科创中国

目的:探讨促红细胞生成素(EPO)对压力超负荷大鼠心肌NADPH氧化酶的影响.方法:36只SD雄性大鼠,腹主动脉结扎复制压力超负荷心肌肥大模型.动物随机分成3组:模型组;假手术组:除不缩窄腹主动脉外,其余操作同腹主动脉缩窄组;重组人促红细胞生成素(rhEPO)治疗组(EPO治疗组):术后给予rhEPO,腹腔注射4 000 U/kg,每周2次.8周后采用心动超声和血流动力学评价心功能;Masson染色观察心肌纤维化程度;实时定量PCR法和Western blotting法检测NADPH氧化酶2(Nox2)和Nox4 mRNA及蛋白表达的变化;Western blotting法观察心肌炎症因子CD45、F4/80和转化生长因子β(TGF-β)的表达变化.结果:与模型组比较,EPO治疗组左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室收缩末压(LVESP)及左室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)明显升高(P<0.01),左室收缩末内径(LVESD)、舒张末内径(LVEDD)及左室舒张末压(LVEDP)下降(P<0.01);同时,EPO可降低压力超负荷所致的心肌纤维化程度(P<0.01),降低心室肌中Nox2、Nox4 mRNA和蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)及心肌炎症因子CD45、F4/80、TGF-β蛋白的表达.结论:EPO可抑制压力超负荷所致大鼠的心肌纤维化,改善心功能,其机制可能与降低NADPH氧化酶活性,抑制心肌氧化应激水平,减少心肌炎症反应有关.

目的:构建含NADPH氧化酶1(NOX1)近端启动子区的pGL3萤光素酶报告基因载体及缺失NF-κB结合元件的相应载体,分别测定其相应活性,探讨NF-κB结合元件缺失对NOX1启动子区转录活性的影响.方法:采用PCR法克隆NOX1启动子区序列(1 415 bp),将目的片段与pGL3萤光素酶载体分别双酶切、纯化后进行连接(pGL3-NOX1-1415),测序鉴定;应用Alibaba 2.1软件分析NOX1近端启动子区,获取NF-κB结合元件;重叠PCR法将含该元件的启动子区域(88 bp)缺失,并构建相应载体(pGL3-NOX1-1327).将两载体分别与pRL-TK内参质粒瞬时转染进入A549细胞,采用TNF-α(10μg/L)刺激细胞24 h,萤光酶标仪检测A549细胞的萤光素酶活性.结果:测序鉴定结果提示pGL3-NOX1-1415及NF-κB结合元件缺失的pGL3-NOX1-1327载体构建成功;细胞实验显示,TNF-α刺激后,转染pGL3-NOX1-1415的A549细胞萤光素酶活性明显强于对照组(P<0.05),而转染NF-κB结合元件缺失的pGL3-NOX1-1327的细胞萤光素酶活性明显低于转染pGL3-NOX1-1415组(P<0.05).结论:TNF-α诱导A549细胞NOX1基因活化与NF-κB密切相关,NF-κB参与了TNF-α诱导的NOX1基因启动子的转录调控.

目的观察线粒体细胞色素C氧化酶I(cytochrome coxidase I,COXI)和线粒体细胞色素C氧化酶Ⅲ(cytochrome coxidase Ⅲ,COXⅢ)在正常结直肠黏膜、结直肠高级别上皮内瘤变(原位癌)和结直肠癌组织中的表达,探讨COXI和COXⅢ在结直肠癌早期诊断中的作用以及二者与结直肠癌患者预后的关系.方法采用免疫组化SP法检测20例结直肠正常黏膜、20例结直肠高级别上皮内瘤变(原位癌)和80例结直肠癌组织中COXI和COXⅢ的表达,并分析二者表达与结直肠癌临床病理特征及患者预后的关系.结果COXI和COXⅢ在正常结直肠黏膜中的阳性率分别为75.0%(15/20)和70.0%(14/20),在结直肠高级别上皮内瘤变(原位癌)组织中的阳性率为35.0%(7/20)和25.0%(5/20),在结直肠癌组织中的阳性率为36.2%(29/80)和26.2%(21/80);COXI和COXHI在正常结直肠黏膜和结直肠高级别上皮内瘤变(原位癌)中的阳性率差异有统计学意义(χ2=6.465,P=0.011;)(χ2=8.120,P=0.004),COXI和COXⅢ在正常结直肠黏膜和结直肠癌组织中的阳性率差异有统计学意义(χ2=9.75,P=0.002;χ2=13.46,P〈0.001).COXI的阳性率与结直肠癌组织学分级、临床分期相关;组织学分级越低,COXI阳性率越高,Ⅲ+Ⅳ结直肠癌组中COXI阳性率低于I+Ⅱ组.COXⅢ的阳性率与结直肠癌临床分期相关,Ⅲ+Ⅳ期结直肠癌组中COXIU阳性率低于I+Ⅱ期组.Kaplan-Meier生存分析表明COXI和COXⅢ表达与结直肠癌患者预后相关(P=0.008,P=0.017).结论COXI和COXⅢ高表达与结直肠癌组织学分级、临床分期、预后密切相关,联合检测二者表达可作为结直肠癌早期诊断及判断其生物学行为的重要指标.

目的:探讨野木瓜注射液对炎性疼痛模型小鼠的消炎镇痛作用及机制。方法:采用足底皮内注射角叉菜胶制备小鼠炎性疼痛模型,对治疗组小鼠皮下注射12.5%、50%和100%野木瓜注射液,于4、12、24、48 h后测各组小鼠足趾肿胀值和足底热痛阈值,并取小鼠第五腰椎(L5)背根神经节(DRG)行免疫组化染色,检测环氧化酶2(COX-2)蛋白的表达。结果:造模后,模型组小鼠足趾肿胀持续明显,足底热痛阈值持续降低。至48 h时,与对照组相比,模型组足趾肿胀明显;与对照组相比,模型组足底热痛阈值显著降低。与模型组相比,低、中、高剂量野木瓜注射液均可降低小鼠足趾肿胀度,恢复小鼠的热痛阈值,且下调L5 DRG中COX-2的蛋白表达至模型组的70%、66%和30%。结论:野木瓜注射液能降低伤害性刺激诱导的L5 DRG中COX-2蛋白表达,起到抗炎镇痛的效果。

目的:通过研究Ebselen在大强度耐力训练大鼠疲劳发生过程中对于骨骼肌活性氧和活性氮自由基的清除,细胞凋亡的调控等方面的作用机制,为Ebselen应用于抗疲劳领域提供实验依据.方法:雄性健康SD大鼠30只,跑台预适应淘汰不适应跑台运动者后,将剩余大鼠随机分为安静对照组(CG)、运动对照组(TG)和Ebselen预处理运动组(TEG),每组8只.Ebselen预处理运动组灌服Ebselen+ DMSO生理盐水溶液,安静对照组和运动对照组灌服等量DMSO生理盐水.8周大强度耐力跑台运动训练后,分别检测大鼠股四头肌内源性抗氧化酶SOD、GSH-Px,活性氮自由基、凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax等指标,TUNEL检测细胞凋亡,透射电子显微镜观察骨骼肌超微结构.结果:大强度耐力训练后大鼠骨骼肌内源性抗氧化酶SOD、GSH-Px活性下降(P<0.05),总抗氧化能力TAOC下降,自由基代谢产物MDA水平升高(P<0.01);活性氮自由基NO及NOS含量升高;Bax/Bcl-2下降(P<0.01),凋亡指数AI升高(P<0.01),骨骼肌超微结构完整性明显受损;相比运动对照组,Ebselen预处理后,运动大鼠骨骼肌SOD、GSH-Px活性升高(P<0.05),TAOC升高,MDA及NO水平下降(P<0.05),Bax/Bcl-2上升,凋亡指数AI降低(P<0.01),骨骼肌超微结构得到明显保护.结论:Ebselen可以发挥拟似GSH-Px活性,提高骨骼肌内源性抗氧化酶活性,加快运动中活性氧与活性氮自由基降解,降低脂质过氧化产物生成,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的下调,发挥抗细胞凋亡作用,延长大鼠跑台运动至力竭的时间,有效保护骨骼肌结构的完整性.

目的:研究类赖氨酰氧化酶1(LOXL1)基因多态性与剥脱综合征(XFS)和剥脱综合征性青光眼(XFG)的关系.方法:以LOXL1、多态性和XFS/XFG为关键词进行meta分析,在PubMed和Embase检索2013年5月前发表的相关文献,应用随机效应模式和固定效应模式研究LOXL1基因多态性(rs1048661、rs2165241和rs3825942)与XFS/XFG发病风险的优势比(OR)和95%可信区间.结果:在高加索人群中LOXL1基因多态性(rs1048661、rs2165241和rs3825942)同XFS/XFG的发生呈正相关,OR值分别是2.19(1.96 ~2.45)、8.80(6.05~ 12.79)和3.41(3.11 ~3.73).而在亚洲人群中,LOXL1基因多态性(rs1048661和rs2165241)同XFS/XFG的发生呈负相关,OR值分别是0.06 (0.02 ~0.18)和0.15(0.09 ~0.25).结论:LOXL1基因多态性同XFS/XFG发生密切相关,但各种群之间相关性有所不同.

目的 以缺氧/再复氧(H/R)和脂多糖(LPS)刺激人结肠上皮细胞株(FHC)模拟体内肠上皮细胞遭受缺血、缺血/再灌注和炎症打击的病理过程,探讨大黄素干预的可能作用靶点.方法 常氧组:在37 ℃下用95%空气和5%CO2培养.缺氧(H)组:于37℃下用1%O2、5%CO2和94%N2的混合厌氧气体使细胞缺氧1、2、3、4h.H+LPS组:在H组基础上给予LPS 1 mg/L刺激.H/R组:于缺氧3h后分别复氧1、2、3、4h.H/R+LPS组:在H/R基础上给予LPS 1 mg/L刺激.大黄素干预组:在H3 h/R2 h+LPS基础上给予20、40、60、80 μmol/L大黄素进行干预.用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测磷酸化核转录因子-κB(NF-κB)抑制蛋白-α(pIκB-α)、磷酸化NF-κBp65(pNF-κBp65)、环氧化酶-2(COX-2)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达.相差显微镜下观察各组肠上皮细胞的形态学改变;用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测大黄素对肠上皮细胞增殖情况的影响.结果 ①H组:pIκB-α、pNF-κBp65、COX-2表达量均于H1 h达峰值,分别为0.350±0.018、1.083±0.054、0.903±0.045,然后递减(F值分别为3.011、7.247、5.754,P值分别为0.013、0.000、0.005);HIF-1α在H3 h表达最高(1.511±0.076),但各时间点间比较无差异(F=1.881,P=0.062).H+LPS组:pIκB-α、pNF-κBp65、COX-2、HIF-1α表达量均随缺氧时间延长而增加,H3 h达峰值,分别为0.504±0.025、1.255±0.063、0.812±0.041、1.209±0.075(F值分别为2.683、8.774、9.765、2.432,P值分别为0.011、0.000、0.000、0.026).H/R组:随着再复氧时间延长,pIκB-α、pNF-κBp65、COX-2表达递减,于H3 h/R4 h降至最低,分别为0.712±0.034、1.202±0.048、0.691±0.042(F值分别为1.923、6.765、2.719,P值分别为0.063、0.000、0.016);与H组相比,H/R组HIF-1α在再复氧过程中表达明显减少,但各时间点间无差异(F=1.280,P=0.081).H/R+LPS组:随着再复氧时间延长,pIκB-α、pNF-κBp65、COX-2、HIF-1α并无降解,于R2~3 h达峰值,分别为3.302±0.061、2.315±0.055、2.017±0.043、2.413±0.098(F值分别为4.614、1.652、5.970、2.076,P值分别为0.001、0.067、0.000、0.037).大黄素共同干预组:大黄素可以抑制NF-κB和HIF-1α通路蛋白表达,存在量效关系(P<0.05或P<0.01).80 μmol/L大黄素可使pIκB-α、pNF-κBp65、COX-2、HIF-1α蛋白表达量降至最低,分别为2.599±0.130、1.772±0.089、2.590±0.129、2.518±0.125;大黄素后处理细胞则无此效果.②经过H/R+LPS处理的细胞内发生空泡样变、形态改变、细胞融合,相比H组生长速度缓慢.③MTT法检测结果显示,20~ 80 μmol/L大黄素对细胞增殖无明显影响,说明大黄素在此浓度范围不仅产生了生物学效应,且对细胞无药物毒性.结论 缺氧或炎症均可激活HIF-1α的缺氧通路和NF-κB的炎症通路,在H/R过程中,这两条通路蛋白随着再复氧时间延长表达降低,但在H/R+LPS过程中蛋白仍相对高表达,缺血/再灌注损伤可能与内毒素共同作用破坏肠上皮细胞,导致肠源性脓毒症的发生.在炎症早期阶段而非晚期阶段,用大黄素可以阻断NF-κB/HIF-1 α-COX-2信号通路,从而发挥抗炎作用.

目的 观察Ⅱ相酶诱导剂5,6-二氢环戊烯并1,2-二硫杂环戊烯-3-硫酮(CPDT)对2型糖尿病大鼠视网膜核因子NF-E2相关因子/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)信号通路及氧化应激的影响,探讨CPDT保护糖尿病大鼠视网膜的机制.方法 35只Wistar雄性大鼠随机分为正常组、造模组2个组,造模组中造模成功者再随机分为糖尿病组、CPDT干预组2个组.正常组、造模组分别有8、27只大鼠.糖尿病组和CPDT干预组给予高脂高糖饲料饲养2个月,大鼠空腹12 h后按体重35 mg/kg腹腔注射链脲佐菌素诱导2型糖尿病大鼠模型.CPDT干预组成模后1周开始在高脂高糖饲料中添加CPDT.8周后检测3组大鼠血糖、血清丙二醛(MDA)含量,检测正常组和糖尿病组大鼠血脂含量.逆转录聚合酶链反应检测3组大鼠视网膜Nrf2、血红素氧合酶-1(HO-1)mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测Nrf2、HO-1蛋白表达,免疫组织化学法检测Nrf2、HO-1在视网膜的表达.结果 25只大鼠成功建立2型糖尿病大鼠模型,成功率为92.6%.糖尿病组大鼠血脂水平较正常组显著升高(F总胆固醇=65.866,F甘油三酯=25.441,F低密度脂蛋白=38.889,P=0.000).各组间大鼠血糖值比较,差异有统计学意义(x2=25.812,P=0.000),且糖尿病组大鼠血糖显著高于正常组和CPDT干预组.各组间大鼠血清MDA含量比较,差异有统计学意义(F=59.545,P=0.000),糖尿病组大鼠血清MDA高于正常组(t=10.523,P=0.000)和CPDT干预组(t=7.766,P=0.000).各组大鼠视网膜Nrf2、HO-1 mRNA比较,差异有统计学意义(FNrf2=19.503,PNrf2=0.000;FHO-1 =9.737,PHO-1 =0.001).与糖尿病组相比,CPDT干预组大鼠视网膜Nrf2、HO-1 mRNA表达明显增高(tNrf2 =3.399,PNrf2=0.002;tHo-1=2.167,PHO-1=0.039).各组大鼠视网膜Nrf2、HO-1蛋白比较,差异有统计学意义(FNrf2=112.823,FHO-1 =119.361,P=0.000).与糖尿病组相比,CPDT干预组大鼠视网膜Nrf2、HO-1蛋白表达明显增高(tNrf2=6.203,tHO-1=6.388,P=0.000).免疫组织化学检测结果显示,Nrf2、HO-1蛋白主要表达于视网膜神经节细胞层、内丛状层、内核层,各组大鼠视网膜Nrf2、HO-1蛋白表达量比较,差异有统计学意义(FNrf2=16.206,FHO-1=46.790,P=0.000).CPDT干预组大鼠视网膜Nrf2、HO-1蛋白的表达量高于糖尿病组(tNrf2 =3.172,PNrf2 =0.003;tHO-1 =6.321,PHO-1=0.000),糖尿病组高于正常组(tNrf2=2.679,PNrf2=0.011; tHO-1=3.482,PHO1=0.001).结论 CPDT可能通过激活Nrf2/ARE信号通路,诱导Nrf2和HO-1的表达,降低血糖、血清MDA含量,从而减轻2型糖尿病大鼠视网膜的氧化应激损伤.

目的 通过了解巨噬细胞游走抑制因子(MIF)和环加氧酶(COX-2)、神经生长因子(NGF)在化学性前列腺炎大鼠模型前列腺、膀胱、尿道中的表达及这些器官的炎症情况,以探讨前列腺炎是否引起临近盆腔脏器炎症,以及引起前列腺炎临床症状的机制.方法 (1)实验动物分组:20只健康成年雄性SD大鼠随机分成两组,即福尔马林(formalin)组和生理盐水(saline)组,每组10只.(2)采用腹侧前列腺内注射福尔马林法建立化学性前列腺炎模型.(3)用HE染色法检测前列腺、膀胱、尿道的炎症情况.(4)用免疫组织化学方法、Western blot法检测各标本MIF、NGF和COX-2的表达.结果 观察到前列腺注射福尔马林引起了前列腺、膀胱和尿道炎症的组织学改变.包括前列腺注射福尔马林后膀胱和尿道MIF蛋白量降低,而COX-2蛋白和NGF蛋白量增加.结论 大鼠化学性前列腺炎通过神经反射引起膀胱、尿道上皮细胞释放P物质,促使MIF释放,诱导其他炎性介质如COX-2,NGF的活化,进而引起临近脏器如膀胱、尿道出现炎症,并维持炎症循环,出现临床症状.

将60只二月龄的清洁级ICR小鼠随机分成4组,每组雌性10只和雄性5只,雌雄分开饲养,饮水中加入不同剂量的钼(以Na2MoO4.2H2O形式),分别是空白对照组、低钼组(100mg/L)、中钼组(200mg/L)、高钼组(400mg/L).4周后雌雄合笼,产仔后从仔鼠中随机挑选雌性30只和雄性15只按原分组给予不同剂量的钼,8周后,再从每组中随机选取雌性10只和雄性5只合笼饲养,产仔至第4代,记录分娩率和每胎产仔数.第3代和第4代小鼠每组选取5只,眼球采血,分离血清,测定血清黄嘌呤氧化酶(XOD)、单胺氧化酶(MAO)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、铜蓝蛋白(CP)和超氧化物歧化酶(SOD).试验结果表明高剂量钼能够颉抗体内的铜,使部分含铜酶活性下降,降低了小鼠繁殖性能,具体如下:(1)F1和F2代高剂量组分娩率显著低于其他组(P