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茎一环RT-PCR法定量miRNA-421的引物设计
本研究旨在通过茎一环RT-PCR法,建立有效定量miRNA421的PCR方法,探讨该方法在定量检测miRNA方面的应用价值.利用miRBase数据库获得miRNA-421的成熟序列.设计3条miRNA421特异性反转录引物,Q-PCR上游引物及通用下游引物.通过10倍梯度稀释RNA后特异性反转录,RT-PCR分析不同引物互相配对PCR的扩增曲线及熔融曲线,鉴定出特异性好、扩增效率高的引物.为进一步鉴定引物的有效性,过表达miRNA-d21,用鉴定的成熟引物定量扩增.利用茎一环RT-PCR法设计、鉴定出miRNA-421引物:421RT7、F19,且这对引物特异性好、扩增效率高.通过设计引物组合,茎一环RT-PCR法能够很好地用于miRNA定量分析,并具有准确、快速、节约成本的优点.赵丽,杨洋,温传俊 - 南京师大学报(自然科学版)文章来源： 万方数据 -
FISH和RT-PCR法在ALK基因检测中的临床应用分析
目的:探讨荧光原位杂交( fluorescence in situ hybrid-ization, FISH)和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( real-time quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reac-tion, RT-PCR)技术检测非小细胞肺癌中间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase, ALK)突变的差异性。方法应用FISH及RT-PCR技术分别检测22例非小细胞肺癌中ALK基因突变,采用Spearman Correlation统计法进行差异性比较分析。结果两种方法在检测非小细胞肺癌中ALK基因突变的结果具有一致性( P<0.05)。结论虽然两种方法检测ALK基因突变结果具有一致性,但实际操作中RT-PCR法比FISH法更简便、敏感、易判读。李霄,刘冲,李扬,朱芸,宋国新,张智弘 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
肝细胞癌中RHAMM和HIF-1α的表达及临床意义
目的:观察透明质酸介导运动的受体( receptor for hya-luronan-mediated motility, RHAMM)和缺氧诱导因子-1α( hy-poxia inducible factor-1α, HIF-1α)在人肝细胞癌( hepatocel-lular carcinoma, HCC)中的表达及其与临床病理特征的关系,探讨其在肝癌诊断及预后中的临床意义。方法取67例HCC及相应癌旁组织,用 RT-PCR技术检测 RHAMM 和HIF-1α mRNA的表达,并分析二者的相关性及与HCC临床病理因素的关系。结果 HCC中RHAMM和HIF-1α mRNA表达均高于癌旁组织,且呈正相关( P<0.001)。二者与患者HBsAg阳性、Child-Pugh分级、血清 AFP 水平、微血管侵犯、肿瘤有无包膜、大血管癌栓均无显著相关( P>0.05);与癌灶数目、Edmondson分级、TNM分期均有显著相关性( P<0.05)。 HIF-1α表达与肿瘤直径有关(P<0.05)。结论RHAMM和HIF-1α与 HCC 分化、侵袭、转移和预后有关。RHAMM可能参与肿瘤微环境缺氧条件下细胞的转变过程。陈俊林,赵驰 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
伊玛替尼治疗胃肠道间质瘤耐药相关miRNA的初步筛选
目的 探讨与胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)耐药相关的微小RNA(miRNA).方法 收集4例伊玛替尼耐药GIST和3例恶性GIST,运用Agilent人miRNA寡核苷酸基因芯片V3.0(955个已知miRNA)进行检测,选取耐药组与恶性组间3个差异表达最明显的miRNA,再应用RT-PCR技术在21个扩大样本中验证基因芯片筛选的结果.结果 耐药组与恶性组相差倍数2倍以上(P<0.05),差异表达的miRNA有13个,上调者5个,下调者8个.其中差异最明显的3个分别为miR-15a、miR-1280、miR-320a,前者在耐药组中上调,后两者下调.RT-PCR技术在扩大样本中验证后发现miR-320a在两组中的差异与基因芯片的结果基本相符.结论 通过miRNA芯片初步筛选和在扩大样本中的验证,发现miR-320a在耐药组与恶性组之间表达差异有显著性,提示miR-320a可能与GIST在甲磺酸伊玛替尼治疗过程中的耐药性有关.石园,王翠众,侯英勇,何德明,沈坤堂,谭云山 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
法国进境葡萄砧木中啤酒花矮化类病毒的检测与序列分析
为检测法国进境葡萄砧木中啤酒花矮化类病毒(Hop stunt viroid,HSVd),对其进行了RTPCR检测及序列测定,并构建系统进化树比较了不同地域来源HSVd间的分子差异性.结果表明基于HSVd基因序列设计合成的1对引物能够扩增出302 bp大小的目标片段,而健康植株无此扩增产物.法国葡萄砧木中检出的HSVd分离物,与国内外已报道毒株的核酸序列同源性达90%~97%,与已报道的HSVd全基因组序列间差异较小,表明HSVd的序列变异与地域、寄主等无明显相关性.甘琴华,王英超,魏晓棠,邵秀玲,刘彩霞,厉艳 - 植物保护学报文章来源： 万方数据 -
液相芯片和RT-PCR法在转移性肺癌EGFR突变检测中的比较
目的 通过液相芯片法和RT-PCR法检测EGFR基因突变的一致性,探讨适用于临床转移性肺癌患者EGFR基因的突变检测法.方法 收集47例转移性肺癌患者锁骨上肿物细针穿刺吸取物,经反复离心后取沉淀细胞行石蜡包埋,常规HE染色和免疫组化Multimer染色,利用液相芯片法和RT-PCR法检测EGFR基因19和21外显子的热点突变并进行分析.结果 47例转移性肺癌患者中15例检测到EGFR基因突变,突变率为31.9%,其中6例为外显子19缺失突变,9例为外显子21点突变.两种方法对EGFR外显子19和21的基因突变检测结果完全一致.结论 锁骨上吸取肿物可作为转移性肺腺癌患者EGFR基因突变的检测标本,且突变类型主要为外显子21点突变.液相芯片法和RT-PCR法均可作为转移性肺癌患者EGFR基因突变的检测法.陈刚,师怡,何诚,王晓江,郑雄伟 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
整合素α5β1蛋白及mRNA在子宫颈鳞状细胞癌中的表达及意义
目的探讨子宫颈鳞状细胞癌(cervix squamous cell carcinoma,CSCC)中整合素α5β1蛋白和mRNA的表达,并分析其与临床病理特征的关系.方法采用免疫组化SP法、RT-PCR技术检测60例CSCC及40例子宫颈正常组织中整合素α5β1蛋白及mRNA的表达.结果 CSCC中整合素α5β1蛋白及mRNA表达均高于子宫颈正常组织,差异有统计学意义(P<0.05);整合素α5β1蛋白及mRNA的表达均与CSCC分化程度、pTNM分期、淋巴结转移、浸润深度有相关性(P<0.05),与患者年龄无相关性(P>0.05).结论 CSCC中整合素α5β1蛋白及mRNA的表达与其生长、侵袭与转移密切相关.采用免疫组化SP法与RT-PCR技术联合检测CSCC中整合素α5β1蛋白及mRNA,有望成为评估CSCC恶性程度、侵袭、转移和临床预后的指标.王闯,李键淇,齐洁敏 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
不同水分条件下棉花主茎功能叶叶柄茎流速率的日变化规律
利用以色列Eldar2 Shany Techno logies公司最新设计生产的Galilieo- LPS-05MD植物生理监控系统对盆栽棉花的小生态环境以及主茎功能叶(倒四叶)叶柄的茎流速率进行全天候监测.通过对主茎叶片叶柄的茎流速率日变化进行分析,结果表明:不同水分条件下的主茎叶叶柄茎流速率日变化规律发生变化.高水分条件下高峰期和低谷期出现较早,中、低水分条件下高峰期和低谷期出现较晚.不同水分条件下不同环境因子对茎流速率的影响不一样.高水分条件下土壤温度(ST)和大气相对湿度(RHS)与茎流速率分别存在极显著和显著相关关系;中水分条件下则是空气湿度(AT)和大气相对湿度(RHS)与茎流速率存在显著相关关系;低水分条件下只是光辐射强度(TIR)与茎流速率存在显著相关关系.孙红春,李文芹,刘连涛,张永江,李存东 - 华北农学报文章来源： 万方数据 -
Molecular cloning and identification of mouse epididymis-specific gene mHongl, the homologue of rat HongrES1
Shuang-Gang Hu, Han Du, Guang-Xin Yao, Yong-Lian Zhang - 亚洲男性学杂志(英文版)文章来源： 万方数据 -
盐酸米诺环素对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β mRNA表达的影响
目的 研究盐酸米诺环素对内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)mRNA表达的影响.方法 培养人牙周膜成纤维细胞,实验分为5组:对照组(未加药品)、模型组(加入10 μg/mL LPS)、低剂量干预组(加入10 μg/mL LPS和50 μg/mL盐酸米诺环素)、中剂量干预组(加入10 μg/mL LPS和100μg/mL盐酸米诺环素)、高剂量干预组(加入10 μg/mL LPS和200 μg/mL盐酸米诺环素).实时荧光定量PCR检测盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1β mRNA表达的影响.结果 IL-1β mRNA相对表达量:模型组高于对照组,对照组高于3个剂量干预组,其差异均有统计学意义(P<0.01);但高剂量干预组、中剂量干预组、低剂量干预组3组间的相对表达量,组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 盐酸米诺环素能够降低LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1β mRNA的表达,这可能是盐酸米诺环素治疗牙周炎的作用机制之一;本研究未发现盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的干预作用与药物剂量之间存在正相关关系.邱枫,段昌华,冷颖,赵旭东,朱志平 - 广东牙病防治文章来源： 万方数据
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