-
1α,25-二羟维生素D3对早期角膜移植小鼠Th17细胞的免疫调控作用
目的:观察在同种异体角膜移植的小鼠模型中,1α,25-二羟维生素D3对Th17细胞及其相关细胞因子的影响。方法:C57BL/6小鼠作为受体,BALB/c小鼠作为供体,建立小鼠穿透性角膜移植术模型。术后隔日对角膜移植小鼠腹腔注射1.0μg 1α,25二羟维生素D3(维生素D3干预组),模型组和正常对照组腹腔注射等量大豆油。在裂隙灯活组织镜下观察角膜移植物的透明情况,评估排斥反应的发生情况,并取角膜移植物做病理学检测。采用实时荧光定量PCR检测脾脏中IL-17、RORγt和IFN-γ的表达水平,Western blotting分析外周血中RORγt及IL-17的蛋白含量,流式细胞术检测外周血IL-17和IFN-γ细胞因子的表达情况。结果:1α,25-二羟维生素D3显著地抑制了同种异体角膜移植排斥反应,同时减少了角膜移植物的炎性渗出。应用1α,25-二羟维生素D3治疗后,小鼠脾脏中IL-17、RORγt和IFN-γ的表达水平降低;外周血中IL-17、RORγt和IFN-γ的表达水平被下调。结论:1α,25-二羟维生素D3抑制小鼠同种异体角膜排斥反应的作用与IL-17及相关细胞因子RORγt细胞调节密切相关。吴静,张瑾,侯光辉,崔裕波,王超,陈剑 - 中国病理生理杂志文章来源: 万方数据 -
Foxp3/Treg与RORγt/Th17细胞失衡在慢性阻塞性肺疾病大鼠中的作用
目的:观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠叉头状/翅膀状螺旋转录因子p3(Foxp3)、调节性T细胞(Treg)、辅助性T细胞17特异性转录因子T孤独核受体(RORγt)的表达。方法将20只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组和COPD模型组,每组10只。采用烟熏加脂多糖(LPS)气管滴入的方法建立COPD模型;正常对照组不予任何处理。28 d后测定两组大鼠肺功能;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学改变;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清白细胞介素(IL-6、IL-10)水平;流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg表达;蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肺组织Foxp3、RORγt、IL-17蛋白表达。结果光镜下观察模型大鼠肺泡腔及肺间质内大量炎性细胞浸润,病变区肺泡结构破坏,肺泡壁变薄、甚至断裂融合成大疱,部分肺泡腔内有不同程度的出血。与正常对照组比较,模型组用力肺活量(FVC)、0.3 s用力呼气容积(FEV0.3)、FEV0.3/FVC、用力呼气峰值流速(PEF)明显下降〔FVC(mL):8.04±2.03比9.97±2.14,FEV0.3(mL):6.16±2.23比8.84±2.12,FEV0.3/FVC:0.70±0.09比0.85±0.11,PEF(mL/s):33.56±4.76比40.14±5.64,P<0.05或P<0.01〕;血清IL-6明显升高(ng/L:93.17±20.96比76.28±13.24, P<0.05),IL-10明显降低(ng/L:78.62±15.17比104.34±19.46,P<0.01),CD4+CD25+Foxp3+Treg表达明显降低〔(2.75±0.83)%比(4.16±1.14)%,P<0.01〕;肺组织Foxp3蛋白表达明显降低(灰度值:0.38±0.15比0.63±0.11,P<0.01),RORγt、IL-17蛋白表达明显升高〔RORγt(灰度值):0.96±0.23比0.47±0.11,IL-17(灰度值):1.02±0.24比0.34±0.08,均P<0.01〕。相关性分析显示,肺功能参数FEV0.3与Foxp3呈正相关(r=0.585,P<0.05);FEV0.3/FVC与IL-6、RORγt呈负相关(r=-0.655、r=-0.607,均P<0.05);PEF与Treg呈正相关(r=0.573,P<0.05),与IL-17呈负相关(r=-0.198,P<0.05)。IL-6与Foxp3呈负相关(r=-0.603, P<0.05),与RORγt呈正相关(r=0.588,P<0.05);IL-10与Treg呈正相关(r=0.573,P<0.05);Treg与Foxp3呈正相关(r=0.607,P<0.05),与IL-17呈负相关(r=-0.569,P<0.05);Foxp3与RORγt呈负相关(r=-0.591,P<0.05);RORγt与IL-17呈正相关(r=0.578,P<0.05)。结论 COPD肺功能降低、炎症反应升高与Foxp3/Treg、RORγt/Th17表达失衡有关。王成阳,刘向国,彭青和,方莉,王传博,李泽庚 - 中华危重病急救医学文章来源: 万方数据 -
白细胞介素17在狼疮性肾炎小鼠中的表达及抗白细胞介素17抗体的干预作用
目的:探讨白细胞介素17(IL-17)在狼疮性肾炎(LN)小鼠中的表达及抗IL-17抗体的干预作用.方法:11周龄的雌性MRL/lpr小鼠36只随机分为实验组和干预组,另有同龄雌性昆明小鼠18只为对照组.干预组每只小鼠腹腔注射抗小鼠IL-17多克隆抗体20 μg,每2周1次,至实验观察点结束.各组分别于第1次给药后的24 h、14 d及28 d处死6只小鼠.光镜下观察肾脏病理情况,ELISA法检测小鼠血清IL-17的含量,免疫组化法检测肾组织IL-17的表达水平.结果:MRL/lpr小鼠肾小球系膜细胞及基质弥漫增生,肾小管上皮细胞颗粒及空泡变性,灶状萎缩,肾间质淋巴及单核细胞浸润伴纤维化;而干预组肾脏病理改变较实验组为轻.MRL/lpr小鼠的血清IL-17含量在实验组各时点均显著高于对照组(P<0.05),而在干预组各时点均显著低于实验组(P<0.05).IL-17在实验组小鼠肾小管上皮细胞中的表达明显增强,在各时点均显著高于对照组(P<0.05);在干预组,IL-17在各时点的表达均显著低于实验组(P<0.05).结论:IL-17在MRL/ lpr小鼠血清与肾组织中的表达显著增加,而抗IL-17抗体可通过抑制IL-17的表达而抑制LN的炎症免疫反应,减轻肾脏病理损害.徐靓,张慧涛,郑晶,贾宁,林琳,林宇静,李玲玲,周文英,张桦 - 中国病理生理杂志文章来源: 万方数据 -
脓毒症患者外周血微小RNA-155和调节性T细胞表达的关系
目的 探讨微小RNA-155(miR-155)对脓毒症患者外周血CD4 +CD25+调节性T细胞(Treg)的调节作用,从而了解miR-155在脓毒症发病中的作用机制.方法 采用回顾性研究方法,选取江苏大学第四附属医院急诊科和重症监护病房(ICU)脓毒症患者60例(轻度20例、中度20例、重度20例)及20例健康对照者.于确诊后2h内取静脉血,采用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+ Treg细胞表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-155、Foxp3mRNA表达;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素-10(IL-10)水平.结果 脓毒症患者外周血Treg表达率和miR-155、Foxp3mRNA表达以及IL-10水平均明显高于健康对照组[Treg:(2.89±1.13)%比(2.32±0.91)%,t=10.540,P=0.002; miR-155:1.19±0.48比0.80±0.33,t=8.605,P=0.006; Foxp3 mRNA:0.18±0.08比0.13±0.03,t=6.862,P=0.008; IL-10(ng/L):56.89±17.28比33.24±11.93,t=12.742,P=0.001];并且随着急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分增加而升高,重度组[Treg:(3.05±1.21)%,miR-155:1.36±0.79,Foxp3 mRNA:0.21±0.10,IL-10(ng/L):62.82±21.38]、中度组[Treg:(2.86±0.88)%,miR-155:1.25±0.56,Foxp3 mRNA:0.17±0.08,IL-10(ng/L):56.38±19.65]、轻度组[Treg:(2.61±0.87)%,miR-155:0.94±0.52,Foxp3 mRNA:0.15±0.05,IL-10(ng/L):45.43±14.40]之间两两比较差异均有统计学意义(均P<0.01).死亡组各指标明显高于存活组[Treg:(3.46±1.53)%比(2.85±1.03)%,t=14.250,P=0.005; miR-155:1.41±0.85比1.16±0.76,t=11.875,P=0.006;Foxp3mRNA:0.24±0.11比0.17±0.09,t=8.795,P=0.001; IL-10 (ng/L):65.47±23.58比51.70±16.86,t=16.313,P=0.001].miR-155表达与Treg和Foxp3mRNA表达水平均呈正相关(r1=0.635、P=0.007,r2=0.671、P2=0.005).结论 miR-155参与对Treg细胞增殖的调节,在脓毒症免疫失衡机制中发挥一定的作用.汪勤,赵春辉,蔡琴,朱华英 - 中华危重病急救医学文章来源: 万方数据 -
白细胞介素-17、白细胞介素-4及γ干扰素在实验性自身免疫性葡萄膜炎中的表达
目的 观察白细胞介素(IL)-17、白细胞介素(IL)-4及γ干扰素(IFN-γ)在实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)中的表达.方法 采用健康雌性C57BL/6小鼠建立EAU模型.建模前及建模后7、14、21、28 d,取小鼠眼球作石蜡病理切片,光学显微镜观察小鼠视网膜结构变化;采用酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中IL-17、IL-4、IFN-γ含量;采用实时荧光定量聚合酶链反应检测小鼠视网膜组织中IL-17、IL-4、IFN-γ的mRNA表达;采用蛋白质免疫印迹法检测小鼠视网膜组织中IL-17、IL-4、IFN-γ的蛋白表达.结果 建模后14d,光学显微镜观察发现,葡萄膜组织结构破坏,大量炎症细胞浸润.小鼠血清中IFN-γ含量,脾及视网膜组织中IFN-γ mRNA和蛋白表达均于建模后7d达到高峰;小鼠血清中IL-4、IL-17含量,脾及视网膜组织中IL-4、IL-17 mRNA和蛋白表达均于建模后14 d达到高峰.小鼠血清中IL-17含量,脾及视网膜组织中IL-17 mRNA和蛋白表达升高程度均较IFN-γ、IL-4更为显著.建模前与建模后7、14、21 d小鼠血清中IL-17、IL-4、IFN-γ含量比较,差异均有统计学意义(F=1 817.346、268.600、164.621,P<0.05);建模前与建模后28d小鼠血清中IL-17、IL-4、IFN-γ含量比较,差异无统计学意义(P>0.05).建模前与建模后7、14、21d小鼠脾(F=312.67、114.250、216.220)及视网膜(F=271.504、85.370、80.722)组织中IL-17、IL-4、IFN-γ蛋白表达比较,差异有统计学意义(P<0.05);建模前与建模后28 d小鼠脾及视网膜组织中IL-17、IL-4、IFN-γ蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 IL-17、IL-4、IFN-γ在EAU中均明显表达,共同参与了EAU疾病的过程.侯彬,沈琳,王红,陈海婷,赵萌 - 中华眼底病杂志文章来源: 万方数据 -
PD-L1阻断改善酵母多糖致伤小鼠脾脏耐受性 DC对T淋巴细胞活性的影响
目的:探讨酵母多糖致伤小鼠脓毒症病程发展过程中脾脏耐受性树突状细胞( dendritic cell, DC)的形成对脾脏T淋巴细胞免疫活性的影响,并通过程序性死亡受体-1(programmed death-1,PD-L1)抗体阻断PD-L1/PD-1途径改善耐受性DC对T淋巴细胞活性的抑制作用。方法采用酵母多糖腹腔注射的方法复制小鼠脓毒症模型。用磁珠法分离致伤小鼠脾脏DC和T淋巴细胞,测定脾脏组织中DC上PD-1、PD-L1、PIR-B的表达水平和分泌IL-12、IL-10的能力;检测脾脏T淋巴细胞增殖活性和IL-2的分泌水平。进一步将致伤组小鼠脾脏DC与正常小鼠脾脏T淋巴细胞混合培养,并加入PD-L1抗体,检测T淋巴细胞增殖活性及混合培养上清中IL-2、IL-12和IL-10含量。结果酵母多糖致伤后5天和12天组小鼠脾脏DC上PD-1、PD-L1及PIR-B的表达大幅上调,IL-12p70分泌减少,IL-12p40和IL-10分泌增加;脾脏T淋巴细胞增殖活性降低、IL-2分泌减少。在致伤组DC与正常T淋巴细胞混合培养体系中加入PD-L1抗体可减轻致伤组DC对T淋巴细胞增殖活性和分泌IL-2的抑制作用,并改善DC上IL-12p70、IL-12p40和IL-10的分泌能力。结论酵母多糖诱导小鼠脓毒症的病程晚期,脾脏耐受性DC的形成导致T淋巴细胞活性降低;PD-L1抗体通过干预PD-1/PD-L1途径改善T淋巴细胞和DC的免疫活性。吕艺,刘茜,赵敏,陆江阳 - 临床与实验病理学杂志文章来源: 万方数据 -
梅毒血清固定患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞比例及功能的研究
目的:通过检测梅毒血清固定患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(regulatoryTcells,Treg)比例和功能的改变,探讨Treg在梅毒血清固定现象形成中的作用.方法:收集梅毒血清固定患者26例,正常对照23例,利用流式细胞术分别检测外周血Treg比例及Treg内Foxp3、细胞毒性T淋巴细胞抗原(cTLA)-4及白介素(IL)-10的定量表达情况.结果:梅毒血清固定组患者外周血Treg比例明显高于正常对照组(P〈0.01);且Treg内转录因子Foxp3及功能性分子cTLA-4和IL-10的表达量也明显高于正常对照组(P〈0.05或P〈0.01).结论:梅毒血清固定患者外周血Treg比例和功能的异常,可能是导致该现象形成的重要原因之一.赵建斌,张明海,马杰,刘百灵,张晓燕,李青,杨雪萍,王千秋 - 临床皮肤科杂志文章来源: 万方数据 -
5型腺病毒载体对人T淋巴细胞的转染及细胞毒性分析
目的:利用5型腺病毒载体转染人T淋巴细胞,对其转染T淋巴细胞的效率以及细胞毒性进行分析.方法:选取T淋巴瘤Jurkat细胞及原代T细胞,腺病毒按感染复数(multiplicity of infection,MOI)为20、50、100、200和400对其转染,转染48 h后利用流式细胞术检测转染效率;选取腺病毒转染后的不同时点,利用碘化丙啶染色法分析转染对于细胞周期的影响;利用Annexin V/7-AAD染色法分析转染诱导细胞凋亡情况;利用台盼蓝染色计数法分析转染对活细胞数目的影响.结果:5型腺病毒载体转染T淋巴瘤的效率最高,转染效率随着MOI值的增大而增加;CD8+T细胞和CD4+T细胞的转染效率大致相同,T细胞经刺激活化后,CD8+T细胞的转染效率下降;病毒转染未导致明显细胞凋亡;病毒转染对细胞周期与活细胞数目没有显著影响.结论:5型腺病毒载体转染T细胞呈现较低细胞毒性.张文峰,张琼宇,邵红伟,吴凤麟,王腾,黄树林 - 中国病理生理杂志文章来源: 万方数据 -
慢病毒载体介导的RNA干扰及其在T淋巴细胞的应用
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是普遍存在于生物体中的一种序列特异性的基因表达调控方式,它是由小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)介导的特异性降解mRNA的过程[1].T淋巴细胞是处于非分裂期的细胞,在移植物抗宿主病等疾病中起到重要作用,是基因治疗中常用的靶细胞.但在RNAi技术中,T淋巴细胞基因转导效率低而影杜晶晶,孙轶华 - 中国病理生理杂志文章来源: 万方数据 -
CK17-判定肛门鳞状上皮肿瘤性病变是否浸润的标志物
肛门浸润性鳞状细胞癌(SCC)是一种罕见的恶性病变,通常由肛门鳞状上皮内肿瘤(AIN)进展而来.美国的SCC和AIN发病率日益增高,部分因HPV的感染率升高而升高.肛门癌前鳞状上皮病变的组织学分级的高低,将直接影响到患者的治疗方案和预后.由于活检标本大多数较小、取材局限、组织学形态混杂等原因,目前仅通过活检标本来判断组织是否有浸润比较困难.CK17是由活化的角质形成细胞产生的一种基底细胞/肌上皮细胞角蛋白,多种研究显示CK17表达增强与子宫颈、食管和口腔鳞状细胞癌的进展相关.Nazarian等对Nazarian R M,Primiani A,Doyle L A,张功亮,刘勇 - 临床与实验病理学杂志文章来源: 万方数据

