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荧光定量PCR检测石蜡组织中结核分枝杆菌
目的 改进石蜡组织的处理,提高结核分枝杆菌在石蜡组织中检测的敏感性.方法 选择荧光定量PCR检测石蜡组织结核分枝杆菌检测结果为临界值的蜡块标本,行HE染色、抗酸染色及荧光定量PCR石蜡组织结核分枝杆菌DNA检测.通过对其石蜡组织少修片、混合多个蜡块、选择干酪样坏死及肉芽肿病变较多的蜡块以及适量增加模板量的多种方法,对比其在荧光定量PCR法中的检出率.结果 各实验组Ct值减小,扩增曲线均有不同程度的升高.结论 改进操作措施后可以提高蜡块中结核分支杆菌检测的敏感度.杨长绍,王丽,潘鑫艳,王力,黎贵芸,杨举伦 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
柑橘花器和种子中黄龙病菌的定量分布及应用
为准确、快速测定感病柑橘花器和种子中黄龙病菌(Candidatus Liberibacter asiaticus,Las)的含量,比较了SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(SGI-qPCR)和单管双引物对TaqMan探针qPCR(STDP-qPCR)的检测灵敏度,并用STDP-qPCR法定量检测了感病沙田柚花器和种子中的Las.结果显示,STDP-qPCR检测灵敏度为1*100拷贝/μL,比SGI-qPCR高100倍;花器中的雄蕊、花瓣、雌蕊和花粉等组织,以及种子的种皮和胚乳组织中均可检测到Las,但含量差异较大,其中种皮组织中Las含量最高,达到109842个细胞/μg DNA,花粉中的Las含量最低,为308个细胞/μg DNA,所有种壳中均未检测到Las;基于雄蕊组织的黄龙病分子诊断准确率达93.8%.表明Las在感病柑橘花器和种子中呈不均匀分布,基于雄蕊组织的黄龙病诊断方法可辅助用于该病害的高通量检测.娄兵海,宋雅琴,赵小龙,白先进,邓崇岭 - 植物保护学报文章来源： 万方数据 -
检测伪狂犬病毒gB基因荧光定量PCR方法的建立
利用DNAMAN软件对GenBank登录的伪狂犬病病毒(PRV)各毒株gB基因序列进行比对分析,选择其保守区域设计合成特异性的引物和TaqMan探针,同时利用普通PCR技术扩增获得全长的伪狂犬病毒gB基因,并克隆到pMD20-T载体上作为阳性标准品.通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了一种快速检测伪狂犬病病毒的荧光定量PCR技术.该检测技术具有较高的灵敏性、特异性和可靠性.对制备的pMD-gB阳性标准品的检测结果表明,所建立的伪狂犬病毒TaqMan荧光定量PCR最低检测极限可达1.50*102拷贝/反应;同时相比于普通PCR方法其灵敏度高100~1 000倍以上,并且重复性好.在对60份临床样品的检测中,荧光定量PCR不仅检出了普通PCR检测为阳性的样品,且检出了2份普通PCR未检出的样品,进一步证实了该方法快速、灵敏性好,可用于PRV感染的早期快速定量检测和肉类食品进出口检疫.朱淑芬,朱瑞良,乔彩霞,高志强,张利峰,张鹤晓,吴亚琼,王慧珊 - 中国兽医学报文章来源： 万方数据 -
荧光定量PCR和酶联免疫吸附技术在手足口病肠道病毒快速检测中的应用比较
目的:比较荧光定量PCR(FQ-PCR)和酶联免疫吸附技术(ELISA)在手足口病肠道病毒快速检测中的应用价值.方法:选取疑似手足口病患儿200例,采集咽拭子、粪便、疱疹液标本232份,进行FQ-PCR检测,同时采用ELISA进行平行检测,比较两者的阳性检出率、灵敏度与特异性以及检测窗口期.结果:应用FQ-PCR方法,咽拭子、粪便、疱疹液中EV71、CoxA16、通用型肠道病毒核酸RNA的总阳性检出率分别为84.83%、81.82%、85.71%,差异无统计学意义(F=0.79,P>0.05).FQ-PCR方法咽拭子、粪便、疱疹液阳性检出率均高于ELISA法对血液的阳性检出率(χ2=3.17~5.11,P<0.05).FQ-PCR、ELISA诊断灵敏度分别为97.03%、87.50%(χ2=3.98,P<0.05),诊断特异性分别为97.22%、88.68%(χ2=3.85,P<0.05).在EV71、CoxA16及通用型肠道病毒方面,FQ-PCR的检测窗口期均早于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05).结论:FQ-PCR在手足口病肠道病毒快速检测方面优于ELISA,具有更高的阳性检出率、灵敏度与特异性,以及更早的检测窗口期,对手足口病的早期诊断具有较高的临床指导意义和推广应用价值.方静霞,沈丽萍,吴捍卫 - 儿科药学杂志文章来源： 万方数据 -
乳腺原发癌和相应淋巴结转移癌干细胞Wnt、Notch信号通路相关分子的比较
目的:探讨乳腺原发癌和相应淋巴结转移癌干细胞Wnt、Notch信号通路分子β-catenin、Cyclin D1和Notch1 mRNA表达及意义。方法选取乳腺浸润性导管癌30例,且均伴有淋巴结转移,制备乳腺癌单细胞悬液,通过免疫磁珠分选技术分别提取乳腺原发癌和相应淋巴结转移癌干细胞,采用实时荧光定量PCR技术检测两种癌干细胞Wnt、Notch信号通路关键分子β-catenin、Cyclin D1和Notch1 mRNA的表达。结果乳腺原发癌干细胞和相应淋巴结转移癌干细胞中β-catenin mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05);淋巴结转移癌干细胞中Cyclin D1和Notch1 mRNA的表达显著高于乳腺原发癌干细胞(P<0.01)。结论与乳腺原发癌干细胞相比,淋巴结转移癌干细胞中Cyclin D1和Notch1处于更高的活化状态,具有更高的侵袭和转移能力,有可能成为乳腺癌的新治疗靶点。曾令瑞,韩玉贞,马英路,李文星 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
PCR-荧光探针法检测纤刷物分枝杆菌在结核中的应用价值
目的探讨PCR(聚合酶链反应)-荧光探针法在纤刷物分枝杆菌检测中的临床应用价值.方法采用纤刷物涂片抗酸染色、结核杆菌培养和分枝杆菌核酸(PCR-荧光探针法)进行检测.结果 PCR-荧光探针法检测结核病组的阳性检出率为43.20%(108/250),明显高于抗酸染色法的28.40%(71/250)和结核杆菌培养法的35.20%(88/250).3种方法检测对照组的结果均为阴性,特异度为100%(36/36).结论 PCR-荧光探针法是一种快速、敏感度高、特异性强的检测方法,具有重要的临床诊断及应用价值.秦万,欧维正,骆科文,蒙俊,王燕,李瑢 - 宁夏医学杂志文章来源： 万方数据 -
ALK阳性晚期非小细胞肺癌临床病理分析
目的探讨间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase,ALK)在晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,及其与临床特征、鉴别诊断、预后的关系.方法采用免疫组化法检测253例晚期NSCLC中ALK的表达,并对其中132例进行荧光PCR法验证.结果采用免疫组化法检测晚期NSCLC中ALK阳性率为20.95%(53/253).ALK阳性组中未吸烟者、腺癌的比例高于ALK阴性组(P<0.05).132例进行荧光PCR验证,免疫组化与荧光PCR符合率随免疫组化阳性程度的增加而递增.结论免疫组化可作为ALK的筛查手段,提高ALK的检出率.荧光PCR检测对ALK阳性NSCLC的确诊具有重要意义.谢强,陈群,林清华,钟爱虹,卢筠,廖胜祥,臧焕平 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
盐酸米诺环素对脂多糖诱导人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β mRNA表达的影响
目的 研究盐酸米诺环素对内毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用下人牙周膜成纤维细胞白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)mRNA表达的影响.方法 培养人牙周膜成纤维细胞,实验分为5组:对照组(未加药品)、模型组(加入10 μg/mL LPS)、低剂量干预组(加入10 μg/mL LPS和50 μg/mL盐酸米诺环素)、中剂量干预组(加入10 μg/mL LPS和100μg/mL盐酸米诺环素)、高剂量干预组(加入10 μg/mL LPS和200 μg/mL盐酸米诺环素).实时荧光定量PCR检测盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1β mRNA表达的影响.结果 IL-1β mRNA相对表达量:模型组高于对照组,对照组高于3个剂量干预组,其差异均有统计学意义(P<0.01);但高剂量干预组、中剂量干预组、低剂量干预组3组间的相对表达量,组间比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 盐酸米诺环素能够降低LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1β mRNA的表达,这可能是盐酸米诺环素治疗牙周炎的作用机制之一;本研究未发现盐酸米诺环素对LPS作用下人牙周膜成纤维细胞IL-1βmRNA表达的干预作用与药物剂量之间存在正相关关系.邱枫,段昌华,冷颖,赵旭东,朱志平 - 广东牙病防治文章来源： 万方数据 -
qRT-PCR检测石蜡包埋组织microRNA的研究进展
实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRTPCR)是一种具有高度敏感性和特异性的核酸定量分析技术,因其具有重复性好、定量准确等优点,已成为核酸检测的重要方法.microRNA是核酸家族中的重要成员,可使用qRT-PCR技术进行检测.由于microRNA具有其特殊性,与mRNA的检测方法不完全一样,仍需进行深入探讨qRT-PCR技术分析组织中microRNA的表达方式.现就该方面的研究进展作一综述.程凯,余波,王建东,石群立 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
应用PCR-DHPLC技术高通量快速检测转基因玉米
利用多重PCR结合DHPLC技术首次建立转基因玉米高通量快速检测方法.根据公布的转基因玉米外源基因序列设计并合成适合多重PCR的引物序列,以转基因玉米为模板,通过优化多重PCR和DHPLC的反应条件,建立一套同时快速筛选检测玉米中多种转基因成分的7重PCR-DHPLC检测方法.该方法的检测灵敏度为0.195 ng/μL,质粒检测灵敏度为1*103拷贝/μL.吴静,李铁柱,孙瑶,孙方达,栾凤侠,赵明超 - 玉米科学文章来源： 万方数据
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