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目的:本研究探讨了二十二碳六烯酸乙酯(Et-DHA)对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响.方法:HepG2细胞用于检测Et-DHA的抑癌活性,MTT法检测Et-DHA对HepG2细胞的直接抑制作用,Hoechst 33258荧光染色观察细胞的形态特征,ELISA法检测Et-DHA处理后HepG2细胞的活性氧簇(ROS)释放量、总超氧化物歧化酶(SOD)和caspase-9活性,Western blotting法检测胞质和线粒体中Bax、Bak、Bid、Bcl-2、Smac和细胞色素C(Cyt C),以及胞质中cleaved caspase-8、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的水平;T细胞与HepG2细胞共培养,进一步观察Et-DHA处理后T细胞的增殖对HepG2细胞活性的影响,并检测了颗粒酶(granzyme)B的水平.结果:Et-DHA显著抑制HepG2细胞的生长(P<0.05),这种抑制作用具浓度效应和时程效应;Et-DHA处理后HepG2细胞的ROS释放量增加,但总SOD活性无明显变化,caspase-9活性显著上升(P<0.05);线粒体上的促凋亡蛋白Bax、Bak和Bid水平增加,而抑凋亡蛋白Bcl-2以及线粒体中Cyt C和Smac的水平降低,胞质中的Cyt C、Smac、cleaved caspase-8、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3以及cleaved Bid水平呈剂量性升高.另外 T细胞和HepG2细胞共培养组在Et-DHA的诱导下,HepG2细胞的凋亡程度与Et-DHA单独作用时相比进一步增加.在Et-DHA刺激下,T细胞内granzyme B上调,释放到HepG2 细胞内的granzyme B明显增多.结论:Et-DHA可能主要通过线粒体内源性途径以及caspase-8途径,激活caspase-3,诱导HepG2细胞凋亡,以及通过间接活化T细胞,促使 granzyme B增多,从而增强对HepG2细胞的毒性作用.

目的:构建含NADPH氧化酶1(NOX1)近端启动子区的pGL3萤光素酶报告基因载体及缺失NF-κB结合元件的相应载体,分别测定其相应活性,探讨NF-κB结合元件缺失对NOX1启动子区转录活性的影响.方法:采用PCR法克隆NOX1启动子区序列(1 415 bp),将目的片段与pGL3萤光素酶载体分别双酶切、纯化后进行连接(pGL3-NOX1-1415),测序鉴定;应用Alibaba 2.1软件分析NOX1近端启动子区,获取NF-κB结合元件;重叠PCR法将含该元件的启动子区域(88 bp)缺失,并构建相应载体(pGL3-NOX1-1327).将两载体分别与pRL-TK内参质粒瞬时转染进入A549细胞,采用TNF-α(10μg/L)刺激细胞24 h,萤光酶标仪检测A549细胞的萤光素酶活性.结果:测序鉴定结果提示pGL3-NOX1-1415及NF-κB结合元件缺失的pGL3-NOX1-1327载体构建成功;细胞实验显示,TNF-α刺激后,转染pGL3-NOX1-1415的A549细胞萤光素酶活性明显强于对照组(P<0.05),而转染NF-κB结合元件缺失的pGL3-NOX1-1327的细胞萤光素酶活性明显低于转染pGL3-NOX1-1415组(P<0.05).结论:TNF-α诱导A549细胞NOX1基因活化与NF-κB密切相关,NF-κB参与了TNF-α诱导的NOX1基因启动子的转录调控.

目的 对测定半胱氨酸蛋白酶抑制剂C( Cystatin C,Cys C)和β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)的颗粒增强透射免疫比浊法(PETIA)试剂盒的抗干扰性能进行评价.方法 根据CLSI EP7-A2文件,对PETIA法Cys C和β2-MG试剂盒进行干扰评价试验.结果 配对差异实验结果显示:1 000 U/L类风湿因子(RF)、1 450浊度乳糜微粒、342 μmol/L游离胆红素(F-Bil)、342 μmol/L结合胆红素(C-Bil)、30 mg/L维生素C(Vit C)对Cys C和β2-MG测定无干扰,5g/L血红蛋白(Hb)对高浓度Cys C和低浓度β2-MG测定均有干扰;5个浓度系列的剂量效应实验结果显示,Hb对Cys C和β2-MG测定可产生非线性干扰.结论 PETIA法测定Cys C和β2-MG试剂盒具有较强的抗干扰能力,基本能满足临床需求.

目的 以缺氧/再复氧(H/R)和脂多糖(LPS)刺激人结肠上皮细胞株(FHC)模拟体内肠上皮细胞遭受缺血、缺血/再灌注和炎症打击的病理过程,探讨大黄素干预的可能作用靶点.方法 常氧组:在37 ℃下用95%空气和5%CO2培养.缺氧(H)组:于37℃下用1%O2、5%CO2和94%N2的混合厌氧气体使细胞缺氧1、2、3、4h.H+LPS组:在H组基础上给予LPS 1 mg/L刺激.H/R组:于缺氧3h后分别复氧1、2、3、4h.H/R+LPS组:在H/R基础上给予LPS 1 mg/L刺激.大黄素干预组:在H3 h/R2 h+LPS基础上给予20、40、60、80 μmol/L大黄素进行干预.用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测磷酸化核转录因子-κB(NF-κB)抑制蛋白-α(pIκB-α)、磷酸化NF-κBp65(pNF-κBp65)、环氧化酶-2(COX-2)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达.相差显微镜下观察各组肠上皮细胞的形态学改变;用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测大黄素对肠上皮细胞增殖情况的影响.结果 ①H组:pIκB-α、pNF-κBp65、COX-2表达量均于H1 h达峰值,分别为0.350±0.018、1.083±0.054、0.903±0.045,然后递减(F值分别为3.011、7.247、5.754,P值分别为0.013、0.000、0.005);HIF-1α在H3 h表达最高(1.511±0.076),但各时间点间比较无差异(F=1.881,P=0.062).H+LPS组:pIκB-α、pNF-κBp65、COX-2、HIF-1α表达量均随缺氧时间延长而增加,H3 h达峰值,分别为0.504±0.025、1.255±0.063、0.812±0.041、1.209±0.075(F值分别为2.683、8.774、9.765、2.432,P值分别为0.011、0.000、0.000、0.026).H/R组:随着再复氧时间延长,pIκB-α、pNF-κBp65、COX-2表达递减,于H3 h/R4 h降至最低,分别为0.712±0.034、1.202±0.048、0.691±0.042(F值分别为1.923、6.765、2.719,P值分别为0.063、0.000、0.016);与H组相比,H/R组HIF-1α在再复氧过程中表达明显减少,但各时间点间无差异(F=1.280,P=0.081).H/R+LPS组:随着再复氧时间延长,pIκB-α、pNF-κBp65、COX-2、HIF-1α并无降解,于R2~3 h达峰值,分别为3.302±0.061、2.315±0.055、2.017±0.043、2.413±0.098(F值分别为4.614、1.652、5.970、2.076,P值分别为0.001、0.067、0.000、0.037).大黄素共同干预组:大黄素可以抑制NF-κB和HIF-1α通路蛋白表达,存在量效关系(P<0.05或P<0.01).80 μmol/L大黄素可使pIκB-α、pNF-κBp65、COX-2、HIF-1α蛋白表达量降至最低,分别为2.599±0.130、1.772±0.089、2.590±0.129、2.518±0.125;大黄素后处理细胞则无此效果.②经过H/R+LPS处理的细胞内发生空泡样变、形态改变、细胞融合,相比H组生长速度缓慢.③MTT法检测结果显示,20~ 80 μmol/L大黄素对细胞增殖无明显影响,说明大黄素在此浓度范围不仅产生了生物学效应,且对细胞无药物毒性.结论 缺氧或炎症均可激活HIF-1α的缺氧通路和NF-κB的炎症通路,在H/R过程中,这两条通路蛋白随着再复氧时间延长表达降低,但在H/R+LPS过程中蛋白仍相对高表达,缺血/再灌注损伤可能与内毒素共同作用破坏肠上皮细胞,导致肠源性脓毒症的发生.在炎症早期阶段而非晚期阶段,用大黄素可以阻断NF-κB/HIF-1 α-COX-2信号通路,从而发挥抗炎作用.

患者,21岁,1年前发现左侧睾丸肿大,无疼痛、瘙痒等.外院行穿刺活组织检查,结果倾向支持细胞瘤,无睾丸外伤、隐睾等病史.体检:外生殖器发育正常.左侧睾丸可触及一实性肿物,大小2 cm*2 cm*1.5 cm,质硬,无压痛、粘连、周围淋巴结肿大、男性乳腺发育等其他异常体征.彩超示:左侧睾丸大小4.23 cm*2.01 cm,中上部见实性低回声团块,大小1.94*1.6 mm,内部回声不均匀,边界尚清,形态不规

目的:探讨黄芪颗粒在预防过敏性紫癜(HSP)患儿肾损害中的作用.方法:将96例HSP患儿随机分成治疗组48例和对照组48例,两组均予以维生素C、西咪替丁、芦丁片、葡萄糖酸钙和低分子肝素钠等综合治疗,治疗组在此基础上加用口服黄芪颗粒3个月.对两组患儿随访6个月,观察两组患儿症状消退时间,动态监测两组患儿尿常规、尿m-Alb和尿NAG酶的变化,分析两组患儿肾损害发生时间和发生率.结果:治疗后治疗组患儿症状消退时间明显短于对照组,两组比较差异有统计学意义(P〈0.05);随访6个月,不同时间点治疗组患儿尿常规异常例数少于对照组,差异均有统计学意义(P〈0.05);不同时间点治疗组患儿尿m-Alb和尿NAG酶水平低于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05);治疗组肾损害发生时间晚于对照组,发生率低于对照组,差异均有统计学意义(P〈0.05).结论:黄芪颗粒治疗HSP,能降低肾损害的发生率,改善HSP的预后,具有积极的临床意义.

人源γ-分泌酶与阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)发病直接相关,其组成复杂,由早老素-1(PS1)、PEN-2、APH-1和nicastrin四个亚基组成.AD属于膜嵌入式蛋白酶,通过底物切割控制着许多重要的细胞功能.异常切割淀粉样前体蛋白APP产生过量的淀粉样蛋白(Aβ).Aβ易在脑部发生沉积,从而诱发AD.本组通过低温电子显微镜单颗粒分析,报告分辨率为4.5 A°的完整人源γ-分泌酶复合物

目的 探讨自体脂肪颗粒注射隆乳的临床效果. 方法 2006年1月~ 2010年12月对74例小乳症患者施行自体脂肪颗粒注射隆乳手术.采用20 ml注射器抽吸自体脂肪,通过清洗纯化处理后移植于乳房腺体内、腺体后及乳房皮下脂肪层. 结果 本组74例患者术后切口均Ⅰ期愈合.均获随访,时间6月~1年.术后患者乳房体积均有不同程度的增大,多数患者需经过多次注射方能达到满意效果,1、2、3次注射后满意率分别为4.05%、23.88%、85.42%,总满意率为81.08%.术后有2例出现脂肪液化,3例出现乳房小结节. 结论 自体脂肪颗粒注射移植隆乳手术操作简单,创伤小,效果显著,易被患者接受.在脂肪吸取、纯化及注射过程中严格规范操作,是提高手术效果、减少并发症的有效方法.

目的 建立HPLC法同时测定安坤颗粒中栀子苷和芍药苷的含量.方法 采用安捷伦Eclipse XDB C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-水(14∶86),检测波长:230 nm,柱温:35℃.结果 栀子苷在0.071 52 ~0.357 6 μg范围内线性关系良好(r=0.999 8),平均回收率为98.22%,RSD=1.25%.芍药苷在0.0719 7 ~0.359 85 μg范围内线性关系良好(r=0.9992),平均回收率为98.40%,RSD=0.68%.结论 该方法操作简便,结果准确,重复性好,可用于安坤颗粒的质量控制.

挪威鱼饲料生产公司Skretting公司将X射线与核磁共振成像技术应用到了鱼用颗粒饲料生产中,再结合饲料方面的专业软件,这些技术可揭示饲料颗粒结构与微孔的内在秘密,以及饲料中的次要成分对颗粒饲料的影响方式.通过专门开发的软件,该公司能够创建饲料颗粒的3D图像.通过观察真空包膜前后的饲料颗粒,可以对颗粒的内部结构、颗粒中微孔的大小以及颗粒大小的变化等有一个全面的了解.