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绵羊肺炎支原体标准株Y98外膜蛋白MOP30基因真核表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达
以绵羊肺炎支原体(Mycoplasma oumvipneoniae,MO)标准株Y98基因组为模板,设计1对特异引物,PCR扩增得到798bp的P30目的基因(MOP30),将其定向克隆到pMD19-T Simple载体中进行测序分析.重组质粒进行XbaⅠ/BamHⅠ双酶切并回收目的片段,将目的基因亚克隆入黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein,YFP)表达载体pCAMBIA1300-YFP中构建重组融合表达质粒pCAMBIA1300-MOP30-YFP.双酶切验证后的融合表达质粒转化农杆菌(Agrobacterium)感受态细胞,侵染烟草(tobacco)叶片.通过激光共聚焦成像显微镜(cofocal imagingmicroscope)观察到融合表达的黄色荧光蛋白,Western-blotting试验得到57 000的特异条带,RT-PCR检测到MOP30基因在烟草叶片中转录.MOP30-YFP融合蛋白在烟草中的成功表达,为转基因植物疫苗防治绵羊支原体肺炎奠定了基础.张亚宁,赵利峰,张乐祎,赵宝华 - 中国兽医学报文章来源： 万方数据 -
真核表达载体pIRES2-ZsGreenl-opLA的构建及其在猪成纤维细胞的表达
α-乳清蛋白(α-lactalbumin,α-LA)是哺乳动物乳汁中一种重要的蛋白质,富含机体必需氨基酸和支链氨基酸,其极佳的氨基酸比例、易吸收性以及功能特异性,使得α-LA在婴幼儿个体正常生长中具有重要的意义.本实验旨在构建人α-乳清蛋白真核表达载体pIRES2-ZsGreenl-opLA,将其转染至猪(Sus scrofa)的成纤维细胞,获得稳定表达人仪一LA的细胞.根据猪基因密码子偏爱性优化并合成人α-乳清蛋白基因mRNA序列opLA,并将其定向克隆入pIRES2一ZsGreenl真核表达载体,双酶切及测序方法鉴定重组载体;脂质体介导的方法将载体转染入培养的猪成纤维细胞,荧光显微镜下观察转染效果,G418抗性筛选重组细胞;RT-PCR方法检测目的基因的表达.结果表明,通过酶切以及测序鉴定得到的重组载体pIRES2一ZsGreenl-opLA构建成功;荧光显微镜下观察,转染了plRES2-ZsGreenl-opLA和pIRES2一ZsGreenl空载体的细胞均发出绿色荧光,且荧光多集中于细胞核;筛选重组细胞的最小G418浓度为400ng/μL;RT-PCR法检测到与目的基因大小一致的片段,而未转染组和转染空载体组均未检测到.本实验成功构建真核表达载体pIRES2-ZsGreenl-opLA,并获得稳定表达目的基因的猪成纤维细胞,该细胞可作为进一步研究转基因克隆猪的供体细胞.李艳玲,王颖,党文庆,郝柱,徐宁迎,张金枝 - 农业生物技术学报文章来源： 万方数据 -
真武汤对链脲佐菌素所致大鼠糖尿病肾病的保护作用
目的:探讨真武汤对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及机制。方法:腹腔注射链脲佐菌素( STZ)建立糖尿病肾病大鼠模型,将成模大鼠随机分为糖尿病肾病( DN)模型组和真武汤治疗组(真武组),另设正常组。采用生化、HE染色观察真武汤对糖尿病肾病大鼠肾功能、肾组织形态学变化及脂质过氧化相关参数的作用;采用蛋白免疫印迹方法探讨真武汤对肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和NF-κB表达的影响。结果:模型组大鼠肾系数、24 h尿蛋白定量、血尿素氮、肌酐、血糖和丙二醛(MDA)均显著升高(P<0.05),体重、超氧化物歧化酶(SOD)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)显著降低(P<0.05);真武组大鼠的肾系数、24 h尿蛋白、尿素氮、肌酐、血糖和MDA明显低于模型组(P<0.05),iNOS显著高于模型组(P<0.05);模型组大鼠肾小球肥大、毛细血管基底膜增厚,系膜基质增生,肾小管上皮细胞空泡样变,可见蛋白管型;真武组病变轻于模型组。模型大鼠肾组织α-SMA及NF-κB蛋白的水平明显高于正常组(P<0.05),真武组大鼠肾组织α-SMA及NF-κB蛋白水平明显低于模型组(P<0.05)。结论:真武汤能减轻糖尿病肾病肾脏局部氧化应激反应,改善糖尿病肾病大鼠肾功能,减轻病理损伤,其发挥肾脏保护作用可能与抑制α-SMA及NF-κB蛋白的表达有关。徐中菊,张悦,舒适,张瑞义 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
猪甲状腺激素应答基因SPOTl4(THRSP)的原核表达及其融合蛋白的亲和纯化
甲状腺激素应答基因(thyroid hormone responsive SPOTl4,THR5P)是受甲状腺激素诱导表达的核内基因,参与脂肪合成代谢途径限速酶的转录调控,对动物脂肪生成具有重要的调控作用.为进一步研究猪SPOTl4基因所编码蛋白质的生物学功能,本实验将猪SPOTl4(GenBank登录号:JF951726)的ORF片段与表达载体pET一280ff+)进行重组,获得的重组子pET一280ff+).S14,转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)感受态细胞,重组菌经IPTG诱导,通过SDS.PAGE分析显示,目的蛋白分子量约为20.91kD,且主要以包涵体形式存在,最佳诱导条件是37℃1mmol/LIPTG诱导5h.将获得的包涵体用6xHisNi-NTA纯化柱纯化后,采用Westemblot进一步检测到了21kD目的蛋白的表达.重组质粒pET.280L(+)一S14在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地得到了表达,不仅为SPOTl4基因生物学功能的研究,而且为进一步研究S14蛋白功能,了解脂肪代谢调控机制提供了基础资料.王丛梅,郭豫杰,李宏基,韩立强,李奎,杨国宇 - 农业生物技术学报文章来源： 万方数据 -
弓形虫分泌蛋白ROP2的原核重组表达与免疫反应性鉴定
本研究在大肠杆菌工程菌中重组表达弓形虫棒状体蛋白2 (ROP2),并初步评价其免疫反应性.主要步骤为体外细胞培养速殖子,提取总RNA,反转录获得cDNA,PCR扩增ROP2基因全长,与pET-41 Ek/LIC载体通过基因重组直接连接,在大肠杆菌RosettaTM (DE3) pLysS工程菌中诱导表达重组融合蛋白GST-6×His-ROP2,最后以重组蛋白与人源弓形虫抗血清的Western blotting反应评价rROP2免疫反应性.本研究获得了ROP2全长重组蛋白,初步证明其良好的免疫反应性,为进一步改进弓形虫免疫学诊断方法,研究分泌蛋白与宿主细胞的相互作用奠定了基础.薛峰,黄敏君,洪彩玲,杨英超,甘绍伯,谷俊朝 - 寄生虫与医学昆虫学报文章来源： 万方数据 -
庄子真的反对儒家仁义吗?--兼驳李硬《广废庄论》
晚唐儒者李硬的《广废庄论》对庄子的"虚无"、"天命"、"因任"及"性情"思想提出批评,理路清晰、严谨.但其对"虚无"、"天命"、"性情"的批评没有切中《庄子》要害,在概念厘清上尚有欠缺;对"因任"的批评最值得深入探讨,因为其要害在于庄子是否真的反仁义而倡因任.本文从庄子的问题意识和仁义观出发给予回应,指出庄子反对的是伪仁义,倡导以"真"保证"仁义"的本质,对"仁义"被利用而变"伪"的现象进行纠偏.这一思路与原始儒家重"真"贵"情"的精神实际上并不违背.林光华 - 人文杂志文章来源： 万方数据 -
放射性束物理实验发展现状
近年来随着放射性束流装置的发展,对非稳定核的研究取得了一系列的重大进展.重要的物理发现包括滴线区的晕核与增强的集团结构、非稳定核中的壳演化与新幻数、新的有效相互作用、新的集体运动模式、核反应中的多步过程与强耦合效应等.本文着重从实验探测的角度,对非稳定核基态基本物理量的测量、非稳定核的衰变测量、中低能核反应、快速束流及零度谱学等方面做了概述和分析,特别指出他们在非稳定核研究中作用和新发展.李阔昂,叶沿林 - 核技术文章来源： 万方数据 -
DP1/02株鸭源Ⅰ型副黏病毒F基因真核质粒构建及免疫试验
应用RT-PCR方法从鸭源Ⅰ型副黏病毒DP1/02株中扩增F基因并克隆入pMD18-T载体,经序列测定、分析,DP1/02株F基因与鸡新城疫病毒(NDV)国家标准强毒F48E9株的核苷酸、氨基酸序列同源性均达到99%.随后将F基因克隆入真核表达载体pCI-neo,构建真核表达质粒pCI-F,将阳性质粒体外转染Vero细胞,通过间接免疫荧光对真核质粒的表达进行鉴定,利用pCI-F质粒进行动物试验.结果表明构建的真核表达质粒pCI-F能够在Vero细胞中表达,雏鸭免疫14d后在体内可检测到特异性抗体,二次免疫雏鸭后,对NDV强毒的攻毒保护率为73%.本试验为利用F基因构建的核酸疫苗提供了重要的技术支持.张秀峰,王中华,刘佳旭,刘艳华,母连志,李国江,丁壮 - 中国兽医学报文章来源： 万方数据 -
论工会利益整合-表达及其特点
以现代社会使用的利益整合和利益表达概念对工会利益整合-表达及其特点进行了界定和分析.工会是维护工人利益的组织,对工人的利益进行整合和表达是工会的重要职能,也是工会存在及其发展的基础.作为工会维护工人利益的必要过程和手段,利益整合与利益表达不仅具有主体的同一性,还具有过程的同一性.作为一种组织行为,工会利益整合-表达具有组织化程度高、组织成员数量多、与政党联系紧密等特点.刘勇 - 西北大学学报(哲学社会科学版)文章来源： 万方数据
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