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miR-122的研究进展
miR-122是一种专一表达于肝脏的miRNA,在生理状态下参与精子发生、肝细胞发育、肝细胞表型、分化代谢,以及肝细胞应急应答等基本生命活动过程.在病理状态下,miR-122有促进HCV复制和翻译的作用,还可促进肿瘤细胞的凋亡,在HCC发生、发展过程中发挥抑癌基因样作用.李绍祥,李浩然,张成平,曹建彪 - 昆明医科大学学报文章来源： 万方数据 -
人Midkine基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
目的:构建人Midkine( MK)基因RNA干扰( RNA interference, RNAi)慢病毒载体并鉴定,为其体内外实验研究提供基础。方法设计针对人MK基因序列的4条RNAi靶点序列,分别与慢病毒载体进行连接,获得GV115-MK-1、GV115-MK-2、GV115-MK-3和GV115-MK-4质粒,转染感受态细菌,经PCR及测序技术的鉴定,然后与pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染293T细胞,进行慢病毒包装并测定病毒滴度。4种病毒载体感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞后,用RT-PCR检测MK mRNA的表达。结果 PCR和测序检测结果证实,插入的MK RNAi核苷酸序列正确,共转染293T细胞后可见大量绿色荧光。浓缩病毒后测定其滴度分别为6×108、5×108、5×108和6×108 TU/ml。感染 MDA-MB-231细胞后, RT-PCR 检测结果表明, GV115-MK-1干扰效果明显,MK基因敲减效率达87.2%( P<0.05)。结论成功构建人MK RNAi慢病毒表达载体,并可有效抑制MDA-MB-231细胞MK基因的表达。王庆苓,张鹏 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
微小RNAs在乳腺癌中的应用价值
乳腺癌是目前女性最常见的恶性肿瘤,2012年全球共有170万乳腺癌新增病例,且乳腺癌的发病率和死亡率持续上升[1].肿瘤标志物在乳腺癌的早期诊断、个体化治疗、预后及疗效预测等方面发挥重要作用.目前常见的肿瘤标志物包括蛋白酶类、肿瘤特异性抗原、代谢产物等.然而,这些标志物特异性并不高,特别是在肿瘤早期筛查、良恶性肿瘤的区分和低度恶性肿瘤的诊断方面特异性较低[2].微小RNA(microRNA,miRNA)是一类朱安婕,袁芃 - 中华乳腺病杂志(电子版)文章来源： 万方数据 -
慢病毒载体介导的RNA干扰及其在T淋巴细胞的应用
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是普遍存在于生物体中的一种序列特异性的基因表达调控方式,它是由小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)介导的特异性降解mRNA的过程[1].T淋巴细胞是处于非分裂期的细胞,在移植物抗宿主病等疾病中起到重要作用,是基因治疗中常用的靶细胞.但在RNAi技术中,T淋巴细胞基因转导效率低而影杜晶晶,孙轶华 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
微小RNA-199a-5p调控大鼠心肌细胞肥大的研究
目的:探讨微小RNA-199a-5p(miR-199a-5p)在心肌肥大模型中的表达及对大鼠心肌细胞肥大的调控作用.方法:用腹主动脉缩窄术(TAAC)构建心肌肥大大鼠模型,体外培养新生Sprague-Dawley大鼠心肌细胞,用血管紧张素II(Ang II)诱导心肌细胞肥大,荧光定量PCR (qRT-PCR)检测动物血浆和心肌细胞miR-199a-5p含量;合成大鼠miR-199a-5p的拟似物(mimic)和抑制剂(inhibitor),用脂质体转染mimic和inhibitor进入心肌细胞,用qRT-PCR检测肥大基因心房钠尿因子和β-肌球蛋白重链mRNA的表达变化;用氚标亮氨酸掺入量检测细胞蛋白合成速率变化;用细胞荧光染色法检测细胞表面积变化.结果:TAAC 术后28 d,大鼠血浆miR-199a-5p的含量较对照组显著增加 (P<0.05),在Ang II诱导肥大的心肌细胞中,miR-199a-5p的表达量也较对照组显著增加.在心肌细胞中过表达miR-199a-5p,能使细胞肥大基因表达增加,蛋白合成速率加快,细胞表面积增大,而使用inhibitor阻遏miR-199a-5p的作用后,能抑制Ang II诱导的肥大基因表达、细胞蛋白合成速率和细胞表面积的变化.结论:心肌肥大动物和细胞模型中miR-199a-5p的表达发生上调.过表达miR-199a-5p能促进体外培养的心肌细胞肥大,而阻遏miR-199a-5p的作用能抑制Ang II诱导的心肌细胞肥大.张振辉,黎佼,熊旭明,陈伟燕,刘世明 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
蛋白激酶 Cε对肝癌 SK-H ep-1细胞生物学行为的影响
目的:使用小干扰RNA( siRNA)抑制人肝癌SK-Hep-1细胞中蛋白激酶Cε( PKCε)的表达并对抑制效果进行测定,检测沉默后SK-Hep-1细胞增殖和侵袭能力的变化。方法:培养SK-Hep-1细胞,分为PKCε-siR-NA组、阴性对照(NC-siRNA)组和未行处理(control)组。采用MTT比色法观察各组细胞增殖能力的变化,采用Tr-answell法观察各组细胞侵袭能力的变化,Western blotting观察细胞核增殖抗原Ki67、基质金属蛋白酶9( MMP-9)等功能蛋白的表达,萤光素酶报告基因检测NF-κB信号通路的活性。结果:与对照组相比, PKCε-siRNA组PKCεmRNA和蛋白表达水平都明显降低(P<0.01),Ki67和MMP-9蛋白表达水平降低,细胞增殖能力明显降低(P<0.01),PKCε-siRNA组穿过Transwell膜的细胞少于对照组(P<0.01),且NF-κB转录活性下降(P<0.01)。结论:通过siRNA技术降低PKCε表达可抑制肝癌SK-Hep-1细胞增殖及其侵袭能力,其抑制作用可能与抑制NF-κB通路的转录活性有关。- 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
人胰腺癌 PANC-1细胞裸鼠移植瘤模型建立及其用于观察载 siRNA 纳米微粒体内效应的研究
目的:探讨建立人胰腺癌PANC-1裸鼠移植瘤模型的最佳实验方法,并应用该模型进行载基因纳米微粒体内效应的研究。方法:将不同数量PANC-1细胞悬液接种于BALB/c (nu/nu)小鼠右侧背部皮下,当肿瘤体积达100 mm 3时尾静脉注射siRNACY 5.5纳米复合物进行活体荧光成像。此外,于尾静脉注射负载siRNA Kras纳米复合物,蛋白印迹及免疫组织化学染色法观察肿瘤组织Kras蛋白表达水平。结果:1×107 cells/300μL 接种成瘤率达100%,成瘤时间<2周。荧光呈像及组织学检查显示载siRNA纳米微粒可靶向聚集在肿瘤组织发挥体内基因沉默效应。结论:本研究报道的人胰腺癌裸鼠移植瘤模型建立方法成瘤率达100%,成瘤时间短,是研究药物示踪和观察疗效的理想模型。曾林涓,李景果,张秋波,钱辰琛,林忠,陈茵婷,黄开红 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
针对MAG,OMgp,NogoA基因的scFv(OMgp)-9R-siRNA复合物的制备和鉴定
目的 运用抗体靶向技术联合siRNA形成双特异性复合物scFv-9R-siRNA的高效递送系统,该系统通过抗OMgp的scFv把MAG,OMgp和Nogo A的特异性siRNA特异性运输至受损神经细胞,从而抑制这三种轴突抑制物的表达,改善脊髓损伤后的局部微环境,阻断这些髓磷脂相关抑制物对轴突再生的抑制作用,为后续的大鼠模型试验奠定基础.方法 (1)根据基因重组技术,利用制备好的高效抗OMgp单克隆抗体构建单链抗体scFv(OMgp),并在此基础上非共价合成针对MAG,OMgp,NogoA基因的scFv (OMgp)-9R-siRNA复合物;(2)体外鉴定scFv (OMgp)-9R-siRNA复合物效果:鉴定MAG,OMgp,NogoA三种抑制物的mRNA和蛋白表达水平,同时与非神经细胞对比,研究引入scFv后所产生的靶细胞特异性.结果 (1)成功制备抗大鼠OMgp单克隆抗体E811,并通过ELISA和Western blot对已制备的抗大鼠OMgp单克隆抗体E811进行了特异性和敏感性鉴定,在此基础上成功获得scFv (OMgp)-9R-siRNA复合物;(2)体外实验证实:scFv (OMgp)-9R-siRNA复合物同时特异性下调MAG,OMgp和Nogo A基因表达.结论 单链抗体技术(scFv)解决了siRNA的特异性导入受损神经元问题,为体内应用siRNA技术治疗脊髓损伤奠定了基础.马建国,严望军,刘铁龙,肖建如,周许辉,贾连顺 - 实验动物与比较医学文章来源： 万方数据 -
电动冻结破碎法提取组织蛋白和RNA的实验观察
随着肿瘤分子生物学研究的不断深入,检测肿瘤组织中mRNA和蛋白的表达有助于揭示肿瘤的发生、分子机制和寻找相关分子标志物.转录水平上可利用RT-PCR或cDNA芯片技术检测基因表达、转录组改变以及克隆肿瘤相关基因.蛋白水平上可利用Western blot法、2D电泳和飞行质谱技术检测肿瘤组织中蛋白表达和蛋白质学改变.这对提高检测敏感度和增加结果可信性,获得高质量RNA或蛋白样品十分关键.本组实验比较手动冻结破碎器具SK-100和普赵爽,勾文峰,杨雪峰,宋来,郑华川 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
竞争性内源RNA与肿瘤发生
微小RNA(microRNA,miRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)等转录物在肿瘤发生发展中发挥着重要作用[1-4],越来越多的研究表明,它们之间存在着复杂的网络关系[5-6].2011年,哈佛大学医学院的研究人员提出了竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)假说.该假说认为mRNA、lncRNA等转录物通过miRNA应答元件(miRNA response element,MRE)竞争性结合miRNA,从而相互调控各自的表达水平,进而影响各蔺新秀,杨蔓,夏天,郭俊明 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据
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