·2较常氧组增加1.61倍(P<0.01).与缺氧组比,用线粒体ETC复合物I抑制剂MPP、复合物II抑制剂NPA和TTFA及复合物III前泛半醌位点抑制剂myxothiazol都能显著降低缺氧时PASMCs胞内ROS的生成量(分别降低60%、73%、75%和61%,P<0.01);而复合物III后泛半醌位点抑制剂antimycin A及复合物IV抑制剂Na N3对ROS的生成无明显影响(升高13%和9.1%,P>0.05).直接检测线粒体ROS与测定细胞内ROS结果一致.结论:急性缺氧PASMCs线粒体ROS(主要是H2O2)的生成量明显增加;其生成位点主要是线粒体ETC复合物Ⅰ、Ⅱ及III前泛半醌位点,而与复合物III后泛半醌位点和IV位点无明显关系.杨朝,耑冰,张丽萍,赵霞,张建银,葛利军,吴昌归 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
精液处理前后精子的DNA损伤与活性氧之间的关系研究
目的 探讨精液处理前后精子DNA损伤程度的改变及与过氧化氢(H2O2)、过氧化氢酶(CTA)之间的关系.方法 接受体外受精-胚胎移植(IVF-ET)助孕且进行常规IVF受精的夫妇75例,男性患者作为研究对象.在IVF当日精液采集后0.5h留取精液标本1ml,剩余精液以Pure Sperm梯度离心法进行精液处理,于处理后将精子浓度调整为10*106/ml,留取标本1ml.采用精子吖啶橙染色方法测定精子DNA损伤,H2O2及CTA含量测定采用分光光度比色测定法.结果 精液处理后的精子DNA损伤程度与处理前相比明显降低(P<0.05),H2O2浓度亦显著降低(P<0.05),CTA浓度变化不显著.精子DNA损伤率在精液处理前及处理后均与H2O2浓度呈正相关(r值在处理前后分别为0.684和0.753,P<0.05),精子DNA损伤率在精液处理前与CTA浓度呈负相关(r=-0.476,P<0.05),而处理后两者无相关性(r=-0.087,P>0.05).结论 高过氧化物水平可导致精子DNA损伤,精液优化处理可以使精子脱离高活性氧的环境,并且减少DNA损伤的精子.张娜,张耀恒,张轶,赵世彬,乜照燕,刘敬泽 - 中国男科学杂志文章来源： 万方数据 -
瘦素对胰岛素抵抗状态下人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的影响
目的 观察瘦素对胰岛素抵抗状态下人视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化损伤的影响.方法 体外培养的人RPE细胞随机分为正常对照组和胰岛素抵抗组.分别加入0、10、100 ng/ml瘦素干预24、48、72 h.2 ',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞内活性氧(ROS)的产生情况;免疫细胞化学法检测细胞内8-羟基-2'-脱氧鸟嘌呤(8-OHdG)的表达量;蛋白质免疫印迹法检测细胞浆中8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶1(hOGGl)的表达量.结果 干预后24、48、72 h,正常对照组、胰岛素抵抗组RPE细胞ROS(正常对照组:F=37.136、37.178、49.634;胰岛素抵抗组:F=9.822、28.881、71.150)、8-OHdG表达量(正常对照组:F=88.643、390.920、1039.276;胰岛素抵抗组:F=273.311、299.155、82.237)均随瘦素浓度增加而增加,hOGG1的表达量(正常对照组:F=470.062、1073.113、295.456;胰岛素抵抗组:F=240.032、592.389、527.760)随瘦素浓度的增加而递增,差异均有统计学意义(P<0.05).正常对照组、胰岛素抵抗组在相同浓度瘦素干预下,随干预时间延长,胰岛素抵抗组RPE细胞8-OHdG表达量呈现高于正常对照组的趋势.干预后24 h,胰岛素抵抗组RPE细胞hOGG1表达量与正常对照组比较,差异无统计学意义(F=23.392,P>0.05);干预后72 h,胰岛素抵抗组PRE细胞hOGG1表达量低于正常对照组,差异有统计学意义(F=129.394,P<0.05).在相同浓度瘦素干预下,随干预时间延长,RPE细胞hOGG1表达量呈现先升高后降低的趋势.干预后48 h,正常对照组(F=83.673、268.000、373.492)、胰岛素抵抗组(F=49.021、304.293、294.293)RPE细胞hOGG1表达量均高于干预后24、72 h RPE细胞hOGG1表达量,差异有统计学意义(P<0.05).结论 正常状态及胰岛素抵抗状态下瘦素能引起人RPE细胞氧化损伤,随着瘦素浓度的增加、作用时间的延长氧化损伤的程度呈加重趋势;氧化损伤的修复随着时间的延长呈先强后弱的趋势,随着瘦素浓度的增加而呈增强的趋势.罗云枫,倪焰,栾洁 - 中华眼底病杂志文章来源： 万方数据 -
硫化氢对缺氧诱导的大鼠皮层神经元损伤的保护作用
目的:探讨硫化氢(H2S)对缺氧诱导的皮层神经元损伤的影响及作用机制.方法:将SD大鼠皮层神经元在2% O2、5% CO2、93%N2、37℃培养箱培养24h,建立细胞缺氧模型.以硫氢化钠(NaHS)作为H2S的供体,应用CCK-8分析细胞活性;采用荧光探针DCFH-DA检测神经元活性氧(ROS)含量;用Rh123染色测定线粒体膜电位(MMP);采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒分析神经元LDH释放率,反映神经元的损伤情况.结果:(1)缺氧引起神经元ROS含量和LDH释放率升高,NaHS预处理可抑制缺氧所致神经元ROS含量和LDH释放率的升高;(2)缺氧降低神经元MMP和细胞活性,NaHS和活性氧清除剂NAC预处理均显著抑制缺氧所致神经元MMP和细胞活性的降低.结论:缺氧增加神经元ROS含量,降低神经元MMP和细胞活性,而H2S通过其抗氧化作用,减轻缺氧所致神经元的损伤.魏楚蓉,刘路宽,田立兵,余艳贞,曾九江,白帅,毛慕华,文秀华,罗友根 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
活性氧在多能干细胞中的作用
多能干细胞是具有自我更新能力和能向体内多种细胞分化的一类细胞群体.活性氧(reactive oxy gen species,ROS)是反应活性极强的代谢分子.虽然过多的ROS会对干细胞产生毒性,引起干细胞的衰老和凋亡,但是ROS的调节在维持干细胞的干性和分化中起重要作用.ROS在不同的干细胞中发挥的作用也不尽相同.深入了解ROS如何调控干细胞的功能将有助于加强干细胞在转化医学方面的应用.本文将以胚胎干细胞和诱导性多能干细胞为主,对近年来ROS调节多能干细胞功能的研究进行简要综述.徐洁,刘俊许,康雪玲,蒋丽,周忠伟,陈思锋,孟丹 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
活性氧调控Bcl-2、Bax表达参与热打击后人脐静脉内皮细胞凋亡的研究
目的 观察热打击后人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内活性氧(ROS)爆发性增高调控Bcl-2、Bax表达对凋亡的影响,探讨重症中暑所致血管内皮损害的发病机制.方法 建立HUVEC热打击模型.将细胞分别置于39、41、43 ℃细胞培养箱中进行热打击2h,然后置于37 ℃、5% CO2细胞培养箱后继续孵育24 h;在43 ℃热打击前以10μmol/L ROS特异性清除剂MnTMPyP预处理lh进行干预.对照细胞仅置于37 ℃、5%CO2细胞培养箱中孵育.应用二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法及二氢乙啶(DHE)法检测细胞内ROS表达;使用Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Bcl-2、Bax的mRNA表达;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测Bcl-2、Bax及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的蛋白表达;同时检测MnTMPyP对热打击后细胞凋亡的影响.结果 与对照组比较,39℃热打击对细胞凋亡无影响,随着热打击温度增加至41℃、43℃时,细胞存活率呈进行性下降,ROS爆发性增加,Bax的mRNA和蛋白表达以及caspase-3蛋白表达显著增加,Bcl-2的mRNA和蛋白表达显著降低,且呈温度依赖性,其变化以43℃热打击最为明显[细胞存活率:(46.00±4.00)%比(96.33±1.53)%,t=20.164,P=0.001;ROS(荧光相对值):400.67±12.10比99.33±4.04,t=32.909,P=0.001;Bax mRNA(A值):3.03±0.15比1.00±0.00,t=23.056,P=0.001;Bax蛋白(灰度值):3.97±0.21比1.00±0.00,t=24.684,P=0.001;caspase-3蛋白(灰度值):4.80±0.20比1.00±0.00,t=32.909,P=0.001;Bcl-2 mRNA(A值):0.42±0.30比1.00±0.00,t=33.072,P=0.001;Bcl-2蛋白(灰度值):0.39±0.25比1.00±0.00,t=42.212,P=0.001].MnTMPyP预处理可明显逆转43℃热打击对HUVEC的损害,可明显抑制Bax、caspase-3表达,上调Bcl-2表达[BaxmRNA(A值):2.00±0.20比3.33±0.25,t=7.184,P=0.002;Bax蛋白(灰度值):2.03±0.25比3.23±0.25,t=5.840,P=0.004;caspase-3蛋白(灰度值):2.07±0.21比5.00±0.20,t=17.600,P=0.001;Bcl-2 mRNA(A值):0.71±0.40比0.42±0.26,t=8.126,P=0.002; Bcl-2蛋白(灰度值):0.57±0.31比0.40±0.06,t=5.091,P=0.007].结论 热打击后HUVEC内ROS爆发性增高在凋亡中发挥了重要作用,其机制与调控凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达有关;血管内皮细胞凋亡可能是重症中暑的发病机制之一.李莉,古正涛,刘志锋,苏磊 - 中华危重病急救医学文章来源： 万方数据 -
丁苯酞可减轻缺氧缺糖条件下血管内皮细胞的线粒体损伤
目的:探讨丁苯酞(DL-3-n-butylphthalide,NBP)对缺氧缺糖(oxygen-glucose deprivation,OGD)条件下内皮细胞中线粒体的保护作用及相关机制.方法:对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)予以OGD损伤,使用MitoTracker Green对线粒体进行定位并观察线粒体形态的变化.使用MitoSOX Red标记线粒体内的活性氧簇(reactive oxygen species,ROS),免疫荧光法观察NBP对OGD条件下细胞线粒体内ROS产生的影响.使用SOD活性试剂盒检测NBP对OGD条件下HUVECs内SOD活性的影响.结果:NBP明显减少了OGD诱导后内皮细胞中线粒体的断裂,抑制了线粒体内ROS的生成,提高了OGD诱导后细胞内SOD的活性.结论:NBP可能是通过保护OGD条件下内皮细胞线粒体的功能和增加细胞内ROS清除,减少线粒体内ROS生成,最终减轻了线粒体损伤.解龙昌,张波,高庆春,傅贤,李又福,刘红英,魏欢 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
GPX3表达与消化系肿瘤关系的研究进展
血浆型谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase 3, GPX3)是人体抗过氧化物酶体系中的重要组成部分,在人体清除过氧化氢及脂质过氧化物等活性氧成分中起重要作用.目前研究表明,GPX3表达异常与恶性肿瘤的发生、发展有密切关联.因此,GPX3在消化系肿瘤中的表达已成为研究热点,对消化系肿瘤的诊治有重要意义.沈磊,贺远龙,张巍巍,耿长新 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
急性髓细胞白血病在死盒RNA解旋酶DDX5上的获得性依赖
急性髓细胞白血病(AML)的治疗需要应用对正常细胞和肿瘤细胞都有毒性的药物,而复发性急性髓样白血病对随后的化疗也有抵抗性.因此,需要用对细胞毒性最小的剂量选择性杀死白血病细胞.美国科学家发现,AML依赖于DDX5,抑制DDX5的表达可减缓AML细胞在体外的扩增及体内病情的进展,而对正常的骨髓细胞没有毒性.抑制AML细胞的DDX5表郑媛媛 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
麝香保心丸抗心肌细胞缺氧-复氧损伤活性成分筛选
目的:建立原代心肌细胞缺氧-复氧模型,并对麝香保心丸及其20种血中活性成分进行抗缺氧-复氧损伤的活性筛选。方法取新生(1~3 d)SD乳鼠的心脏,建立原代心肌细胞的缺氧-复氧损伤模型,并采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法进行麝香保心丸及其入血成分的活性筛选。结果麝香保心丸在50μg/ml浓度下具有较好的保护原代心肌细胞缺氧-复氧损伤的作用;人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、蟾毒灵和麝香酮具有较好的保护原代心肌细胞缺氧-复氧损伤的作用。结论麝香保心丸具有抗心肌细胞缺氧-复氧损伤的作用,人参皂苷Rb1、人参皂苷Rb2、蟾毒灵和麝香酮是其主要的有效成分。该研究为麝香保心丸深入的药效和机制研究奠定了基础。韩琳,吕超,李敏,黄慧梅,畅婉琳,彭成成,柳润辉 - 药学实践杂志文章来源： 万方数据
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