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Rock可能通过抑制PI3K/Akt通路促进缺氧诱导的心肌细胞凋亡
目的:通过建立体外心肌细胞缺氧模型,观察Rho相关的卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)在不同缺氧时点的表达,探讨其在心肌细胞凋亡中的作用.方法:(1)原代培养SD乳鼠心肌细胞,并用抗α-横纹肌肌动蛋白免疫组化法进行鉴定.(2)利用缺氧液和缺氧盒,建立心肌细胞缺氧模型,分别缺氧培养1 h、3 h、6 h、9 h,以正常氧培养的心肌细胞作为对照.(3)用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,MTT检测细胞存活率,Western blotting检测ROCK-1、ROCK-2、caspase-3活化片段、PI3K和p-PI3K的表达情况.结果:(1)缺氧1 h、3 h、6 h、9 h后,心肌细胞凋亡率分别为(8.76±1.51)%、(15.36±2.34)%、(26.50±3.43)%、(41.96±4.22)%,与对照组[2.60±0.34)%]比较均有显著差异(P<0.01);存活率分别为(93.20±4.12)%、(86.14±3.10)%、(75.53±7.25)%、(60.21±6.75)%,与对照组[(97.60±1.12)%]比较均有显著差异(P<0.05).(2)ROCK-1和ROCK-2缺氧1 h即开始升高,3~6 h表达达高峰,9 h开始回落,且均明显高于对照组(P<0.05).(3)Caspase-3在缺氧1 h开始逐渐活化,在随后观察的时点内持续处于活化状态,与对照组比较均有显著差异(P<0.01).(4)p-PI3K在缺氧1 h后开始升高,3 h达高峰,6 h开始回落,9 h表达基本消失,各时点比较差别有统计学意义(P<0.05).结论:ROCK-1和ROCK-2在缺氧后表达逐渐升高,与细胞凋亡的过程相一致.ROCK可能通过抑制p-PI3K信号途径,促进缺氧心肌细胞凋亡.董家龙,李菊香,孙国芳,洪葵 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
香烟烟雾提取物通过蛋白激酶 C-核因子相关因子2调节大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶1表达
目的:探讨蛋白激酶C(PKC)-红系衍生的核因子相关因子2(Nrf2)对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶1(HO-1)表达的影响。方法:通过CSE刺激雄性SD大鼠气道上皮细胞,使用PKC抑制剂RO318220和Nrf2 siRNA,将细胞分为对照组、CSE 3 h组、RO318220组、Nrf2 siRNA组和RO318220+Nrf2 siRNA组,用Western blotting法分别检测HO-1、Nrf2和p-PKC蛋白表达,免疫细胞化学法观察HO-1蛋白表达,逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)法检测HO-1 mRNA表达,免疫荧光法检测Nrf2蛋白定位,测定HO-1活性。结果:暴露CSE 3 h后,Nrf2蛋白主要表达在胞核,胞核蛋白表达增强,p-PKC蛋白、HO-1的mRNA和蛋白高表达, HO-1活性增强。预先给予RO318220,PKC蛋白、Nrf2胞浆和胞核蛋白、HO-1的mRNA和蛋白表达均明显减弱, HO-1活性显著降低。预先用siRNA沉默Nrf2,胞浆和胞核的Nrf2蛋白表达均减弱,HO-1活性、mRNA和蛋白水平明显降低。 RO318220联合Nrf2 siRNA处理后,PKC蛋白、Nrf2胞浆和胞核蛋白、HO-1 mRNA和蛋白表达均明显降低,HO-1活性明显降低。结论:CSE通过PKC激活Nrf2,诱导Nrf2核转位,从而上调HO-1的表达水平。江刚,张卫东 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
蛋白激酶 Cε对肝癌 SK-H ep-1细胞生物学行为的影响
目的:使用小干扰RNA( siRNA)抑制人肝癌SK-Hep-1细胞中蛋白激酶Cε( PKCε)的表达并对抑制效果进行测定,检测沉默后SK-Hep-1细胞增殖和侵袭能力的变化。方法:培养SK-Hep-1细胞,分为PKCε-siR-NA组、阴性对照(NC-siRNA)组和未行处理(control)组。采用MTT比色法观察各组细胞增殖能力的变化,采用Tr-answell法观察各组细胞侵袭能力的变化,Western blotting观察细胞核增殖抗原Ki67、基质金属蛋白酶9( MMP-9)等功能蛋白的表达,萤光素酶报告基因检测NF-κB信号通路的活性。结果:与对照组相比, PKCε-siRNA组PKCεmRNA和蛋白表达水平都明显降低(P<0.01),Ki67和MMP-9蛋白表达水平降低,细胞增殖能力明显降低(P<0.01),PKCε-siRNA组穿过Transwell膜的细胞少于对照组(P<0.01),且NF-κB转录活性下降(P<0.01)。结论:通过siRNA技术降低PKCε表达可抑制肝癌SK-Hep-1细胞增殖及其侵袭能力,其抑制作用可能与抑制NF-κB通路的转录活性有关。- 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
胰岛素及格列齐特治疗2型糖尿病大鼠肝脏脂质沉积的机制探讨
目的:探讨胰岛素及格列齐特治疗2型糖尿病对大鼠肝脏脂质沉积的影响及机制。方法:制备高脂及链脲佐菌素诱导的2型糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病组、胰岛素组和格列齐特组,并设正常对照组。通过肝脏油红O染色观察其肝细胞脂质沉积情况;ELISA检测血清脂联素水平;实时荧光定量PCR检测肝脏脂联素受体1(AdipoR1)mRNA表达;Western blotting检测肝脏腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化的腺苷酸活化蛋白激酶(Thr172p-AMPK)、固醇调节因子结合蛋白1c(SREBP-1c)、磷酸化的固醇调节因子结合蛋白1c(Ser372p-SREBP1-1c)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、磷酸化的乙酰辅酶A羧化酶(Ser79p-ACC)和免疫球蛋白结合蛋白(BiP)的表达。结果:糖尿病组肝细胞脂质沉积较正常对照组明显增多,胰岛素和格列齐特治疗后肝细胞脂质沉积明显改善。胰岛素治疗后,血清脂联素的水平及肝脏AdipoR1 mRNA水平较糖尿病组和正常对照组显著升高(P<0.01),而格列齐特治疗后两者水平恢复至正常对照组水平。 Western blotting 结果显示,糖尿病大鼠与正常对照组比较,肝脏Thr172p-AMPK/AMPK和Ser372p-SREBP-1c/SREBP-1c和Ser79p-ACC/ACC表达明显降低(P<0.01),BiP表达明显升高(P<0.01)。胰岛素治疗后,Thr172p-AMPK/AMPK和Ser372p-SREBP-1c/SREBP-1c显著升高(P<0.01), Ser79p-ACC/ACC和BiP蛋白表达恢复至正常对照组水平。而格列齐特治疗后Thr172p-AMPK/AMPK和Ser372p-SREBP-1c/SREBP-1c恢复至正常对照组水平,BiP蛋白表达显著下降(P<0.01),Ser79p-ACC/ACC与糖尿病组比较无明显改善。结论:胰岛素和格列齐特治疗均能通过激活脂联素-AMPK减轻2型糖尿病大鼠肝脏的脂质沉积。但两者作用的分子机制有所不同。胰岛素激活 AMPK,通过抑制SREBP-1c表达、直接磷酸化 SREBP-1c 抑制SREBP-1c入核等短期和长期的作用以及抑制内质网应激影响SREBP-1c,减少脂质合成;而格列齐特仅通过磷酸化的短期作用和抑制内质网应激对SREBP-1c产生影响,且对脂肪酸氧化无作用。- 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
肝细胞癌中p21活化蛋白激酶6的表达及意义
目的 探讨p21活化蛋白激酶(p21-activated protein kinase,PAK)6在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其意义.方法 采用Western blot技术检测8例HCC及对应癌旁正常组织中PAK6的表达,运用免疫组化SP法检测121例HCC组织及癌旁组织中PAK6的表达.结果 Western blot及免疫组化分析显示,PAK6在HCC组织中的表达明显高于对应癌旁组织.HCC中PAK6表达与HCC的Edmondson-steiner组织学分级和肿瘤结节数之间差异有统计学意义,PAK6表达与增殖指标Ki-67呈正相关(P<0.01).Kaplan-Meier生存曲线分析表明,高表达PAK6的HCC患者总生存率和无病生存率均显著降低(P均<0.001).单因素生存分析表明,PAK6的高表达与HCC患者预后不良有关(P<0.001).COX危险比例模型多因素分析显示,PAK6和Ki-67、肿瘤Edmondson-steiner分级、转移、肿瘤大小、肿瘤数目可作为HCC患者预后的独立指标.结论 PAK6在HCC组织中明显高表达,可作为HCC患者独立的预后指标,PAK6可能与肝癌的发生、发展密切相关.陈宏伟,王春华,李军良,朱勇,王建新,吴侠 - 临床与实验病理学杂志文章来源： 万方数据 -
青蒿素对实验性糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶 C移位活化的抑制作用
目的:探讨青蒿素对实验性糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶 C( PKC)由细胞浆到细胞膜移位活化的抑制作用。方法将实验大鼠随机分为对照组( A 组)、糖尿病非治疗组( B组)及糖尿病青蒿素治疗组(C 组),B 组、C 组采用腹腔单剂量注射链脲佐菌素( STZ)65 mg /kg 的方法建立糖尿病大鼠模型,造模后 C 组采用青蒿素300 mg /( kg·d)腹腔注射。于实验进行到第3周、第6周时分别宰杀大鼠6只,测算肌酐清除率( Ccr)、24 h 尿白蛋白排泄率(UAER)及肾脏系数(肾脏质量/体质量);采用酶联免疫吸附法( ELISA)测定 PKC 的活性。结果 B 组大鼠 Ccr、UAER、肾脏细胞膜 PKC 活性及肾脏系数均较 A 组明显升高( P ﹤0.05或0.01);C 组大鼠上述指标均较 B 组明显下降(P ﹤0.05或0.01)。结论青蒿素通过抑制糖尿病大鼠肾脏细胞 PKC 移位活化而对糖尿病大鼠早期肾脏病变起到保护作用。- 现代中西医结合杂志文章来源： 万方数据 -
组蛋白去乙酰化抑制剂SBHA对急性髓细胞白血病细胞的杀伤作用
目的:观察组蛋白去乙酰化抑制剂suberic bishydroxamate( SBHA)对人急性髓系白血病(AML)细胞株的杀伤作用.方法:将不同浓度的SBHA分别作用于对数生长期的AML细胞24 h,MTT比色法检测药物对细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术(FACS)检测细胞凋亡率,Westernblot法检测药物处理后Caspase途径和凋亡相关蛋白的改变.结果:SBHA能显著抑制AML细胞株U937ˉ、KG-1及Kasumi-1细胞的生长.AnnexinV-PI双标记法及FACS分析结果证实,SBHA能显著诱导白血病细胞的凋亡,激活Caspase-3、Caspase-9、Caspase-8,下调抗凋亡蛋白Bcl-2及Bcl-xl的表达,下调Survivin、XIAP及cIAP的表达.结论:组蛋白去乙酰化抑制剂SBHA能显著抑制人AML细胞株的增殖、促进其凋亡,对凋亡相关蛋白的调控是其作用机制之一.徐燕华,杨春梅,钱文斌 - 浙江大学学报(医学版)文章来源： 万方数据 -
上调糖皮质诱导型蛋白激酶-1能够保护Aβ_(1~42)诱导的细胞凋亡
目的 探讨上调糖皮质诱导型蛋白激酶(SGK-1)能否保护Aβ1~42诱导的细胞毒性及其保护机制.方法 在HEK293细胞中给予不同浓度Aβ1 ~42聚集体处理,摸索合适的诱导细胞毒性的浓度.HEK293细胞转染SGK-1质粒24h后再给予Aβ1~42处理24h,通过细胞活性分析以及Western印迹实验检测凋亡相关通路变化.结果 过表达SGK-1能够明显改善HEK293细胞由Aβ1~42诱导的细胞毒性(P<0.05),SGK-1的上调伴随着JNK-1 (P <0.01)和Caspase-3的抑制(P<0.05).结论 上调SGK-1可能通过抑制JNK-1的激活从而抑制Caspase-3的活化来保护细胞,上调SGK-1可以作为治疗阿尔茨海默病(AD)患者Aβ细胞毒性的保护靶点.孙秋云,刘琳,张新华 - 中国老年学杂志文章来源： 万方数据 -
MR-1通过抑制PERK/Nrf2途径减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡
目的:研究肌原纤维形成调节因子1 (MR-1)是否通过抑制蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)途径减轻缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞凋亡.方法:在原代培养的乳大鼠心肌细胞H/R模型上,采用Annexin V/PI双标法检测心肌细胞的凋亡率;以Western blotting检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化PERK、Nrf2、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、Bcl-2和Bax的蛋白水平,研究过表达或敲低对于H/R致心肌细胞凋亡的影响及其与PERK/Nrf2途径活化的关系.结果:H/R引起心肌细胞凋亡;过表达MR-1减轻H/R引起的细胞凋亡(P<0.01),下调CHOP表达(P<0.05),引起Bcl-2/Bax值升高(P<0.01),并抑制H/R诱导的PERK磷酸化、Nrf2核转位和ATF4表达(P<0.01).敲低MR-1加重H/R引起的细胞凋亡(P<0.01)、CHOP表达上调(P<0.05)和Bcl-2/Bax值下降(P<0.01),并加重H/R诱导的PERK磷酸化(P<0.05)、Nrf2核转位和ATF4表达(P<0.01).结论:MR-1通过抑制PERK/Nrf2途径而减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡.陶天琪,王晓礽,徐菲菲,刘蜜,李玉珍,刘秀华 - 中国病理生理杂志文章来源： 万方数据 -
Aurora激酶抑制剂ENMD-2076对人急性髓系白血病细胞的杀伤作用
目的:观察Aurora激酶抑制剂ENMD-2076对人急性髓系白血病(AML)细胞株的杀伤作用.方法:将不同浓度的ENMD-2076分别作用于对数生长期的AML细胞24 h、48 h,采用MTT比色法检测药物对细胞的生长抑制作用;应用Hoechst荧光染色法检测细胞凋亡率,Western blot法检测药物处理后Caspase途径和凋亡相关蛋白的改变.结果:ENMD-2076能显著抑制AML细胞株THP-1和Kasumi-1的生长(P <0.001),24 h时对THP-1和Kasumi-1的半数抑制浓度分别是9.32μmol/L和7.23 μmol/L.Hoechst荧光染色证实ENMD-2076能使THP-1细胞发生染色质浓缩等凋亡改变.Western blot检测证实,ENMD-2076能激活Caspase-3、Caspase-9、Caspase-8和PARP,上调促凋亡蛋白Bak、Bax、Bad和Bim,下调抗凋亡蛋白Mcl-1的表达.结论:Aurora激酶抑制剂ENMD-2076能显著抑制人AML细胞株THP-1和Kasumi-1的增殖并促进其凋亡,对凋亡相关蛋白的调控是其作用机制之一.曹慧,李敏,钱文斌 - 浙江大学学报(医学版)文章来源： 万方数据
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