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Ad/Ds系统及其在油菜突变体库构建中的应用策略
随着油菜基因组测序上作的完成和后续完善,油菜功能基因组学必将成为研究热点,如何构建高通量的突变体库则是影响其进展的关键.Ad/Ds(Activator/Dissociation)系统是构建插入型突变体库的理想技术,在水稻(Olyza Sativa)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)等异源植物中应用较广,但在油菜中尚处于起步阶段.文章介绍了Ad/Ds系统的结构特点、转座机理等基本概况,阐述了利用Ad/Ds系统构建植物突变体库的优势及存在的问题.结合模式植物水稻和拟南芥的研究成果,进一步分析了利用Ae/Ds系统构建油菜突变体库的改进策略,并对其在油菜功能基因组研究中的应用前景进行了展望.洪林,闫晓红,刘正富,魏文辉 - 南方农业学报文章来源： 万方数据 -
乙型肝炎病毒X蛋白截短突变体的构建及其对Wnt/13-catenin信号通路转录活性的影响
目的:观察乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)截短突变体在细胞内的定位及其对Wnt/βcatenin信号通路转录活性的影响.方法:采用PCR克隆全长野生型HBx基因,在此基础上,分别构建融合增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因和缺失HBx基因C端49-154aft,、C端85-154aa、N端1-57aa+C端141~154aa、N端1-57aa或N端1-84aa截短突变体的表达载体;激光共聚焦显微镜下观察HBx截短突变体在HEK293细胞中的定位;采用萤光素酶报告系统检测HBx截短突变体对Wnt/[3-catenin信号通路转录活性的影响.结果:(1)成功构建了HBx截短突变体与EGFP基因融合的表达载体.(2)野生型HBx及截短突变体在HEK293细胞中具有不同的定位,其中N端缺失突变体主要定位于细胞核周胞质;c端缺失突变体在胞质胞核中呈均匀分布;N端+C端缺失突变体的定位类似于野生型HBx,主要定位于胞质,呈不均一的粗大颗粒,胞核中也有少量表达.(3)与野生型HBx相比,HBxc端49~154aa、C端85-154Off,、N端1-57aa+c端141~154aa、N端1-57aa和N端1-84aa缺失突变体在Huh7细胞中均使Wnt/β-catenin信号通路的转录活性明显下降,分别下降了78.7%、84.7%、75.7%、93.8%和95,5%.结论:HBx不同截短突变体的细胞定位及对Wnt/β-catenin信号通路转录活性不同,提示HBx的不同功能区对Wnt信号的转录激活发挥着不同的作用.谢青,陈林林,牵治,聂丹,段玉洁,权会琴,唐霓 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
PCR直接测序法与ARMS检测非小细胞肺癌EGFR基因突变
目的 比较PCR直接测序法与蝎形探针扩增阻滞突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS)检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中EGFR基因突变的敏感性.方法 用直接测序发与ARMS法同时检测154例NSCLC中EGFR基因第18、19、20、21外显子的突变情况.结果 男性84例,女性70例,年龄33 ~ 86岁,手术切除标本71例、活检标本79例,其中鳞状细胞癌27例、腺癌121例、腺鳞癌2例;另4例为胸水.测序法32例突变(32/154,20.8%),ARMS法52例突变(53/154,33.8%).两种方法均检测到突变者29例,均无突变者99例,直接测序法检测到突变而ARMS法阴性者3例,反之23例,不一致率差异有显著性(P<0.000 1).结论 检测NSCLC中EGFR突变情况时,ARMS法较直接测序法操作步骤少,突变率高.宿杰阿克苏,侯英勇,刘亚岚,徐晨,张新,黄洁 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
自然种群淡色库蚊钠通道基因全长的克隆及序列分析
本研究采用反转录多聚酶链式反应( RT-PCR)的方法对野外采集的河北种群淡色库蚊的钠离子通道基因进行了克隆和序列分析。得到的克隆序列与GenBank中公布的序列能够吻合,说明成功克隆出淡色库蚊的钠通道基因全长,为抗性突变的研究奠定了基础。本研究在淡色库蚊钠通道基因上发现了多处氨基酸突变(A32T、 T336A、 S342P、 K535E、 L1035F、 N1595S和F1982L)和7处可变剪接。其中,包括经典的抗性突变L1014F ( L1035F)。但这些突变和可变剪接与蚊虫抗性的关系有待进一步研究。赵明惠,冉鑫,董言德,郭晓霞,张映梅,邢丹,吴治明,李春晓,赵彤言 - 寄生虫与医学昆虫学报文章来源： 万方数据 -
联合免疫失败过程中乙型肝炎病毒S 基因突变的母婴配对研究
目的:探讨在当前联合免疫方案下,发生乙肝母婴传播免疫预防失败过程中乙型肝炎病毒( HBV) S基因的突变特征。方法:选择15例分娩免疫失败婴儿的孕妇及其联合免疫前的新生儿和免疫后的7月龄婴儿,将母亲、新生儿和婴儿分别配对,对其外周血中HBV的S基因(包括前 S和S)分2个片段进行PCR扩增测序,对比母亲、新生儿及婴儿3组间HBV基因型、前S和S基因突变率及突变位点的不同。结果:(1)新生儿和婴儿体内HBV的基因型与母亲完全相同。(2)3组2个片段的突变率差异均无统计学意义(P>0.05);同源树簇集分析中,母亲与所分娩的新生儿和婴儿体内HBV均形成各自独立的簇集。(3)突变位点:母亲-新生儿(13对):7例新生儿与母亲体内的HBV存在不同的突变位点(共15个位点);新生儿-婴儿(13对):3例婴儿与新生儿体内的HBV存在不同的突变位点,即nt273A→A/G、nt512C→C/T和nt1139C→A(共3个位点),前2个位于S区的“a”决定簇之外,后1个则在与X编码框重叠的区域;婴儿-母亲(15对):有9例婴儿与母亲体内的HBV存在不同的突变位点(共25个位点),但仅1例是母亲、新生儿和免疫后婴儿均存在不同的突变位点。结论:(1)新生儿及免疫后婴儿体内的HBV均源自于母亲;(2)HBV的S基因在联合免疫前和免疫后均可发生突变,主要发生在联合免疫前,是否与免疫失败有关尚需进一步研究。张培珍,尹玉竹,邓妮,周瑾,侯红瑛 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
锦州市公共气象预报服务业务工作平台
为适应公众气象预报服务业务的需求,提高公众气象服务针对性、及时性、规范性和准确性,满足公众预报实时业务的需求,利用VB和Access数据库知识开发研制了锦州市公共气象预报服务业务工作平台.该平台可实现各种预报信息的调看,预报会商、公众预报、专业预报信息,决策预报的编辑、信息传输和查询,建立历史灾害性天气个例库和灾情库,并实现其查询功能;平台的建设规范了公共气象预报服务的工作流程,提高了预报员工作效率及预报水平.杨桂娟,鄢志宇,郭素杰 - 现代电子技术文章来源： 万方数据 -
基于突变理论的广义生物系统模型的定性分析
根据生物动力学原理和生态毒理学原理,在折叠突变模型的基础上建立了一个受农药控制的广义生物系统模型和相应的扰动模型.由微分方程定性理论对前者的平衡点进行定性分析.同时应用奇异扰动方法来分析后者,并对二者进行比较.利用模型仿真来验证结论的合理性.赵会斌,赵立纯,刘敬娜,吕沙 - 生物数学学报文章来源： 万方数据 -
易感基因突变与遗传性乳腺癌的关系
随着第三代测序技术的发展,学者们对基因突变在癌症发生、发展中的作用进行了广泛的分析.特别是全基因组关联研究(genome-wide association studies,GWAS)的开展,使得学者们能够发现更多的与疾病有关的基因[1].目前,GWAS研究在识别肿瘤和疾病易感基因的研究中扮演着越来越重要的角色.除了广为研究的樊菁,吕勇刚,王廷,巫姜,崔风强,边杰芳,凌瑞 - 中华乳腺病杂志(电子版)文章来源： 万方数据 -
xTAG液相芯片技术用于肺癌EGFR基因突变检测的临床适用性
目的分析肺癌EGFR基因第18~21号外显子突变,以Sanger测序法为参照,探讨x TAG液相芯片用于临床样本检测的适用性.方法随机选择1 139例Ⅰ~Ⅳ期肺癌组织标本,提取DNA,分别采用x TAG液相芯片法和Sanger测序法检测EGFR基因第18~21号外显子突变情况,评价x TAG液相芯片法检测的敏感性和特异性.结果液相芯片法:共1 134例患者获得基因突变检测结果,Sanger测序法:共1 105例患者获得基因突变检测结果,检测成功率分别为99.56%和97.01%.以Sanger测序法为参照,x TAG液相芯片法检测的敏感性和特异性分别为99.59%和94.54%,两种方法均检出少数样本存在双外显子突变.两种方法检测出的突变型别完全吻合.结论采用x TAG液相芯片法可有效检测肺癌EGFR基因突变,实现突变分型,且相对测序法更方便、高效,适合临床推广应用.郭元杰,汪威,付莎,刘芳,郭婧,邵建永 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
枯草芽孢杆菌紫外诱变异甘露聚糖酶基因突变的研究
异甘露聚糖酶是制备益生元甘露寡糖的关键酶.对分泌异甘露聚糖酶枯草芽孢杆菌K-6(Bacillus subtilis K-6)的紫外诱变正突变株K-6-9(Bacillus subtilis K-6-9)的诱变机理进行了研究.通过对出发菌株和正突变株的异甘露聚糖酶基因进行克隆和表达,以生物信息学的方法对异甘露聚糖酶基因序列和蛋白序列进行分析,得到突变株的突变碱基以及突变氨基酸.基因序列研究结果显示,突变体的总碱基突变频率为1.02,碱基突变类型包括碱基的颠换、转换.在检测到的11个碱基突变中,转换的频率(54.5%)是颠换频率(45.5%)的1.2倍,其中,C/T之间的转换所占比例最大,A-G和A-T也具有较高的替换频率,说明胸腺嘧啶(T)具有较高的辐射敏感.通过蛋白序列的比较分析,有2个氨基酸发生突变,由第21位保守氨基酸脯氨酸变异为非保守氨基酸丝氨酸,第23位非保守氨基酸丝氨酸变异为保守氨基酸谷氨酸.综合分析表明:保守区氨基酸与非保守区氨基酸的相互突变可能对其蛋白的正确组装及功能的发挥起重要作用.穆昭艳,汪立平,赵勇,王娜,李安雪,汪欣 - 华北农学报文章来源： 万方数据
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